邵宜 鐘殿勝

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)約占肺癌的80%[1].大多數(shù)NSCLC在診斷時(shí)即處于進(jìn)展期,對(duì)于具有敏感突變基因的患者來說,靶向治療為其標(biāo)準(zhǔn)治療.多項(xiàng)研究[2,3]證實(shí)具有表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)敏感突變的患者對(duì)酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitors, TKIs)具有良好反應(yīng),總反應(yīng)率為55%-80%,無進(jìn)展生存期(progression-free survival,PFS)為9個(gè)月-14個(gè)月.但是,即使具有相同類型乃至相同亞型,不同患者對(duì)TKIs的反應(yīng)也不一致.因此,預(yù)測(cè)患者從TKIs治療中的獲益程度具有重要意義.

之前研究發(fā)現(xiàn),腫瘤組織的分子異常存在異質(zhì)性,即同一腫瘤中同時(shí)含有EGFR突變和野生型克隆[4],因此推測(cè)突變分子含量的不同是TKIs反應(yīng)不一的部分原因,具有更高EGFR突變"豐度"的腫瘤患者可能從TKIs中獲益更多,僅僅定性分析突變來指導(dǎo)靶向治療已不能滿足臨床需求.隨著數(shù)字PCR(digital PCR, dPCR)、二代測(cè)序(next generation sequencing, NGS)等方法的出現(xiàn),定量檢測(cè)EGFR突變已經(jīng)成為可能.但是,EGFR突變豐度尚無統(tǒng)一定義,其與突變型肺癌及TKIs療效的關(guān)系也并無定論.本文將目前EGFR突變豐度的含義及其臨床意義綜述如下.

1 EGFR突變豐度的定義及檢測(cè)方法

豐度(abundance)概念來自于化學(xué),最初指元素的相對(duì)含量.而腫瘤學(xué)中所謂EGFR基因突變的分子豐度還沒有統(tǒng)一的定義和標(biāo)準(zhǔn),一般指突變型EGFR突變基因相對(duì)或絕對(duì)定量值,豐度的概念也隨檢測(cè)方法和檢測(cè)樣本的不同而各有不同.

1.1 EGFR突變豐度的半定量檢測(cè) 早期的研究根據(jù)突變檢測(cè)方法敏感性的不同來定義豐度.一般來說,EGFR突變頻率需達(dá)到20%-30%才能由直接測(cè)序發(fā)現(xiàn),而擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(amplif i cation refractory mutation system, ARMS)可檢測(cè)到1%的突變[5].根據(jù)二者敏感性的差別,2010年Zhou等[6]使用直接DNA測(cè)序和ARMS法檢測(cè)100例肺癌樣本,將兩種方法都為陽性者定義為EGFR突變高豐度,ARMS法陽性、測(cè)序陰性為低豐度,兩種方法都為陰性者為野生型,并發(fā)現(xiàn)高低豐度者對(duì)TKIs反應(yīng)確有不同.此研究雖然具有重要的臨床意義,但僅用兩種方法的敏感性差異來判斷突變豐度較為粗糙,本質(zhì)上仍屬于半定量方法.此外,盡管研究要求樣本的腫瘤細(xì)胞比例>50%,但一定比例的正常細(xì)胞仍有可能干擾檢測(cè)結(jié)果,特別是對(duì)直接測(cè)序的影響較大.之后同樣有研究使用類似方法重復(fù)了此研究,但并未發(fā)現(xiàn)此種豐度和TKI反應(yīng)之間具有相關(guān)性[7].

1.2 EGFR突變豐度的定量檢測(cè) 隨著突變定量檢測(cè)方法的出現(xiàn),更多研究使用EGFR突變和野生型拷貝的比值來定義豐度.2009年,Yung等[8]第一次使用豐度概念并用dPCR將EGFR突變定量化.研究使用微滴數(shù)字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)方法來定量NSCLC患者血漿和腫瘤組織的EGFR常見突變(19外顯子缺失和L858R點(diǎn)突變).ddPCR敏感性高,可檢測(cè)到臨床樣本的單個(gè)突變DNA分子,并準(zhǔn)確測(cè)定突變及野生序列的數(shù)量.作者發(fā)現(xiàn)檢測(cè)到的比例濃度可低至0.1%,并將豐度定義為突變分子數(shù)在總的DNA中所占濃度.研究發(fā)現(xiàn)突變患者接受TKI治療后出現(xiàn)EGFR突變豐度的下降,但沒有分析基線突變豐度和療效預(yù)測(cè)及預(yù)后價(jià)值.

