劉 玲，陳晴清，李 華，劉潤(rùn)妮，王 崢

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川芎嗪和葛根素配伍使用對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響

劉 玲，陳晴清，李 華，劉潤(rùn)妮，王 崢

目的 觀察川芎嗪和葛根素合適配伍對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法 雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組，每組8只。假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水；川芎嗪組給予川芎嗪50 mg/kg；葛根素組給予葛根素50 mg/kg；川芎嗪+葛根素組給予川芎嗪50 mg/kg，葛根素50 mg/kg；陽(yáng)性對(duì)照組給予依達(dá)拉奉3 mg/kg。給藥方式均為腹腔注射，給藥時(shí)間為缺血后0 h、6 h。通過(guò)神經(jīng)功能評(píng)分Western Blot檢測(cè)缺血區(qū)腦組織凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2的表達(dá)和組織免疫熒光標(biāo)記觀察川芎嗪和葛根素配伍對(duì)腦缺血損傷后的細(xì)胞凋亡影響情況。結(jié)果 川芎嗪+葛根素組腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評(píng)分為(1.83±0.41)分，較模型組(2.67分±0.52分)明顯降低(P<0.01)。與模型組相比，川芎嗪+葛根素組促凋亡相關(guān)基因Bax蛋白表達(dá)降低，抗凋亡相關(guān)基因Bcl-2蛋白表達(dá)增加。結(jié)論 川芎嗪和葛根素配伍治療腦缺血可能是通過(guò)降低缺血腦組織促凋亡相關(guān)蛋白和增加抗凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)而達(dá)到治療效果。

腦缺血；川芎嗪；葛根素；神經(jīng)細(xì)胞凋亡；促凋亡相關(guān)基因

缺血性卒中在成人中具有高患病率且患病后死亡率、致殘率居于首位，但目前仍缺乏有效的治療手段?，F(xiàn)代藥理研究表明：川芎嗪對(duì)缺血性腦血管疾病有顯著療效。葛根素廣泛用于心腦血管疾病，具有明顯的療效。臨床上，川芎嗪與葛根素常配伍治療缺血性腦血管病具有協(xié)同作用。文獻(xiàn)報(bào)道：葛根和川芎配伍能協(xié)同改善大鼠腦缺血-灌注損傷，其機(jī)制之一是葛根素與川芎嗪配伍協(xié)同抵抗自由基損傷[1]。但迄今沒有川芎嗪和葛根素配伍對(duì)腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響的研究報(bào)道。因此，本研究探討川芎嗪和葛根素配伍是否能通過(guò)協(xié)同作用抑制細(xì)胞凋亡而發(fā)揮其對(duì)缺血腦組織的保護(hù)作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 從揚(yáng)州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心選購(gòu)48只雄性SD大白鼠，體重280 g～300 g，清潔級(jí)，大鼠購(gòu)回后按照常規(guī)給食水，白晝/黑夜交替、室溫26 ℃環(huán)境飼養(yǎng)。將48只雄性SD大白鼠隨機(jī)分為6組，每組8只。假手術(shù)組、模型組給予等量生理鹽水；川芎嗪組給予川芎嗪50 mg/kg；葛根素組給予葛根素50 mg/kg；川芎嗪+葛根素組給予川芎嗪50 mg/kg，葛根素50 mg/kg；陽(yáng)性對(duì)照組給予依達(dá)拉奉3 mg/kg。給藥方式均為腹腔注射，給藥時(shí)間為缺血后0 h、6 h。

2 結(jié) 果

2.1 各組Zea-Longa神經(jīng)功能評(píng)分比較 川芎嗪+葛根素組、陽(yáng)性對(duì)照組腦缺血損傷大鼠神經(jīng)功能評(píng)分較模型組明顯降低(P<0.01)。詳見表1。

組別神經(jīng)功能評(píng)分假手術(shù)組0.41±0.167模型組2.67±0.52川芎嗪組2.33±0.52葛根素組2.17±0.41川芎嗪+葛根素組1.83±0.411)陽(yáng)性對(duì)照組1.17±0.631) 與模型組相比,1)P<0.01。

2.2 腦組織凋亡免疫熒光染色 Bax、Bcl-2均呈紅色熒光表達(dá)于胞漿，核呈藍(lán)色。促凋亡蛋白Bax在模型組表達(dá)較假手術(shù)組明顯增加，川芎嗪組和葛根素組則Bax蛋白表達(dá)下降，川芎嗪+葛根素組隨劑量增加熒光強(qiáng)度進(jìn)一步下降，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組?？沟蛲龅鞍譈cl-2在模型組表達(dá)低于假手術(shù)組，川芎嗪組和葛根素組熒光強(qiáng)度較模型組增加，而川芎嗪+葛根素組隨劑量增加，Bcl-2熒光強(qiáng)度進(jìn)一步增加，和陽(yáng)性對(duì)照組相似。

