馬吉軍

(甘肅省臨澤縣畜牧局，734200)

雞源致病性大腸桿菌的耐藥基因PCR檢測

馬吉軍

(甘肅省臨澤縣畜牧局，734200)

雞大腸桿菌病是由大腸埃希氏桿菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株所引起的一類疾病的總稱，是危害養(yǎng)雞業(yè)主要細菌性疾病。大腸桿菌血清型眾多，且易產生耐藥性。雞致病性大腸桿菌的耐藥性與本身攜帶的耐藥基因具有一定的相關性。本實驗臨床分離5株雞致病性大腸桿菌，用PCR方法對其四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB分布進行了檢測，結果顯示，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌均攜帶檢四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB檢出率均為100%，因此，證實了說明臨床分離5株雞致病性大腸桿菌對四環(huán)素類藥物存在很強的耐藥性。

雞；致病性大腸桿菌；耐藥基因；PCR

本試驗旨在研究雞源性大腸桿菌對四環(huán)素類藥物的耐藥性和耐藥基因機制的攜帶情況，討論二者的相關性，從分子生物學角度,利用PCR技術擴增細菌的保守片段,分析大腸桿菌對四環(huán)素類藥物產生耐藥的原因，為臨床上的疾病防治提供了理論支持。

1 材料與方法

1.1 菌株來源

臨床上分離的5株雞致病性大腸桿菌

1.2 試劑與儀器

革蘭氏染色液購自珠海貝索生物技術有限公司；細菌基因組DNA提取試劑盒、DL2000DNA Marker、瓊脂糖、購自TIANGEN生物技術有限公司；Premix Taq（Loading dye mix D334A）購自大連寶生物工程有限公司。FGEN02TD型PCR儀由英國Techne公司生產，DYY-6C型電泳儀由北京六一儀器廠生產，Bio-BEST200E型凝膠成像分析系統(tǒng)由美國西蒙生產。

1.3 相關試劑的配制

1.3.1 5×TBE buffer：Tris 54.0 g， 硼酸：27.5 g，20.0 mL 0.5 mol/L EDTA(PH 8.0)定容到 1000 mL，室溫保存。

1.3.2 1.5%瓊脂糖膠：稱取1 g瓊脂糖放入三角燒瓶中，量取 5×TBE buffer 20 mL，加入 80 ml雙蒸水，5倍稀釋成 1×TBE，倒入上述三角燒瓶中，混合均勻，加熱使瓊脂糖熔化，待冷卻至 55℃左右時加 EB 5 μL，倒入凝膠槽冷凝后備用。

1.4 致病性大腸桿菌DNA模板制備

用水煮法提取5株大腸桿菌的DNA組，將5株臨床分離的雞源致病性大腸桿菌分別接種與普通營養(yǎng)肉湯中，置37℃恒溫箱震蕩培養(yǎng)12 h，5株臨床分離的雞源致病性大腸桿菌取出500μL，6000rpm離心5min，棄去上清，留沉淀，用100μL無菌水重新懸起來，煮沸10min，12000 rpm離心5min，留上清。4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2 結果與分析

2.1 致病性大腸桿菌DNA的提取結果

用水煮法提取5株大腸桿菌的DNA組 將提取的5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組加入等量的染料進行電泳檢測，電泳檢測完畢后放入電泳凝膠成像系統(tǒng)觀察，結果顯示，5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組出現(xiàn)明顯條帶，說明5株雞源致病性大腸桿菌的DNA組成功提取。

2.2 致病性大腸桿菌四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetB檢測結果

四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetBPCR檢測結果顯示，5株雞源致病性大腸桿菌耐藥基因tetA基因檢出5株，檢出率100%；5株雞源致病性大腸桿菌耐藥基因tetB基因檢出5株，檢出率100%。其中，臨床上分離的5株雞源致病性大腸桿菌同時攜帶四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA、tetB。

3 小結

本實驗對臨床分離5株雞致病性大腸桿菌用PCR方法檢測四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB分布，結果顯示，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌均攜帶檢四環(huán)素類藥物的耐藥基因tetA和tetB，檢出率均為100%，臨床分離5株雞致病性大腸桿菌對四環(huán)素類藥物存在很強的耐藥性，應引起重視。

[1]陳薄言.獸醫(yī)傳染病學[M].北京:中國農業(yè)出版社,2015.

S855.1

B

1003-8655（2017）06-0060-01