Wang等[9]使用納流控dPCR分析平臺(tái)(nanofluidic digital PCR assay platform),通過計(jì)算EGFR分子和單拷貝基因RPP30數(shù)量的比值來確定基因組DNA拷貝中含有多少突變分子,也即EGFR基因拷貝的相對(duì)數(shù).此種方法檢測(cè)下限可低至0.02%,檢測(cè)到20個(gè)手術(shù)切除樣本的EGFR突變豐度為0.02%-9.26%.

Marchetti等[10]使用半定量指數(shù)(semiquantitative index, SQI)定量EGFR突變.SQI來自包含突變EGFR和固定量野生型EGFR的已知拷貝數(shù)稀釋系列,并以qPCR中野生型DNA做為內(nèi)參,反映EGFR突變基因?qū)Ρ纫吧涂截悢?shù)的趨勢(shì).研究檢測(cè)了69例EGFR突變腫瘤和21例陰性對(duì)照患者的血漿,發(fā)現(xiàn)SQI和厄洛替尼治療后反應(yīng)相關(guān).

Yang等[11]的研究使用ddPCR方法定量和動(dòng)態(tài)檢測(cè)循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor DNA, ctDNA)的EGFR突變,發(fā)現(xiàn)ddPCR檢測(cè)的下限是0.04%.以腫瘤組織的EGFR突變?yōu)榻饦?biāo)準(zhǔn),血漿ctDNA的一致率為74%(54/73).ddPCR檢測(cè)循環(huán)EGFR突變等位基因和野生型等位基因的絕對(duì)量,突變EGFR ctDNA和野生型ctDNA的濃度比值定義為EGFR突變豐度.其中,54例未治療突變患者血漿中中位絕對(duì)和相對(duì)EGFR突變等位基因量是487拷貝/反應(yīng)和5.15%,因此,研究將相對(duì)EGFR突變量>5.15%者定義為高豐度(n=27),而≤5.15%者為低豐度(n=27).

關(guān)于厄洛替尼和化療間插治療的FASTACT-2研究[12]前瞻性用Cobas檢測(cè)基線、第3周期和疾病進(jìn)展(progressive disease, PD)的血液標(biāo)本,檢測(cè)血漿游離DNA(cell-free DNA, cfDNA)EGFR突變狀態(tài),并使用突變拷貝數(shù)/血漿毫升數(shù)定量監(jiān)測(cè)TKIs治療過程中動(dòng)態(tài)變化.但此豐度定義方法可能容易受到非腫瘤DNA數(shù)量等影響,是否準(zhǔn)確還需要進(jìn)一步驗(yàn)證.

NGS同樣可用來檢測(cè)突變豐度.2016年,Zhang等[13]使用單分子擴(kuò)增和再測(cè)序技術(shù)(single-molecule amplif i cation and resequencing technology, SMART)行基因檢測(cè),將突變率定義為突變等位基因數(shù)量/總等位基因數(shù)量.以ARMS做為標(biāo)準(zhǔn),SMART的敏感性和特異性分別是98.7%和99.0%.但研究并未發(fā)現(xiàn)豐度和使用TKIs的PFS之間具有相關(guān)性.

由于對(duì)一代TKIs耐藥機(jī)制的深入理解和三代TKIs的出現(xiàn),T790M定量檢測(cè)的重要性也逐漸被認(rèn)識(shí)到.有研究[14]將T790M等位基因數(shù)量對(duì)比活化突變等位基因數(shù)量進(jìn)行T790M相對(duì)定量,使用磁珠乳液擴(kuò)增PCR(bead,emulsion, amplif i cation, magnetic, BEAMing)檢測(cè)23例TKIs后PD患者和21例突變未經(jīng)治患者的ctDNA,發(fā)現(xiàn)T790M比活化突變值為13.3%-94.0%.檢出率在PD患者中更高,兩組分別是82.6%和61.9%(P=0.18).還有研究使用相同定量方法檢測(cè)T790M及活化突變?cè)赥KIs治療前后變化[15],使用dPCR檢測(cè)TKIs治療前后腫瘤組織.三代TKIs藥物rociletinib的I期/II期研究對(duì)PD患者進(jìn)行活檢,同樣檢測(cè)T790M對(duì)活化突變等位基因的相對(duì)頻率[16].

