段靜+卓莎+姚付軍+張亞妮+亢曉峰

摘 要 以大腸桿菌原核系統(tǒng)表達(dá)的方法制備了MspA蛋白質(zhì)納米孔， 并利用表面活性劑高溫提取獲得高活性MspA蛋白納米孔。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 0.5%的提取劑90℃提取30 min為最佳提取條件。利用制備的MspA納米孔在單分子水平上研究了其與多種環(huán)糊精的相互作用， 結(jié)果表明， 在眾多環(huán)糊精分子中， 全6氨基β環(huán)糊精（am7βCD）與MspA蛋白納米孔相互作用較強(qiáng)且阻塞平臺(tái)較一致， 其滯留時(shí)間隨電壓增大而逐漸減小， 但阻塞電流受電壓影響不大。篩選使用am7βCD作為適配體非共價(jià)鍵裝配MspA納米孔， 在單分子水平上研究主客體化學(xué)反應(yīng)。加入am7βCD后， 當(dāng)鹽酸金剛烷胺小分子濃度為50 nmol/L時(shí)，即出現(xiàn)二級(jí)阻塞平臺(tái)， 其滯留時(shí)間隨電壓增大而逐漸減小。這種新型蛋白質(zhì)納米孔單分子傳感器可用于有機(jī)小分子的檢測(cè)識(shí)別， 極大拓寬了MspA納米孔分析技術(shù)的的應(yīng)用范圍。endprint