邵 棋， 曹 斐， 李 梅， 張 艷

(1南通大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤化療科，江蘇 南通 226001； 2蘇州市立醫(yī)院北區(qū)腫瘤內(nèi)科，江蘇 蘇州 215008)

Integrin β1對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901多藥耐藥性的影響

邵 棋1， 曹 斐2△， 李 梅1， 張 艷1

(1南通大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤化療科，江蘇 南通 226001；2蘇州市立醫(yī)院北區(qū)腫瘤內(nèi)科，江蘇 蘇州 215008)

目的： 探究整合素β1(integrin β1)對(duì)胃癌多藥耐藥性的影響及可能的作用機(jī)制。方法:Western blot法及qPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞株SGC-7901及胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/DDP中integrin β1的表達(dá)情況。采用integrin β1反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染，敲減胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/DDP中integrin β1的表達(dá)，CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，Western blot法檢測(cè)integrin β1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、細(xì)胞色素C(Cyt-C)和p-AKT/AKT的蛋白水平。結(jié)果:耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP中integrin β1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯高于親本細(xì)胞株；并且在親本細(xì)胞株SGC7901中加入順鉑、長(zhǎng)春新堿及5-氟尿嘧啶等化療藥物刺激后，integrin β1的蛋白表達(dá)水平明顯升高。敲減integrin β1的表達(dá)可誘導(dǎo)胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP的凋亡，增加細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性；此外下調(diào)Bcl-2/Bax、p-AKTSer473和p-AKTThr308的蛋白水平，同時(shí)促進(jìn)線粒體Cyt-C的釋放，上調(diào)cleaved caspase-3的蛋白水平。結(jié)論:敲減胃癌順鉑耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP的integrin β1表達(dá)可恢復(fù)細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，促進(jìn)細(xì)胞經(jīng)線粒體路徑的凋亡，其機(jī)制可能與抑制AKT的磷酸化，阻斷該信號(hào)通路有關(guān)。

整合素β1； 胃癌； 多藥耐藥性； 細(xì)胞凋亡； AKT

胃癌是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤。隨著認(rèn)知及科技的發(fā)展，目前針對(duì)胃癌的治療手段如放化療、手術(shù)治療及靶向分子療法都有了長(zhǎng)足的進(jìn)展，但其發(fā)病率及死亡率仍然居高不下，特別是腫瘤細(xì)胞耐藥性的出現(xiàn)，大大降低了藥物的療效[1-3]。因此，探討胃癌多藥耐藥的相關(guān)機(jī)制并尋找可以逆轉(zhuǎn)耐藥性的潛在靶點(diǎn)，對(duì)于提高治療效果和患者生存率具有重要的臨床意義。

腫瘤的多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)是指腫瘤細(xì)胞對(duì)某一化療藥物產(chǎn)生耐藥性之后，會(huì)對(duì)作用機(jī)制相異的其它類抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥的現(xiàn)象[4]。研究表明腫瘤細(xì)胞多藥耐藥的產(chǎn)生包括先天性和獲得性2種，但獲得性耐藥在臨床上出現(xiàn)的幾率較高，且其機(jī)制可能有以下幾個(gè)方面[5-10]：(1) ABC型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族(ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，ATP-binding cassette transporter proteins，ABC proteins)介導(dǎo)的藥物外排作用增強(qiáng)；(2) DNA損傷修復(fù)功能加強(qiáng)；(3) 谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase，GST)解毒能力增強(qiáng)或多藥耐藥基因異常表達(dá)；(4) 細(xì)胞抗凋亡作用增強(qiáng)；(5) 細(xì)胞自噬活性增強(qiáng)及異常的微小RNA(microRNAs，miRNAs)表達(dá)等。