有研究使用dPCR檢測(cè)cfDNA EGFR T790M,以突變T790M/(突變T790M+野生型等位基因)比值進(jìn)行定量,并以5%和0為界進(jìn)行高/低/無分組,研究其基線值和TKIs反應(yīng)關(guān)系,及動(dòng)態(tài)變化和療效關(guān)系[17].同樣地,上文[13]提到的SMART技術(shù)也可定量檢測(cè)T790突變,將突變率定義為突變等位基因數(shù)量/總等位基因數(shù)量,用ARMS和SMART測(cè)得T790M突變率分別是1.1%和2.2%.三代TKI奧希替尼的臨床研究同樣使用NGS來檢測(cè)T790M豐度和療效的相關(guān)性[18].

1.3 蛋白檢測(cè) 由于DNA測(cè)序的敏感性依賴于腫瘤細(xì)胞在樣本中的比例,特別是依賴于攜帶突變的腫瘤細(xì)胞百分比.因此,有研究[19]發(fā)現(xiàn)針對(duì)兩個(gè)最常見EGFR突變的特異性兔單克隆抗體,用Western blot、免疫熒光、免疫組化(immunohistochemistry, IHC)檢測(cè)340例NSCLC患者的組織突變,和直接及以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的DNA測(cè)序方法相比,敏感性為92%,特異性為99%.不同于DNA測(cè)序,IHC的結(jié)果依賴于單個(gè)腫瘤細(xì)胞染色的強(qiáng)度,而不是整個(gè)腫瘤裂解物.因此,腫瘤樣本突變?nèi)绻械桶俜直鹊腅GFR突變腫瘤細(xì)胞,DNA測(cè)序可能難以測(cè)出,但能被IHC突變特異性抗體檢測(cè)到,尤其是在小樣本標(biāo)本具有優(yōu)勢(shì).此外,IHC也較少受到癌細(xì)胞空間分布的影響.但抗體只針對(duì)EGFR的特定常見突變,其他突變無法測(cè)出.

之后有研究[20]使用IHC定量檢測(cè)47例PCR證實(shí)突變的NSCLC患者,表達(dá)分?jǐn)?shù)由染色強(qiáng)度和表達(dá)突變EGFR腫瘤組織的比例共同決定.表達(dá)EGFR突變的腫瘤細(xì)胞比例(比例分?jǐn)?shù)):0:無;1分:1%-10%;2分:11%-30%;3分:31%-50%;4分:51%-70%;5分:71%-100%.染色強(qiáng)度(強(qiáng)度分?jǐn)?shù)):>10%的腫瘤細(xì)胞中,0:不染色;1分:弱染色;2分:中度染色;3分:強(qiáng)染色.總表達(dá)分?jǐn)?shù)為二者相加.19外顯子缺失和L858R突變的中位分?jǐn)?shù)分別是4分和7分,因此將19外顯子缺失定量為:0分-3分:低表達(dá),4分-8分:高表達(dá);L858R定量為:0分-6分:低表達(dá),7分-8分:高表達(dá).

2 EGFR突變豐度的臨床意義

2.1 反映腫瘤異質(zhì)性 有研究[21]使用qPCR檢測(cè)突變比.如上文定量方法所述,突變比=突變水平/(突變水平+野生等位基因水平).檢測(cè)50例NSCLC患者的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶,原發(fā)灶不同部位的定量平均突變偏差是18.3%(范圍0-54.3%),具有高水平一致性.而轉(zhuǎn)移灶腫瘤EGFR突變比顯著低于原發(fā)灶,Kappa值是0.615(P<0.01),這一研究說明盡管為同一來源腫瘤,原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的突變豐度也具有異質(zhì)性,也可以解釋在TKIs治療過程中,不同病灶反應(yīng)不一.

2.2 突變豐度與疾病轉(zhuǎn)歸 Yung的研究中[8],突變序列的血漿濃度和臨床反應(yīng)一致性良好.所有部分緩解(partial remission, PR)和完全緩解(complete remission, CR)的患者濃度降低,而PD患者突變持續(xù).其中一個(gè)患者初始反應(yīng)后因藥物不良反應(yīng)停用TKI,停藥后4周腫瘤相關(guān)EGFR突變?cè)俅纬霈F(xiàn),證明EGFR豐度變化可反映疾病動(dòng)態(tài)變化,但研究未闡述基線豐度水平和療效之間的關(guān)系.

