趙東鯤+包長龍

【摘 要】 目的：測定額力根一號中羥基紅花黃色素A的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72），檢測波長為403nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果：羥基紅花黃色素A在0.3762～3.7620μg（r=0.99991）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。羥基紅花黃色素A平均加樣回收率為97.3%。結(jié)論：該方法簡便、靈敏，可用于制劑的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 額力根一號；羥基紅花黃色素A；HPLC

【中圖分類號】R914.4 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）24-0018-03

Abstract：Objective HPLC determination of hydroxysafflor yellow A in eligen Ⅰ.Methods The HPLC method was used.Octadecyl silane bonded silica gel as a filler ，The mobile phase was a mixture of methanol-acetonitrile-0.7% aqueous phosphoric acid（26∶[KG-*3/5]2∶[KG-*3/5]72） at a flow rate of 1.0mL·min-1 ，and the detecting wavelength was at 403 nm.Results The linear range of hydroxysafflor yellow A was 0.3762～3.7620μg（r=0.99991） and the average recovery rate was 97.3%.Conclusion The method is simple，rapid and accurate.It could be used for the quality control of eligen Ⅰ.

Keywords：Eligen Ⅰ；Hydroxysafflor Yellow A； HPLC

額力根一號（肝一號）是由丹參、鱉甲、黃芪、黨參、當(dāng)歸、三七、柴胡、紅花、枸杞子、北豆根、赤芍、青篙、阿膠、拳參、生地十五味藥組成的復(fù)方制劑，主要治療肝腫大、肝膿腫、肝癌、肝硬化以及酒精引起的胃酸過多等。額力根一號方中的主要成分紅花有活血通經(jīng)、祛瘀止痛的功效。而羥基紅花黃色素A為紅花的水溶性成分，具有抑制血小板聚集、抗氧化、抗炎等多種藥理活性[1]，本文采用方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的HPLC法來測定額力根一號中羥基紅花黃色素A的含量，實現(xiàn)對額力根一號的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10AT，SPD-10Avp，SIL-HTA，CLASS-VP。

1.2 試藥 羥基紅花黃色素A（中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用。批號：111637—200503）；額力根一號（批號：090525、090603、090326由內(nèi)蒙古通遼市庫倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院制劑室提供）。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26∶2∶72），柱溫：30℃，檢測波長為403nm，流速為1.0mL/min，進樣量10μL。理論板數(shù)：按羥基紅花黃色素A峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備 稱取羥基紅花黃色素A對照品13mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加25%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（制成每1mL含0.13mg的溶液）。

2.3 供試品溶液的制備 取額力根一號粉末（過三號篩）約6.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得額力根一號樣品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 按照額力根一號處方制成陰性對照溶液（不含紅花）。

2.5 干擾實驗 取三種溶液（對照品、陰性及額力根一號溶液）各10μL分別進樣檢測，結(jié)果可見：額力根一號配方中沒有對羥基紅花黃色素A產(chǎn)生干擾的成分，色譜圖見圖1～3。

2.6 線性試驗 分別取2、4、8、12、15和20μL對照品溶液（羥基紅花黃色素A），進樣。按上述色譜條件進行測定，以對照品進樣量為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥基紅花黃色素A在0.3762～3.7620μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：Y=1.0476×106X-3.7547×104 ，r=0.99991。

2.7 精密度試驗 取“2.2”項下的羥基紅花黃色素A對照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進樣6次，測定羥基紅花黃色素A峰面積，結(jié)果羥基紅花黃色素A峰面積的RSD（n=6）為1.10%。

2.8 重復(fù)性試驗 在上述色譜條件下，分析測定由同一批額力根一號樣品制備的6份供試品溶液。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的平均值（n=6）為0.973 mg·g-1，RSD為0.20%。見表1。

2.9 穩(wěn)定性試驗 取同一額力根一號供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，18，30h按上述色譜條件測定。測得羥基紅花黃色素A的平均峰面積為1307572，RSD（n=6）為1.30%。結(jié)果表明額力根一號供試品溶液在室溫條件下放置30h依然穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品額力根一號約3.0g，共9份，分別添加羥基紅花黃色素A對照品溶液適量，按上述方法測定含量后計算回收率。結(jié)果如下表。羥基紅花黃色素A平均回收率（n=9）為97.3%。

2.11 樣品測定 取額力根一號，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，記錄色譜峰面積，計算含量。結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 測定波長的選擇 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對照品溶液，分別在210～600nm波長內(nèi)進行全掃描，羥基紅花黃色素A在403nm處有較強的紫外吸收。實驗選擇403nm進行測得。

3.2 提取溶劑的選擇 據(jù)文獻[2]，藥材紅花的羥基紅花黃色素A含量測定方法中，選用25%甲醇作為提取溶劑，超聲提取40min，故本研究也采用25%甲醇作為提取溶劑，超聲提取40min。

3.3 定量方法的建立 本研究建立了一種準(zhǔn)確可靠、專屬性強、簡單快捷的定量方法，通過對羥基紅花黃色素A的含量測定，達到控制額力根一號制劑質(zhì)量的目的。

參考文獻

[1]劉永剛，李芳君，湯芳.羥基紅花黃色素A對大鼠心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護作用[M].中國藥理與臨床，2015，31（1）：71-73.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：151.

（編輯：梁志慶）