整合素β1 (integrin β1)是整合素家族的重要一員，該家族蛋白是介導(dǎo)細(xì)胞黏附和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的跨膜糖蛋白，通過(guò)傳導(dǎo)胞內(nèi)外的信號(hào)，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、黏附及遷移等過(guò)程，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移及腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)[11-12]。大量研究發(fā)現(xiàn)，在包括胃癌[13]、舌鱗狀細(xì)胞癌[14]、宮頸鱗癌[15]等多種實(shí)體腫瘤中都出現(xiàn)integrin β1的高表達(dá)，且與腫瘤的病理分級(jí)及惡性程度密切相關(guān)；此外有研究表明，integrin β1的異常表達(dá)在腫瘤的化療耐藥中起著重要的作用，Deng等[16]的研究提示integrin β1可介導(dǎo)腫瘤血管新生及下游AKT信號(hào)通路的活化，進(jìn)而參與腫瘤EGFR TKI耐藥；而Dong等[17]的研究則表示integrin β1可通過(guò)與胞外基質(zhì)的相互作用引起PI3K/AKT的持續(xù)活化，進(jìn)而介導(dǎo)抗凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。這些研究提示integrin β1在腫瘤多藥耐藥中可能也發(fā)揮一定的作用。但是integrin β1在胃癌多藥耐藥中的作用并沒(méi)有明確的闡釋。本文通過(guò)integrin β1反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默細(xì)胞中內(nèi)源性integrin β1的表達(dá)，研究integrin β1在胃癌細(xì)胞多藥耐藥中的作用及其相關(guān)作用機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 材料與試劑

胃癌細(xì)胞株SGC-7901及胃癌耐藥細(xì)胞株SGC-7901/DDP購(gòu)買(mǎi)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)；胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)、RPMI-1640培養(yǎng)基及Opti-MEM培養(yǎng)基均購(gòu)買(mǎi)于Gibco；LipofectamineTM2000、相關(guān)轉(zhuǎn)染試劑及SYBR Green I qPCR試劑盒由Invitrogen提供；胞漿線粒體蛋白分離試劑盒購(gòu)于Thermo；COX IV抗體購(gòu)于碧云天公司；抗integrin β1、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、caspase-3、細(xì)胞色素C (cytochrome C, Cyt-C)、AKT、p-AKT、GAPDH及β-actin單克隆抗體購(gòu)自 Santa Cruz；CCK-8細(xì)胞活力分析試劑盒購(gòu)買(mǎi)于Dojindo；細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)買(mǎi)于凱基公司；順鉑購(gòu)買(mǎi)于齊魯制藥公司；紫杉醇(paclitaxel, PTX)購(gòu)買(mǎi)于海南海藥股份有限公司；5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)購(gòu)買(mǎi)于上海旭東海普藥業(yè)有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)市售分析純。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10% FBS 的RPMI-1640培養(yǎng)基中，細(xì)胞培養(yǎng)箱的條件設(shè)置為37 ℃、飽和濕度、5% CO2。每2 d換液1次，每3～5 d用0.25%胰酶消化、傳代。

2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qPCR)檢測(cè)integrin β1的mRNA表達(dá) 參照操作手冊(cè)用TRIzol一步法抽提細(xì)胞總RNA。取2 μg總RNA行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)(終體積為20 μL)，采用SYBR Green qPCR方法檢測(cè)mRNA的表達(dá)。Integrin β1的正向引物為5’-AATGAAGGGCGTGTTGGTAG-3’，反向引物為5’-CTGCCAGTGTAGTTGGGGTT-3’；GAPDH作為內(nèi)參照，正向引物為5’-ATGCTGGCGCTGAGTACGTC-3’，反向引物為5’- GGTCATGAGTCCTTCACGATA-3’。PCR反應(yīng)體系包括1 μL RT逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，10 μL SYBR Green PCR Master Mix和500 nmol/L正反向引物。采用MyiQ單色實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)系統(tǒng)(Bio-Rad)。反應(yīng)參數(shù)為：95 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s，40個(gè)循環(huán)。采用BANK SKAN圖像分析系統(tǒng)分析基因的相對(duì)表達(dá)量。

2.3 細(xì)胞化療藥物敏感性的檢測(cè) 采用CCK-8法檢測(cè)胃癌細(xì)胞化療藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞以1×108/L密度接種于96孔板中，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%～90%融合時(shí)更換無(wú)血清培養(yǎng)基同步化12 h，然后加入終濃度分別為0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 mg/L的順鉑、PTX或5-FU，繼續(xù)培養(yǎng)46 h，加入CCK-8試劑100 μL孵育2 h，測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的吸光度(A)，計(jì)算細(xì)胞的生存率。

