張月月 馬振剛

（重慶市媒介昆蟲重點實驗室 重慶師范大學(xué)，重慶401331）

一種高效收集蜜蜂血淋巴的新方法

張月月 馬振剛

（重慶市媒介昆蟲重點實驗室 重慶師范大學(xué)，重慶401331）

昆蟲血淋巴是血細胞、間質(zhì)液和血漿的混合物，為昆蟲新陳代謝中物質(zhì)交換與儲存的場所，在免疫、創(chuàng)傷愈合、防御等方面有著重要作用。血淋巴已成為昆蟲免疫學(xué)研究中較為關(guān)鍵的生物材料之一。目前，蜜蜂血淋巴收集方法主要包括背血管取血法、壓榨或離心法、穿刺法、切割法、剪開法等，但這些方法往往操作復(fù)雜、耗時長、容易收集獲得受到污染或帶有雜質(zhì)的血淋巴。

目前，Borsuk等（2017）報道了一種新的高效快速的收集血淋巴的方法，具體操作是先將泡沫聚乙烯苯板、鑷子、自動移液管、移液管吸頭、棉簽、冰浴器瓦斯燃燒器等用紫外燈進行殺菌。研究者用非慣用手的食指和拇指控制住蜜蜂的胸部，將蜜蜂輕輕的按壓放置在泡沫聚乙烯苯板的邊緣，這樣放置以防止蜜蜂叮研究者手指；隨后，用慣用手將棉簽浸泡在70%的乙醇中，然后用棉簽將蜜蜂觸須周圍區(qū)域進行消毒；待乙醇蒸發(fā)，用慣用手利用鑷子抓住觸須尖端，然后從觸須根部將兩根觸須夾除；然后，用非慣用手食指，輕輕壓住蜜蜂的腹部以增加血淋巴的壓力，這就導(dǎo)致蜜蜂外表出現(xiàn)一滴純的血淋巴。用自動移液管將這滴血淋巴轉(zhuǎn)移入微量離心管，放置在冰浴中（2~4℃）以防止黑化。

此方法的優(yōu)點是簡化了步驟，操作簡單，所需設(shè)備常見。不需將蜜蜂的身體刺穿，降低了血淋巴被污染的風(fēng)險。而且，將血淋巴迅速收集入移液管中，縮短了和空氣接觸時間，最小化了血淋巴黑化的風(fēng)險。最重要的是，此法允許測量從一只蜜蜂所取的血淋巴體積，這對生化分析很重要。這一方法最大化了從每只蜜蜂取得的血淋巴的體積，最小化了取得所需血淋巴體積所需要的蜜蜂的數(shù)量。取得的血淋巴可以在收集后立刻進行分析或者凍結(jié)備用。值得一提的是，此方法還可以用于很多有觸須且大小類似蜜蜂或更大的昆蟲中。由于該法可以快速獲得大量純的無污染無菌未黑化的血淋巴，且適用于大范圍的蜜蜂科學(xué)研究中，因此本文對其進行轉(zhuǎn)述報道，為更多的蜜蜂基礎(chǔ)研究工作者提供參考。（文獻來源 A new method for quick and easy hemolymph collection from apidae adults [J].Plos One, 2017，12(1),doi:10.1371/journal.pone.0170487）