TKIs治療過程中血漿EGFR突變動(dòng)態(tài)定量改變和臨床結(jié)局的關(guān)系還不清楚.III期隨機(jī)對(duì)照研究CTONG0901[22]探索性分析了血漿EGFR L858R突變和TKIs反應(yīng)及耐藥的關(guān)系.使用qPCR檢測(cè)80例患者血漿的相對(duì)L858R拷貝數(shù),發(fā)現(xiàn)在對(duì)TKI反應(yīng)最好時(shí)L858R量最低.和基礎(chǔ)L858R量相比,進(jìn)展時(shí)量增加超過一倍作為分界,61例患者進(jìn)展時(shí)L858R增長(zhǎng)到最高水平(上升型),19例患者進(jìn)展時(shí)穩(wěn)定不變(穩(wěn)定型),上升型的PFS長(zhǎng)于穩(wěn)定性,兩組的中位PFS分別是11.1個(gè)月和7.5個(gè)月.但此種方法為回溯性分析,缺乏療效預(yù)測(cè)價(jià)值.

2.3 突變豐度預(yù)測(cè)TKIs療效 初治患者的基線EGFR豐度似可預(yù)測(cè)TKIs療效.Zhou等[6]的半定量豐度研究中,100個(gè)月接受檢測(cè)的患者中51個(gè)月為高豐度,18個(gè)月為低豐度,接受吉非替尼治療后,PFS分別是11.3個(gè)月和6.9個(gè)月(P=0.014),說明基線的相對(duì)EGFR突變豐度可以預(yù)測(cè)TKI獲益程度.但Chiu等[7]發(fā)現(xiàn)高低豐度患者對(duì)TKI反應(yīng)沒有顯著不同,直接測(cè)序和ARMS法檢測(cè)突變結(jié)果不同和相同患者的PFS分別是13.4和 10.9個(gè)月,沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.但Zhou的研究和Chiu的研究不同之處在于,前者只納入腫瘤細(xì)胞超過50%的樣本,而后者大約60%的標(biāo)本腫瘤細(xì)胞小于50%,不能除外腫瘤細(xì)胞比例對(duì)直接測(cè)序突變檢測(cè)的影響.

吉非替尼治療患者使用IHC進(jìn)行EGFR突變定量,高分比低分的PFS顯著延長(zhǎng),分別是12.2個(gè)月和3.4個(gè)月(P<0.001),證實(shí)腫瘤組織EGFR突變表達(dá)的定量分析可預(yù)測(cè)TKIs療效.

同樣,豐度動(dòng)態(tài)變化也可反映TKIs療效.血漿EGFR突變快速降低預(yù)示更好的TKIs反應(yīng)[10].FASTACT-2研究,EGFR突變特異性cfDNA水平在第3周期降低,進(jìn)展時(shí)升高.第3周期時(shí)血漿EGFR突變依舊陽性預(yù)示較差的臨床結(jié)局[12].

Yang[11]的研究發(fā)現(xiàn),同為腫瘤組織突變陽性患者,和血漿野生型(n=19)相比,ctDNA突變的患者(n=54)具有更好的PFS(12.6個(gè)月 vs 6.7個(gè)月,P<0.001)和OS(35.6個(gè)月 vs 23.8個(gè)月,P=0.028).和低EGFR豐度(≤5.15%)患者相比,高EGFR突變豐度患者(>5.15%)具有更好的PFS(15.4個(gè)月 vs 11.1個(gè)月,P=0.021).分析67例進(jìn)展后患者血漿DNA,43.3%患者出現(xiàn)豐度降低,19.4%不變,37.3%升高.降低組具有更好的PFS(12.7個(gè)月 vs 7.1個(gè)月,P=0.001)和OS(28.3個(gè)月 vs 14.9個(gè)月,P=0.027).T790M的出現(xiàn)和豐度變化趨勢(shì)無關(guān).

