■文/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當(dāng) 秦四海

某規(guī)?；守i場(chǎng)呼吸道疾病的診斷與防控

■文/山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 陳同煜 彭 濤 王玉超 古金元 胡東方 劉思當(dāng) 秦四海

冬季作為豬呼吸道疾病的高發(fā)季節(jié)，大小豬場(chǎng)尤其是豬舍條件簡(jiǎn)陋或經(jīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)呢i群患呼吸道疾病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。山東某規(guī)?；守i場(chǎng)通過長(zhǎng)途運(yùn)輸購(gòu)進(jìn)某種豬公司60日齡左右的仔豬1,000多頭，進(jìn)場(chǎng)1周豬群即出現(xiàn)咳嗽、氣喘、發(fā)熱并伴有腹瀉癥狀，發(fā)病率20%，病死率10%，是一起傳播迅速的急性呼吸道疾病。通過病死豬剖檢診斷、細(xì)菌分離鑒定、組織病理學(xué)檢查、ELISA試驗(yàn)和分子生物學(xué)檢測(cè)，確診為一場(chǎng)由應(yīng)激繼發(fā)的呼吸道細(xì)菌感染，并導(dǎo)致豬群對(duì)重要病毒病抵抗力下降，通過藥敏試驗(yàn)選擇敏感藥物，對(duì)豬群實(shí)施了科學(xué)的藥物防治并對(duì)相關(guān)病毒性疾病進(jìn)行了免疫，使該豬場(chǎng)疫情得以迅速控制，挽回了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

豬；呼吸道疾?。辉\斷；防控

豬呼吸道疾病是危害豬場(chǎng)穩(wěn)定生產(chǎn)的首要疾病，因其致病因素復(fù)雜，涉及細(xì)菌、病毒、支原體、寄生蟲、不良的環(huán)境及飼養(yǎng)管理等，往往難究其根源，因此稱其為呼吸道疾病綜合征(PRDC)。隨著疫苗制品的質(zhì)量提高和養(yǎng)殖戶免疫意識(shí)的增強(qiáng)，豬場(chǎng)病毒性疾病的防控顯著改善，但卻輕視了細(xì)菌性疾病對(duì)豬呼吸道的危害。近年來豬場(chǎng)PRDC頻發(fā)，尤其是許多中小規(guī)模豬場(chǎng)或散養(yǎng)戶由于引種或外購(gòu)仔豬育肥使該病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，多數(shù)豬場(chǎng)在購(gòu)豬1月內(nèi)即出現(xiàn)不同程度的疫情。通過多起病例檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在危害豬呼吸道的細(xì)菌性疾病中，支原體、副豬嗜血桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌以及巴氏桿菌占據(jù)了主導(dǎo)位置，該類病菌通常條件下不會(huì)出現(xiàn)大規(guī)模暴發(fā)，以隱性感染居多，在冷熱交替、氣候突變、長(zhǎng)途運(yùn)輸或飼料改變等應(yīng)激誘發(fā)狀態(tài)下易引起PRDC流行，?；彀l(fā)或并發(fā)病毒性疾病，使病情復(fù)雜化。下面介紹一起規(guī)?；瘜I(yè)育肥豬場(chǎng)呼吸道疫情的診斷與防治，為豬場(chǎng)呼吸道疾病的診斷防控提供參考借鑒。

1 背景

山東省某規(guī)?；瘜I(yè)育肥豬場(chǎng)于2016年12月1日遠(yuǎn)距離引進(jìn)某種豬公司1,600頭20～30kg保育豬育肥，進(jìn)場(chǎng)1周后豬群即出現(xiàn)部分仔豬發(fā)燒(39.5～40.5℃)、咳嗽、氣喘，并有腹瀉病癥，有的病豬表現(xiàn)耳朵發(fā)紺、被毛粗亂、消瘦癥狀，以呼吸道病癥最為明顯，短時(shí)間內(nèi)發(fā)病率高達(dá)20%，死亡率10%，仔豬前期免疫程序不明，發(fā)病后經(jīng)緊急投服氟苯尼考、阿莫西林及中藥，效果不佳，遂前來就診。

2 綜合診斷

2.1 病豬臨床檢查

送檢病豬主要表現(xiàn)咳嗽、氣喘，呈明顯腹式呼吸，體表被毛粗亂、精神沉郁、瘦弱、耳朵發(fā)紺等癥狀。

2.2 病豬剖檢病變

下頜及肺門淋巴結(jié)腫大出血，腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大(圖1-A)；肺臟硬實(shí)暗紅色腫脹，小葉間質(zhì)水腫增寬，有的被膜附有纖維蛋白滲出物(圖1-B)；有的發(fā)生纖維素性心包炎，心臟呈“絨毛心”樣變(圖1-C)；胸腔、腹腔積液(圖1-D、E)；肝臟淤血并附有纖維素；有的病豬結(jié)腸黏膜出血、潰瘍(圖1-F)。