2.4 反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染敲減integrin β1的表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞以1×108/L密度接種于6孔板中，待細(xì)胞長(zhǎng)至60%～80%融合時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。組別為空白對(duì)照(control，Ctrl)組、陰性對(duì)照(nonsense oligodeoxynucleotide，NSODN)組和實(shí)驗(yàn)組(ASODN組)。將上述寡核苷酸分別溶解于Opti-MEM培養(yǎng)基中，室溫靜置5 min，為A液；另取LipofectamineTM2000，溶解于Opti-MEM培養(yǎng)基中，室溫靜置5 min，為B液；輕柔混合A液和B液，室溫靜置25 min，形成復(fù)合體。將復(fù)合體加入相應(yīng)組別的細(xì)胞中，室溫孵育4 h后更換為正常細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48 h。檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率并進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)分析。integrin β1的ASODN序列為 5’-T*G*CAGTAAGCATCCAT*G*T-3’；無(wú)意義NSODN序列為 5’-G*C*AACGAGAGAGCCGT*C*G-3’。

2.5 細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，將各組細(xì)胞消化后1 000×g離心5 min收集細(xì)胞，然后加入binding buffer 重懸細(xì)胞。向細(xì)胞懸液中加入Annexin V-FITC混勻，室溫避光靜置10 min；然后加碘化丙啶(propidium iodide，PI)染液，室溫下避光染色10 min，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488 nm；發(fā)射波長(zhǎng)Em=530 nm。

2.6 Western blot法檢測(cè)蛋白水平 收集各組蛋白樣品，其中胞漿線粒體蛋白的分離依據(jù)Thermo的線粒體分離提取試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白定量，調(diào)整各組蛋白上樣量(80 μg)后加入4倍體積的上樣緩沖液，98 ℃水浴變性5 min。上樣后采用8%的分離膠行SDS-PAGE，而后將蛋白電轉(zhuǎn)至PVDF膜(約90 min)，5%脫脂牛奶室溫封閉90 min，加入相應(yīng)比例的 I 抗4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗滌5 min 3次；分別加入相應(yīng)的抗HRP標(biāo)記的 II 抗，室溫孵育90 min，TBST洗滌10 min 3次。于暗室中將PVDF膜的蛋白面浸入HRP-ECL發(fā)光液中激發(fā)熒光，壓X片、顯影并定影。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用ImageJ灰度分析軟件進(jìn)行蛋白半定量分析。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將本組研究涉及數(shù)據(jù)錄入SPSS 13.0標(biāo)準(zhǔn)版統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組間比較采用方差分析，各組均數(shù)間的兩兩比較用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 integrin β1的表達(dá)與胃癌細(xì)胞化療耐藥之間的關(guān)系

我們首先檢測(cè)了胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP及其對(duì)照親本細(xì)胞株SGC7901中化療藥物的IC50(表1)，結(jié)果證明SGC7901/DDP對(duì)不同化療藥物的耐藥性明顯強(qiáng)于其親本細(xì)胞株。同時(shí)我們還檢測(cè)了這2株細(xì)胞中integrin β1的mRNA及蛋白表達(dá)情況，如圖1所示，耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP中integrin β1的mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯高于親本細(xì)胞株；此外，在親本細(xì)胞株SGC7901中，加入低濃度化療藥物刺激后，integrin β1的蛋白表達(dá)水平明顯升高(圖2)，提示integrinβ1的表達(dá)可能與胃癌多藥耐藥性之間存在相關(guān)關(guān)系。

表1 胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性

Table 1.The sensitivity (IC50) of GC cells to chemotherapeutics (mg/L. Mean±SD.n=6 )

CelllineCisplatinPTX5-FUSGC7901/DDP5.52±0.21*3.67±0.33*4.52±0.46*SGC79010.61±0.020.42±0.030.73±0.05

*P<0.05vsSGC7901.

Figure 1.The relationship between integrin β1 expression and multidrug resistance in the gastric cancer cells. Mean±SD.n=6.*P<0.05vsSGC7901 cells.

圖1 integrin β1的表達(dá)與胃癌細(xì)胞多藥耐藥性之間的關(guān)系

Figure 2.The protein expression of integrin β1 was increased in the SGC7901 cells treated with chemotherapeutic agents. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol (Ctrl).