FASTACT-2研究中[12],總的EGFR突變特異性cfDNA水平在第3周期降低,在PD時(shí)回歸.和化療+安慰劑組對(duì)比,在第3周期和PD時(shí)化療+厄洛替尼治療組突變EGFR等位基因數(shù)量更少(第3周期:5拷貝/mL vs 0;PD:83拷貝/mL vs 6拷貝/mL).厄洛替尼組第3周期仍可檢測(cè)到突變EGFR等位基因的患者PD風(fēng)險(xiǎn)增加62%,死亡風(fēng)險(xiǎn)增加55%,因此,第3周期時(shí)的cfDNA EGFR突變陽性是更差PFS和OS的預(yù)測(cè)因子.

另有研究[23]分析9例TKIs PD患者,所有患者接受厄洛替尼治療后都出現(xiàn)血漿EGFR突變豐度降低,其中8例患者達(dá)到血漿CR,1例沒有出現(xiàn)血漿CR的患者則出現(xiàn)了早期進(jìn)展.6例患者在客觀進(jìn)展時(shí)血漿中又檢測(cè)到了突變EGFR,血漿PD出現(xiàn)在在RECIST進(jìn)展前4周-12周.

使用SQI半定量檢測(cè)血漿EGFR突變[10],TKIs治療后的4 d-60 d系列EGFR檢測(cè)出現(xiàn)進(jìn)行性SQI下降.經(jīng)過TKIs4 d治療后,SQI平均降低13.5%,8 d降低41.6%,14 d降低63.5%.除了2例患者,在8 d-60 d后血漿檢測(cè)都為陰性.70%患者(快速反應(yīng)者)在14 d時(shí)下降超過50%,另外30%的患者(緩慢反應(yīng)者)在14 d時(shí)下降小于50%.2個(gè)月時(shí)SQI的降低率和腫瘤縮小比例(percentage of tumor shrinkage, PTS)顯著相關(guān),快速反應(yīng)者PTS平均降低(59.1±1.8),緩慢反應(yīng)者則降低(18.3±3.7)(P<0.000,1).2例慢反應(yīng)者EGFR突變沒有完全清除,在35 d時(shí)T790M就意外出現(xiàn),之后進(jìn)一步增長(zhǎng),這些病例被定義為早期耐藥.因此,連續(xù)檢測(cè)血漿基因型可能是反映靶向治療療效的良好臨床分子標(biāo)志,也是潛在的早期臨床試驗(yàn)終點(diǎn).

有研究[24]探索了突變豐度和再使用TKIs的關(guān)系.檢測(cè)51例TKIs獲得性耐藥患者,使用qPCR檢測(cè)突變,EGFR突變豐度=突變EGFR量/(突變量+野生量).51例突變NSCLC患者的中位豐度是0.501,5,因此將豐度≥0.501,5高豐度(H),<0.501,5為低豐度(L).和L組相比(27/51),H組患者(24/51)再次使用一代TKIs具有顯著延長(zhǎng)的PFS(5.27個(gè)月 vs 2.53個(gè)月,P=0.033).因此,使用一代TKIs耐藥后,具有更高突變EGFR豐度是接受TKIs再治療的潛在指標(biāo),可能是因?yàn)橐蕾囉贓GFR信號(hào)通路的腫瘤細(xì)胞比例更高.

2.4 T790M突變豐度的臨床意義 T790M突變豐度的增加可能和一代TKIs耐藥具有相關(guān)性.有研究[15]使用dPCR檢測(cè)到所有25個(gè)組織中T790M(治療前13個(gè)樣本,治療后12個(gè)樣本),計(jì)算活化突變(L858R)或T790M等位基因和對(duì)照等位基因數(shù)量比值.用藥前L858R/對(duì)照=65.62%,T790M/對(duì)照=0.34%,T790M等位基因和活化突變等位基因數(shù)量比(T/A)=0.52%.用藥后L858R/對(duì)照=3.87%,T790M/對(duì)照=1.89%,T/A=48.84%.10例低T/A比值,TKIs治療顯著腫瘤退縮.其中6例耐藥患者T/A出現(xiàn)顯著增加.因此,一代TKIs治療過程中,T790M豐度的增加可能提示出現(xiàn)獲得性耐藥.

但也有研究得出不同結(jié)論.有研究用dPCR檢測(cè)TKIs治療前后血漿cf-DNA T790M的變化[17],發(fā)現(xiàn)TKIs治療前T790M陽性患者具有更差的PFS(8.9個(gè)月vs 12.1個(gè)月,P=0.007)和OS(19.3個(gè)月 vs 31.9個(gè)月,P=0.001),而基線高豐度(>5%)T790M預(yù)示著更差的PFS(7.1個(gè)月vs 9.5個(gè)月,P=0.001).但在TKIs治療過程中,T790M數(shù)量增加者反而具有更優(yōu)PFS(11.6個(gè)月 vs 7.1個(gè)月,P=0.044)和OS(26.3個(gè)月 vs 19.3個(gè)月,P=0.015).是否天然和獲得性T790M的臨床意義不同還需要進(jìn)一步探索.