圖1 病豬剖檢病變

2.3 組織病理學(xué)病變

對(duì)剖檢豬的淋巴結(jié)、脾臟、腎臟、心臟、肺臟、腦組織采樣，10%中性福爾馬林溶液固定，常規(guī)方法制作石蠟切片，H.E染色，鏡檢。可見淋巴結(jié)毛細(xì)血管充血、漿液滲出，呈漿液性淋巴結(jié)炎病變(圖2-A)；脾臟充血、出血，呈敗血脾病變(圖2-B)；肺間質(zhì)充血，肺泡內(nèi)大量漿液、纖維素滲出，呈大葉性肺炎病變(圖2-C)；腎間質(zhì)淤血、腎小管上皮細(xì)胞變性壞死(圖2-D)；心肌纖維呈現(xiàn)空泡變性(圖2-E)；腦血管充血，神經(jīng)元空泡變性、壞死(圖2-F)。

2.4 病原學(xué)和血清學(xué)檢查

因該場(chǎng)豬群發(fā)病率和死亡率均較高，首先懷疑是否有藍(lán)耳病野毒感染，除對(duì)病死豬剖檢，采集腦、脾臟、肝臟、腎臟、淋巴結(jié)及扁桃體組織液氮保存，同時(shí)隨機(jī)采集發(fā)病豬群血清18份，離心，-20℃?zhèn)浯?。將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量組織加入滅菌PBS液并研磨成勻漿，9,000rpm離心4min，取上清液，同時(shí)分成18份血清，每份吸出20μL折合1份樣品，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/RNA kit(批號(hào)為K10314)提取病毒核酸。根據(jù)GenBank中公布的序列設(shè)計(jì)豬藍(lán)耳病病毒片段為372bp的特異性引物，用PCR/RT-PCR方法擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下?lián)l帶位置判定病豬的病原感染狀況。

使用韓國(guó)金諾試劑盒對(duì)備存血清進(jìn)行豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬病毒gE、2型圓環(huán)病毒抗體水平檢測(cè)，4種病毒檢測(cè)均按照說明書步驟嚴(yán)格規(guī)范操作。判定標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)結(jié)果如下：

豬瘟病毒(CSFV)：阻斷率≥40%為陽(yáng)性；阻斷率＜40%為陰性。

豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV)：S/P值≥0.40為陽(yáng)性；S/P＜值0.40為陰性。

豬偽狂犬病病毒gE(PRV gE)：S/ N≤0.6為陽(yáng)性；S/N＞0.6為陰性。

豬2型圓環(huán)病毒(PCV 2)：S/ P≥0.4為陽(yáng)性；S/P＜0.3為陰性，之間為可疑。

圖2 病豬組織病理學(xué)變化

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

由表1可知：部分豬只豬瘟抗體檢測(cè)陰性，且均勻度較差，豬瘟免疫狀態(tài)較差，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較大。藍(lán)耳抗體全部陽(yáng)性，離散度較大，豬群藍(lán)耳病病毒活躍，存在發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。偽狂犬gE抗體陽(yáng)性率較高，雖病豬未表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但嚴(yán)重的呼吸道病癥與之不無(wú)關(guān)系。2型圓環(huán)病毒抗體幾乎全部陽(yáng)性，由于該豬群免疫過一次圓環(huán)病毒疫苗，鑒于發(fā)病豬腹股溝及腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大，不能排除豬群存在圓環(huán)病毒感染，導(dǎo)致豬只體質(zhì)下降，從而促進(jìn)呼吸道疾病的發(fā)生。

2.5 細(xì)菌分離鑒定及藥物敏感試驗(yàn)

