張德順，丁文嶺，方麗君，馬成鑫

（1.揚(yáng)州市江都區(qū)水產(chǎn)管理站，江蘇 揚(yáng)州 225200 2.揚(yáng)州市江都區(qū)小紀(jì)鎮(zhèn)水產(chǎn)站，江蘇 揚(yáng)州 225000）

鱖魚苗種免疫預(yù)防傳染性脾腎壞死病生產(chǎn)試驗(yàn)

張德順1，丁文嶺1，方麗君1，馬成鑫2

（1.揚(yáng)州市江都區(qū)水產(chǎn)管理站，江蘇 揚(yáng)州 225200 2.揚(yáng)州市江都區(qū)小紀(jì)鎮(zhèn)水產(chǎn)站，江蘇 揚(yáng)州 225000）

鱖魚傳染性脾腎壞死病，又稱鱖魚暴發(fā)性傳染病，是以脾腎壞死、腫大，鰓、肝失血變白，肝出血為主要特征的一種病毒性疫病，其病原為傳染性脾腎壞死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）。2013—2016年揚(yáng)州市水產(chǎn)生產(chǎn)技術(shù)指導(dǎo)站與揚(yáng)州市江都區(qū)水生動(dòng)物預(yù)防控制中心協(xié)作，對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病進(jìn)行了流行性病學(xué)調(diào)查、病原檢測、疫苗免疫等研究和生產(chǎn)試驗(yàn)工作。試驗(yàn)通過三組鱖魚精養(yǎng)塘對(duì)不同苗種來源及苗種疫苗免疫養(yǎng)殖模式、方式試驗(yàn)比較和探討，以及周邊精養(yǎng)塘鱖魚傳染性脾腎壞死病流行病學(xué)調(diào)查，試驗(yàn)池塘中，南方鱖魚苗種養(yǎng)殖發(fā)病病死率高達(dá)36.8%以上，長江親本繁殖的后代苗種發(fā)病率為17.2%以上，而南方鱖魚苗種在病害流行季節(jié)前15～20 d，通過疫苗注射，發(fā)病病死率明顯降低，尤其對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病有較強(qiáng)的抗病力。江蘇省鱖魚養(yǎng)殖近年來發(fā)展較快，但鱖魚傳染性脾腎壞死病瀕發(fā)，發(fā)病病死率極高，已成為鱖魚養(yǎng)殖持續(xù)發(fā)展的瓶頸，采用疫苗注射方式對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病進(jìn)行免疫在江蘇省尚為首例。因此，積極開展鱖魚病害檢疫，改良鱖魚苗種，推動(dòng)鱖魚疫苗商品化生產(chǎn)和應(yīng)用，是發(fā)展鱖魚健康、持續(xù)增長的有效途徑?，F(xiàn)將試驗(yàn)情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)池塘苗種及疫苗來源

試驗(yàn)池塘選自揚(yáng)州市江都區(qū)鱖魚養(yǎng)殖重點(diǎn)區(qū)——江都區(qū)的淥洋湖水產(chǎn)養(yǎng)殖場6口鱖魚精養(yǎng)池塘，苗種來源分別為南方苗種、長江親本自繁自育苗種、南方苗經(jīng)本地培育后注射疫苗苗種。疫苗來源為中山大學(xué)生命科學(xué)院鱖魚疫苗中試產(chǎn)品。試驗(yàn)池塘面積、苗種來源、放養(yǎng)規(guī)格、數(shù)量情況見表1。

1.2 疫苗注射

選擇5#、6#池塘作鱖魚注射疫苗的試驗(yàn)塘。2015年6月18日，天氣晴朗，最高氣溫28℃，上午水溫23℃，早期放養(yǎng)的南方鱖魚苗經(jīng)一個(gè)多月養(yǎng)殖，規(guī)格已達(dá)30 g/尾。當(dāng)日采用人工拉網(wǎng)兩次，捕獲全塘80%的鱖魚6 480尾，暫養(yǎng)網(wǎng)箱中，采用連續(xù)注射器逐條注射疫苗，2 h后，將注射疫苗的鱖魚2 500尾放于6#池塘，3 980尾注射疫苗的鱖魚和原塘中留存未注射疫苗的鱖魚1 620尾混養(yǎng)于5#池塘。兩個(gè)池塘均用二氧化氯消毒，防止拉網(wǎng)受傷及針口感染。