2.3 缺血腦組織凋亡相關(guān)蛋白表達(dá) 凋亡相關(guān)蛋白Western blot結(jié)果趨勢(shì)和熒光標(biāo)記結(jié)果相同。模型組促凋亡相關(guān)蛋白Bax表達(dá)較假手術(shù)組高，川芎嗪組和葛根素組Bax蛋白表達(dá)較模型組下降，川芎嗪+葛根素組隨治療劑量增加呈下降趨勢(shì)，有一定量效關(guān)系，近似或優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照組。詳見圖1。

注：1代表假手術(shù)組；2代表模型組；3代表葛根素組；4代表川芎嗪組；5代表川芎嗪+葛根素組；6代表陽(yáng)性對(duì)照組。

3 討 論

腦缺血是老年人高發(fā)疾病，致死致殘率高。中醫(yī)藥是一個(gè)巨大傳統(tǒng)資源寶庫(kù)，中藥有效成分配伍已成為中醫(yī)藥現(xiàn)代化的新模式，協(xié)同作用可提高療效。川芎嗪有抗血小板聚集、擴(kuò)張小動(dòng)脈、改善微循環(huán)和腦血流的作用。臨床常用于閉塞性血管疾病、腦血栓形成、脈管炎、冠心病、心絞痛等。葛根素具有退熱、鎮(zhèn)靜和使冠狀動(dòng)脈血流量增加的作用，對(duì)垂體后葉素引起的急性心肌出血有保護(hù)作用。臨床上用于冠心病心絞痛、高血壓。但以往研究?jī)烧吲湮橹委熌X缺血的文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示：川芎嗪和葛根素配伍能明顯降低神經(jīng)功能評(píng)分，對(duì)缺血腦組織有一定的保護(hù)作用。

川芎嗪減輕腦缺血損失是通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)NOS磷酸化[2]或PI3K/Akt/GSK3β[3]實(shí)現(xiàn)。也有文獻(xiàn)報(bào)道：川芎嗪可通過(guò)抑制還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)增強(qiáng)抗氧化能力實(shí)現(xiàn)腦缺血損傷后的保護(hù)作用[4]。我國(guó)有學(xué)者報(bào)道川芎嗪具有抑制自由基反應(yīng)造成的脂質(zhì)過(guò)氧化而降低脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)含量，增加一氧化氮(NO)含量和降低中分子物質(zhì)(MMS)總量有關(guān)[5]。

葛根素是從中藥葛根中分離的具有擴(kuò)冠作用的異黃酮類衍生物，存在于豆科植物野葛的根。具有退熱、鎮(zhèn)靜和使冠狀動(dòng)脈血流量增加的作用，對(duì)垂體后葉素引起的急性心肌出血有保護(hù)作用。葛根素對(duì)過(guò)氧化物歧化酶(SOD)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、丙二醛(MDA)及PI3K/Akt、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)信號(hào)通路影響最為重要[6]。葛根素能明顯降低缺血心肌的耗氧量，保護(hù)心臟免受缺血再港灌注所致的超微結(jié)構(gòu)損傷，并發(fā)現(xiàn)其改善是通過(guò)一種重要的心肌保護(hù)蛋白PKCepsilon所介導(dǎo)[7-8]。此外，葛根素不僅改善人體的正常腦微循環(huán)，而且對(duì)微循環(huán)障礙也有明顯的改善作用，主要表現(xiàn)為局部微血管血流和運(yùn)動(dòng)的幅度增加。

川芎嗪和葛根素伍用可能發(fā)揮協(xié)同作用，減少單用時(shí)的不良反應(yīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道川芎嗪和葛根素伍用能增加SOD抗氧化酶表達(dá)，降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA和NO含量，顯示了兩者伍用對(duì)腦缺血再灌注損傷的重要保護(hù)作用[9]。本研究通過(guò)探討兩者伍用調(diào)節(jié)腦缺血損傷后腦細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)來(lái)達(dá)到保護(hù)作用，進(jìn)一步豐富了川芎嗪和葛根素兩者伍用對(duì)腦缺血損傷保護(hù)機(jī)制的理解，同時(shí)提示傳統(tǒng)中藥伍用對(duì)腦缺血損傷的治療具有重要價(jià)值。

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(本文編輯郭懷印)

廣東省珠海市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015J009)

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引用信息：劉玲，陳晴清，李華，等.川芎嗪和葛根素配伍使用對(duì)腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2016，14(22)：2624-2626.

R743 R255.2

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2016-02-11)