圖2 SGC7901細(xì)胞與低濃度化療藥物共培養(yǎng)后，integrin β1的表達(dá)升高

2 轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)

用qPCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP轉(zhuǎn)染ASODN后integrin β1的表達(dá)情況，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染integrin β1 ASODN后，細(xì)胞中integrin β1的mRNA及蛋白水平明顯降低(P<0.05),見(jiàn)圖3。

3 敲減integrin β1對(duì)耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP化療敏感性的影響

為進(jìn)一步證明integrin β1的表達(dá)與胃癌細(xì)胞多藥耐藥之間的相互關(guān)系，我們?cè)谀退幖?xì)胞株SGC7901/DDP中敲減integrin β1，并檢測(cè)其對(duì)化療藥物敏感性的變化，CCK-8實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，敲減SGC7901/DDP細(xì)胞的integrin β1表達(dá)后，細(xì)胞對(duì)順鉑、紫杉醇及5-FU的敏感性明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)，見(jiàn)表2。

Figure 3.The expression of integrin β1 in the SGC7901/DDP cells after transfected with integrin β1 ASODN. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol (Ctrl).

圖3 SGC7901/DDP細(xì)胞轉(zhuǎn)染integrin β1 ASODN后integrin β1的表達(dá)水平

表2 敲減integrin β1可提高耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP對(duì)化療藥物的敏感性

Table 2.Knockdown of integrin β1 increased the sensitivity (IC50) of SGC-7901/DDP cells to chemotherapeutics (mg/L. Mean±SD.n=6)

GroupCisplatinPTX5-FUControl5.56±0.213.67±0.324.54±0.46NSODN5.61±0.233.66±0.294.51±0.38ASODN1.89±0.11*1.04±0.09*2.21±0.14*

*P<0.05vscontrol.

4 敲減integrin β1對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

接著我們考察了敲減integrin β1表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果顯示，在SGC7901/DDP細(xì)胞中敲減integrin β1之后，早期凋亡率由(17.13±2.43)%增加至(43.29±2.48)%(P<0.05)。而中晚期細(xì)胞凋亡/壞死率由(9.37±1.02)%增加至(13.56 ± 2.43)%。抑制integrin β1的表達(dá)可明顯促進(jìn)耐藥細(xì)胞的凋亡，見(jiàn)圖4。

5 敲減integrin β1對(duì)凋亡相關(guān)信號(hào)通路的影響

Western blot實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果顯示，敲減SGC7901/DDP細(xì)胞的integrin β1表達(dá)之后，抑凋亡蛋白Bcl-2及線粒體Cyt-C的表達(dá)顯著下降，而凋亡蛋白Bax、胞漿Cyt-C和激活型caspase-3的蛋白水平明顯增加，提示線粒體凋亡信號(hào)通路被激活，見(jiàn)圖5。

除此之外，我們還檢測(cè)了AKT信號(hào)通路的磷酸化情況，結(jié)果顯示，敲減SGC7901/DDP細(xì)胞中integrin β1的表達(dá)之后，Ser473 和Thr308位AKT的磷酸化水平顯著降低，但是對(duì)AKT總蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯影響，提示敲減integrin β1可抑制耐藥細(xì)胞中AKT信號(hào)通路的磷酸化活化，見(jiàn)圖6。

Figure 4.The effect of integrin β1 knockdown on the SGC7901/DDP cell apoptosis analyzed by flow cytometry. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol (Ctrl).

圖4 敲減integrin β1對(duì)SGC7901/DDP細(xì)胞凋亡的影響

Figure 5.The effect of integrin β1 knockdown on the mitochondrial apoptosis pathway in the SGC7901/DDP cells. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol (Ctrl).

圖5 敲減integrin β1 過(guò)表達(dá)對(duì)線粒體凋亡信號(hào)通路的影響

討 論

Integrin β1已被證實(shí)是一種重要的參與腫瘤細(xì)胞黏附轉(zhuǎn)移的分子，作為一類跨膜蛋白，它還介導(dǎo)了細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，并與腫瘤獲得性耐藥的出現(xiàn)密切相關(guān)[13,16-17]。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌耐藥細(xì)胞株SGC7901/DDP中integrin β1的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著增加，且低濃度化療藥物刺激可引起SGC7901細(xì)胞中integrin β1的表達(dá)，提示integrin β1可能參與調(diào)控胃癌化療耐藥現(xiàn)象的發(fā)生。此外通過(guò)轉(zhuǎn)染integrin β1反義寡核苷酸敲減其表達(dá)，可提高耐藥細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。因此我們認(rèn)為，integrin β1介導(dǎo)胃癌化療耐藥性的出現(xiàn)。