1.3 病害流行情況

自7月份開始，水溫23℃以上，陸續(xù)有池塘開始發(fā)生鱖魚傳染性脾腎壞死病，隨著氣溫升高，持續(xù)陰雨天氣，該病病死率呈幾何級(jí)上升，至7月27日，全場600×667 m2鱖魚精養(yǎng)池塘，鱖魚傳染性脾腎壞死病發(fā)病率達(dá)60%，病死率40%。7月27日后，氣溫達(dá)35～38℃后，病魚死亡量明顯減少，8月6日，氣溫降低30℃，一周后，該病發(fā)病率又明顯升高，但病死率較前期減少。

1.4 病魚實(shí)驗(yàn)室檢查

表1 試驗(yàn)池苗種放養(yǎng)情況

發(fā)病池塘起初有幾尾病魚，在水中緩慢游動(dòng)，對(duì)外界反應(yīng)不敏感，撈網(wǎng)較易獲取，多數(shù)病魚頭、鰓蓋、下頜、胸鰭和腹鰭均有不同程度出血，鰓絲呈白色或顏色變淡，當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶稱為“白鰓病”。剖開腹部后，肝顏色較正常鱖魚淡，呈灰白色或蒼白色，有紫黑色出血點(diǎn)，被養(yǎng)殖戶稱為“花肝病”。脾臟、后腎、前腎腫大，呈暗紅色；大部分病魚空胃，腸道無食。以上癥狀可作為鱖魚傳染性脾腎壞死病臨床診斷指標(biāo)。

1.5 病原檢測

在試驗(yàn)塘分別取鱖魚不同的生長階段垂死病魚2～5尾，剖開腹部，采集脾、腎組織，冰浴勻漿，取樣依次于離心機(jī)6 000 r/min、8 000 r/min離心，取上清液，通過PCR擴(kuò)增后，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，于凝膠成像系統(tǒng)紫外線觀察，發(fā)現(xiàn)目的條帶，判斷為陽性，否則再進(jìn)行二次擴(kuò)增，若發(fā)現(xiàn)目的條帶，仍判為陽性，未出現(xiàn)條帶則判為陰性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見表2。

3 討論與分析

表2 試驗(yàn)池塘鱖魚發(fā)病死亡情況

試驗(yàn)池塘中，鱖魚魚種經(jīng)注射疫苗后，在病害流行季節(jié)，鱖魚發(fā)病病死率明顯降低，在垂死病魚中，用PCR檢測，雖仍檢測到鱖魚傳染性脾腎壞死病病毒，但病魚鰓、肝臟、脾腎等器官組織未發(fā)現(xiàn)病變和明顯癥狀。試驗(yàn)表明，鱖魚魚種經(jīng)注射疫苗后，機(jī)體產(chǎn)生脾腎傳染性壞死病病毒抗體，具有顯著免疫效果。

試驗(yàn)池塘中，3#、4#池塘苗種自繁自育，親本來自長江良種親本保護(hù)區(qū)，繁殖的后代感染鱖魚傳染性脾腎壞死病有所減少，全區(qū)放養(yǎng)自繁自育苗種池塘有10口，面積70×667 m2，有3口共24×667 m2池塘感染鱖魚傳染性脾腎壞死病，病死率為18%。試驗(yàn)表明，良種親本繁殖的后代苗種對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病雖有一定的抗病力，但在周邊池塘暴發(fā)該病時(shí)，也會(huì)感染發(fā)病死亡。

試驗(yàn)池塘中，南方苗種在病害流行季節(jié)，尤其在梅雨季節(jié)，氣溫28～30℃期間，發(fā)病病死率急劇上升，呈暴發(fā)性死亡。試驗(yàn)表明，近年的南方苗種對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病抗病力較弱，從全場及周邊鱖魚養(yǎng)殖區(qū)域病害調(diào)查情況統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率達(dá)65%，病死率達(dá)50%。

由于外地購回的鱖魚苗種生產(chǎn)企業(yè)或個(gè)人不注重親本選種、良種更新以及病害檢疫，親本自身攜帶鱖魚傳染性脾腎壞死病病毒，通過垂直方式傳播后代，當(dāng)養(yǎng)殖環(huán)境條件符合發(fā)病條件時(shí)，導(dǎo)致暴發(fā)。另外，未經(jīng)選育的親本繁殖的后代對(duì)鱖魚傳染性脾腎壞死病抗病力差，在外部養(yǎng)殖條件適宜發(fā)病時(shí)，也會(huì)導(dǎo)致該病的發(fā)生。

10.3969/j.issn.1004-2091.2017.02.013

2016-08-31）

江蘇省水產(chǎn)三新工程重大項(xiàng)目（Y2013-27、D2015-15）