采集不同病豬肺組織分別劃線接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSA培養(yǎng)基及鮮血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48h后TSA培養(yǎng)基可見針尖大小，無(wú)色透明，光滑濕潤(rùn)的菌落形態(tài)，鮮血瓊脂平板可見淡灰色、圓形、濕潤(rùn)、露珠樣小菌落。革蘭氏染色鏡檢，觀察到TSA培養(yǎng)基菌體呈革蘭氏陰性細(xì)小桿菌，有多種不同形態(tài)，從單個(gè)球桿菌到細(xì)絲桿菌不等(圖4)；鮮血瓊脂平板菌體為革蘭氏陰性短桿菌或球桿菌，散在或成雙(圖5)。初步診斷疑似副豬嗜血桿菌(HPS)與巴氏桿菌(PM)混合感染。同時(shí)，挑取細(xì)小單菌落接種于含新生牛血清(終濃度10%)和NAD(終濃度20g/mL)的TSB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行增菌，37℃，12h后挑取菌液進(jìn)行副豬嗜血桿菌(HPS)和巴氏桿菌(PM)特異性PCR鑒定。

分別挑取兩種細(xì)菌及培養(yǎng)基其他形態(tài)菌落均勻涂布于新鮮血瓊脂平板上，選取頭孢噻呋鈉、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、嗯喏沙星、阿莫西林、慶大霉素、丁胺卡那霉素、磺胺間甲氧嘧啶8類藥敏片，每片藥物含量10μg。無(wú)菌鑷子將藥敏片按一定間隔分別平貼于培養(yǎng)基表面，于37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。根據(jù)抑菌圈直徑(?)判定細(xì)菌對(duì)藥物的敏感程度，判定標(biāo)準(zhǔn)為：?≥25mm為極度敏感；15mm≤?＜25mm為高度敏感；10mm≤?＜15mm為中度敏感；?＜10mm為低度敏感；無(wú)抑菌圈則為耐藥。結(jié)果顯示：頭孢噻呋鈉、丁胺卡那霉素極度敏感，恩諾沙星、磺胺間甲氧嘧啶高度敏感，阿莫西林、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考低度敏感。

表1 4種病毒血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 PCR/RT-PCR引物序列

圖4 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖5 分離菌株革蘭氏染色 200X

圖6 1.5%瓊脂糖凝膠電泳

3 疾病診斷

綜合分析實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，導(dǎo)致本次疫情的主要原因是長(zhǎng)途運(yùn)輸應(yīng)激所誘發(fā)的以副豬嗜血桿菌和巴氏桿菌為主的細(xì)菌急性感染所導(dǎo)致的以大葉性肺炎為主要病變特征的重癥PRDC，且不排除支原體、傳染性胸膜肺炎放線桿菌及魏氏梭菌的參與。另外，冬季寒冷、豬舍飼養(yǎng)密度大、通風(fēng)不良也是引發(fā)本次疫情的重要原因。因豬群運(yùn)輸應(yīng)激并造成了呼吸道細(xì)菌病的暴發(fā)，進(jìn)而造成對(duì)藍(lán)耳病、豬瘟、偽狂犬病免疫抵抗力下降，豬群存在暴發(fā)上述疫病的巨大風(fēng)險(xiǎn)。

4 防控

結(jié)合該豬場(chǎng)流行病學(xué)、病原學(xué)、血清學(xué)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，制定以下治療方案：

4.1 隔離病豬

及時(shí)挑離發(fā)病豬只，單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，切斷傳染源；嚴(yán)控不同圈舍飼養(yǎng)人員和外來人員交互串訪，切斷傳播媒介。

4.2 衛(wèi)生消毒

選用刺激性較小的過氧化劑類消毒液全群緊急消毒，包括豬舍所有空間，疫情期間育肥舍和病豬隔離舍每日消毒一次。

4.3 改善飼養(yǎng)環(huán)境

降低圈舍飼養(yǎng)密度，加強(qiáng)豬舍御寒保暖，及時(shí)清理糞污和經(jīng)常通風(fēng)，保持圈舍清潔干燥及空氣新鮮。

4.4 藥物防治與疫苗加強(qiáng)免疫

4.4.1 對(duì)發(fā)病豬只應(yīng)用頭孢噻呋鈉針劑，5mg/kg體重，肌肉注射，1次/d，連用5d。

4.4.2 全群用包被恩諾沙星和硫酸新霉素20g/100kg飼料，拌料，發(fā)病豬用量加倍，連用5d。

4.4.3 全群電解質(zhì)、維生素C或黃芪多糖飲水，增強(qiáng)豬只抵抗力，減少應(yīng)激反應(yīng)。

4.4.4 待疫情穩(wěn)定后，全群普免1次高效豬瘟細(xì)胞疫苗，間隔1周普免偽狂犬弱毒疫苗，以平衡豬群抗體均勻度，減少隱性感染豬只的排毒和臨床癥狀。

經(jīng)過實(shí)施以上防治措施，該豬場(chǎng)疫情得到有效控制，短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)穩(wěn)定生產(chǎn)?！?/p>