治療前T790M陽性細(xì)胞比例可預(yù)示對(duì)T790M陽性腫瘤對(duì)三代TKIs rociletinib的治療反應(yīng).25例接受rociletinib治療的患者,基線T790M陽性細(xì)胞比例更高者,rociletinib治療后具有更大的腫瘤退縮,說明T790M負(fù)荷定量信息可提示患者治療反應(yīng),腫瘤中定量等位基因頻率是預(yù)測(cè)最大獲益的指標(biāo)[15].同樣,奧希替尼的I期AURA研究的事后分析以相對(duì)等位基因比例(allelic fraction, AF),也即EGFR突變cfDNA和野生型EGFR cfDNA的比值進(jìn)行突變定量,發(fā)現(xiàn)cfDNA T790M突變陽性患者,組織T790M陽性腫瘤(n=108)的AF值高于T790M陰性腫瘤(n=16)(相對(duì)T790M AF,33.6% vs 16.8%,P=0.004,7).相對(duì)T790M AF增加和最大反應(yīng)深度并不總相關(guān)(R=-0.183),但和AF<10%患者相比,相對(duì)T790M AF>10%的患者具有更大的反應(yīng)深度(P=0.040,7).但一項(xiàng)關(guān)于奧希替尼治療血檢T790M陽性患者的臨床試驗(yàn)中[18],較小的T790M突變等位基因比例和更大的腫瘤退縮具有相關(guān)趨勢(shì),反應(yīng)最好的7例患者中(腫瘤退縮大于50%),3例T790M<0.25%,似乎提示任何豐度的T790M都可從三代TKIs中獲益.

T790M的動(dòng)態(tài)變化可能和三代TKIs療效相關(guān).TIGER-X研究中[25],NGS檢測(cè)患者ctDNA T790M突變拷貝數(shù)的絕對(duì)值,發(fā)現(xiàn)三代TKIs rociletinib治療后,血檢EGFR突變水平下降可能可預(yù)測(cè)反應(yīng)深度.檢測(cè)9例患者尿液,發(fā)現(xiàn)不論最佳確認(rèn)反應(yīng)為何,第1周期對(duì)比基線都出現(xiàn)尿T790M水平的顯著下降(范圍-51%到-100%;P=0.009,1).但是在2例PD患者,下降受阻(-51%和-70%),而PR或SD為最佳反應(yīng)的患者下降范圍為-83%到-100%,反映了rociletinib可降低T790M陽性克隆增殖.

3 總結(jié)

dPCR、NGS等方法的出現(xiàn)使EGFR定量檢測(cè)成為可能.盡管臨床還沒有標(biāo)準(zhǔn)定義及檢測(cè)EGFR突變的方法,但EGFR突變豐度的檢測(cè)及其意義已經(jīng)日益引起人們的重視.不同病灶的不同豐度可以反映腫瘤異質(zhì)性,EGFR活化突變的基線豐度值可能和TKIs療效相關(guān),TKIs治療過程中EGFR豐度的變化對(duì)于檢測(cè)療效、早期發(fā)現(xiàn)進(jìn)展等具有重要意義.T790M耐藥突變豐度的增加可能可早于臨床提示一代TKIs獲得性耐藥,其變化也是三代TKIs療效的良好預(yù)測(cè)因子.總之,EGFR突變豐度檢測(cè)具有十分重要的臨床意義.

但是當(dāng)前對(duì)突變豐度的應(yīng)用還存在明顯不足.豐度概念混雜,沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),各種檢測(cè)方法缺乏絕對(duì)可比性.另外,突變拷貝數(shù)的檢測(cè)在一定程度上受到各種標(biāo)本所含腫瘤細(xì)胞的比例不同的影響,而且很多EGFR突變肺癌合并存在EGFR基因擴(kuò)增,豐度檢測(cè)是否需要進(jìn)行腫瘤細(xì)胞比例和基因擴(kuò)增的校正還需要更多的探索.