田肖++紀高華++任友安

摘要：對影響動物免疫抗體檢測結果的因素進行了分析，并提出了相應的對策。

關鍵詞：動物免疫；抗體檢測；影響因素

中圖分類號：S851 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2017）01-0039-02

動物免疫抗體水平檢測是對某一區(qū)域內動物免疫效果進行檢驗的一項重要的技術手段，可以及時、準確地掌握該區(qū)域內動物免疫抗體的整體水平，是動物疫病防控工作的重要基礎，也是動物疫情流行病學調查和疫情分析評判的關鍵環(huán)節(jié)，可為制定科學的免疫程序、考核免疫質量、綜合分析動物疫情發(fā)生的風險及應采取的防控措施提供理論依據(jù)。但由于抗體水平檢測工作程序多、過程長，其檢測結果會受到很多因素的影響，往往與真實水平還存在著一定的差異。筆者在工作中對各種影響因素進行了分析，并提出了相應的措施，供相關人員參考。

1 免疫因素

1.1 動物自身因素

動物的遺傳因素、營養(yǎng)狀況、母源抗體的干擾和免疫抑制疾病等因素將直接影響到動物免疫應答的強弱。機體對接種的免疫應答在一定程度上是受遺傳控制的，因此不同品種甚至同一品種不同個體的動物，對同一種抗原的免疫反應強弱也有差別。有的動物個體甚至有先天免疫缺陷，從而導致免疫失敗。動物維生素及氨基酸的缺乏都會使機體的免疫功能下降；種畜禽個體免疫應答的差異以及不同批次動物來自不同的種畜禽等原因，造成新生幼畜和雛禽母源抗體水平參差不齊，若母體抗原水平過高，反而干擾了后天免疫，不能產生應有的免疫應答；有些疾病嚴重影響疫苗的免疫效果，引起免疫抑制，從而影響疫苗的免疫效果。環(huán)境衛(wèi)生狀況不良，圈舍及周圍環(huán)境中存在大量的病原微生物，在使用疫苗期間動物已受到病原的感染，這些都會影響疫苗免疫的效果，從而影響到了動物免疫抗體的檢測。

1.2 疫苗方面

疫苗質量、疫苗的保存和運送、疫苗的使用是免疫成敗的關鍵因素。應從正規(guī)生產單位購買疫苗，保證疫苗效價和抗原含量以及疫苗的正常形狀等，正確保存和運輸疫苗，確保疫苗質量和免疫效果。要嚴格按照疫苗的使用說明使用疫苗，嚴格遵守免疫操作規(guī)程，確保免疫效果，盡量避免疫苗聯(lián)合使用，以防止兩種疫苗間的互相干擾，影響抗體的產生，二者要間隔1周以上接種。同時根據(jù)當?shù)匾卟×餍星闆r和本場實際而制定合理免疫程序，以保證免疫效果。

2 樣品因素

2.1 樣品的采集時機

動物在進行免疫接種后，要經過一定的時間才能在體內產生免疫抗體，并逐漸到達峰值，體內產生抗體時間因所使用疫苗的種類不同而異，一般活疫苗產生抗體的時間早，而滅活疫苗產生抗體的時間較晚。所以一定要選擇好檢測樣品的采集時間，通常進行免疫抗體檢測的采樣時間為疫苗接種后28 d最合適，所檢測出的結果能夠判定動物的免疫效果。

2.2 樣品的采集方法

用于免疫抗體水平檢測的是樣品血清，因此血清的質量直接影響到抗體水平的檢測結果，血液的采集方法、血清的析出、血清的分離過程都是關系血清質量的因素。因此，在采集血樣時，一定要遵守操作規(guī)程，采血部位要嚴格消毒，防止污染，采血量要適當（一般為2～3 mL），要一次性采夠量，采血完成后，向安培瓶或離心管中注入時，應將針頭取掉，沿瓶壁緩慢注入，以免產生氣泡或造成溶血，影響血清的析出和質量。

2.3 樣品的處置和保管

血液采集后處置不當會影響血清的析出和質量，血清的處置和保管直接影響到抗體檢測的結果，所以必須做好樣品的保管和處置。一般用于抗體檢測的血液不加任何抗凝劑，用于保存血液和血清的安培瓶或塑料離心管一定要清潔、干燥、無污染，血清析出后要及時進行分裝，用吸管或注射器緩緩吸出，裝入準備好的安培瓶或離心管中保存。一般情況下，在5 d內進行檢測試驗的血清可放置于4 ℃的冰箱內保存，待檢超過5 d的，要置-20 ℃下冷凍保存，并盡量避免反復凍融。