為進(jìn)一步了解integrin β1介導(dǎo)胃癌化療耐藥的作用機(jī)制，我們檢測(cè)了耐藥細(xì)胞SGC7901/DDP敲減integrin β1后細(xì)胞的凋亡水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲減integrin β1可促進(jìn)SGC7901/DDP的凋亡。由此我們認(rèn)為，敲減integrin β1提高胃癌耐藥細(xì)胞的化療敏感性可能是通過(guò)促進(jìn)耐藥細(xì)胞的凋亡實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞的凋亡是一個(gè)涉及多條信號(hào)通路、調(diào)控精細(xì)復(fù)雜的過(guò)程。目前認(rèn)為細(xì)胞的凋亡途徑包括死亡受體通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和線粒體途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[18-19]。實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，integrin β1敲減可促進(jìn)耐藥細(xì)胞中促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)；同時(shí)促進(jìn)線粒體細(xì)胞色素C的釋放，激活死亡蛋白酶caspase家族中的關(guān)鍵效應(yīng)蛋白分子caspase 3。結(jié)果表明，沉默integrin β1提高胃癌耐藥細(xì)胞的化療敏感性可能與線粒體凋亡信號(hào)通路的激活有關(guān)。近來(lái)研究表明AKT信號(hào)通路也參與調(diào)控細(xì)胞的凋亡過(guò)程[20-21]，故而我們還檢測(cè)了integrin β1對(duì)AKT信號(hào)通路的影響，結(jié)果表明沉默integrin β1可抑制AKT Ser473及Thr308位點(diǎn)的磷酸化，進(jìn)而阻斷AKT信號(hào)通路的活化；但是除AKT磷酸化信號(hào)通路之外，是否還有其它信號(hào)通路的參與及其具體的調(diào)控機(jī)制還有待進(jìn)一步深入的研究。

Figure 6.The effect of integrin β1 knockdown on the activation of AKT. Mean±SD.n=6.*P<0.05vscontrol (Ctrl).

圖6 敲減integrin β1 過(guò)表達(dá)對(duì)AKT活性的影響

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Effect of integrin β1 on multidrug resistance in gastric cancer SGC-7901 cells

SHAO Qi1, CAO Fei2, LI Mei1, ZHANG Yan1

(1DepartmentofOncochemotherapy,AffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong226001,China;2DepartmentofOncology,NorthDistrictofSuzhouMunicipalHospital,Suzhou215008,China.E-mail:drcaofei@126.com)

AIM: To study the effect of integrin β1 on multidrug resistance in gastric cancer and its possible mechanisms. METHODS: The expression of integrin β1 at mRNA and protein levels in the SGC-7901 cells and SGC-7901/DDP cells was determined by qPCR and Western blot. The expression of integrin β1 in the SGC-7901/DDP cells was silenced by antisense oligodeoxynucleotide. The cell viability was detected by the CCK-8 assay, the cell apoptosis were analyzed by flow cytometry, and the protein levels of integrin β1, Bcl-2/Bax, cleaved caspase-3/caspase-3, cytochrome C (Cyt-C) and p-AKT/AKT were determined by Western blot.RESULTS: The expression of integrin β1 at both mRNA and protein levels was significantly upregulated in SGC-7901/DDP cells. The expression of integrin β1 was increased in SGC-7901 cells treated with chemotherapeutic agents such as cisplatin, paclitaxel and 5-fluorouracil. Knockdown of integrin β1 induced apoptosis of SGC-7901/DDP cells with an increased sensitivity to the chemotherapeutic agents. Meanwhile, knockdown of integrin β1 downregulated the protein levels of Bcl-2/Bax, p-AKTSer473and p-AKTThr308, while promoted the release of Cyt-C and upregulated the protein level of cleaved caspase-3. CONCLUSION: Knockdown of integrin β1 increases the sensitivity of SGC-7901/DDP cells to the chemotherapeutic agents, and promotes the cell apoptosis via mitochondrial apoptosis pathway. The mechanism may be related to the attenuation of AKT pathway by inhibiting phosphorylations of AKT at Ser473 and Thr308.

Integrin β1; Gastric cancer; Multidrug resistance; Apoptosis; AKT

1000- 4718(2016)12- 2233- 06

2016- 07- 05

2016- 09- 27

R730.23; R735.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.12.018

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△通訊作者 Tel: 0512-62363011； E-mail： drcaofei@126.com