2.4 樣品的分裝

樣品的分裝過程中，器械的污染、交叉使用均可影響到抗體檢測結果，所以，在樣品分裝過程中，所使用的吸管、注射器、離心管等器械一定要干燥、清潔，不能交叉重復使用，特別不能將不同的樣品混合成一份，也不能一式多樣。

3 實驗室因素

3.1 檢測器械

在實驗室進行抗體檢測的過程中，所使用檢測器械的質量，器械的清洗、保管方法，儀器的準確性、靈敏性等都將影響到檢測結果的準確性，特別是不按照有關規(guī)定對各種儀器設備進行維護和校準，認為只要所用儀器不出故障就可正常使用，忽略了由于儀器出現(xiàn)偏差嚴重影響了實驗結果的準確性。所以，一定要保證檢測器械的質量，每次試驗后要對所使用過的器械進行徹底清洗、消毒，嚴格按照規(guī)定的方法保管器械，定期對試驗儀器進行校準和測試，確保其準確性和靈敏度，從而保證檢測結果的準確性。

3.2 檢測試劑

做抗體檢測時所用的試劑雖然都是經有關部門審核批準的生產企業(yè)生產，但不同生產廠家生產的試劑，其特異性和靈敏性存在差異，同一廠家不同批次的產品也有差別，試劑在運輸和保管中出現(xiàn)包裝損壞、泄漏、污染等均會影響到檢測結果。因此，應選擇質量優(yōu)良的檢測試劑，并嚴格按照試劑的說明書進行保管和使用，堅決不能使用過期試劑。

3.3 檢測人員

實驗室所有檢測試驗都是通過檢驗人員的具體操作而完成的，檢驗人員的理論和技術操作水平是關系到檢測結果的最關鍵因素，個別檢驗員對試驗原理理解不透，在試驗過程中不能嚴格遵守操作規(guī)程，不能熟練掌握試驗器械和儀器的使用，出現(xiàn)加樣誤差、加樣器與吸頭不配套、重復使用吸頭等，導致加樣不準確，造成檢測結果出現(xiàn)偏差、檢驗員對試驗結果判定不準確等現(xiàn)象，均可導致抗體水平的檢測結果不準確。所以，實驗室配備的人員要有相當?shù)膹氖卵鍖W檢測的工作資歷并經過嚴格的培訓，每個工作人員都要認識到此項工作的特殊性、嚴肅性，樹立高度的責任感和高度負責的精神，要熟練掌握相關的技術原理和操作方法，特別是檢測的程序和規(guī)范，熟練掌握與實驗有關的儀器設備，要讓實驗人員認識到儀器的維護和校正的重要性，對所用儀器設備定期檢定校準和維護以保證每次試驗的準確性。

3.4 實驗室溫度

抗體檢測試驗的原理就是抗原抗體反應，而抗原抗體反應需要一定的時間和特定的反應溫度，在一些試驗中，由于抗原被包被在固相表面，抗原抗體反應只能在固相表面進行，遠離固相表面的物質要依靠濃度差的改變緩慢地加入反應，而且這個反應要在特定的溫度下進行。一些實驗人員為求快出結果而使反應時間不夠和溫度不合適導致試驗出現(xiàn)錯誤的結果。因此，在進行抗體檢測試驗時，實驗室溫度一般要保持在20～25 ℃，在操作時一定要使各步反應達到足夠的時間并保證其溫度條件，確保試驗結果的準確性。

4 小結

經分析，影響動物免疫抗體水平檢測結果的因素主要有樣品的采集、處理、保存，檢測試劑的質量，試驗儀器和器械的維護和保養(yǎng)，檢驗人員的素質等因素。所以，在做動物免疫抗體水平檢測時，一定要做好樣品的采集處理和保存工作，保證樣品質量；選擇優(yōu)良的試劑，并嚴格按照說明書進行操作；加強對實驗室設備和儀器的維護和保養(yǎng)；嚴格遵守試驗操作規(guī)程和要求，確保檢測結果的準確性。