王利民，胡朝軍，張蜀瀾，李夢(mèng)濤，曾小峰

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 風(fēng)濕免疫病學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京 100730)

ChinJAllergyClinImmunol，2017，11(2)：106- 111

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種復(fù)雜的多系統(tǒng)損傷的自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制不明，臨床表現(xiàn)復(fù)雜[1]。SLE患者最重要的特征之一是體內(nèi)能檢測(cè)到多種自身抗體，目前SLE患者體內(nèi)可檢測(cè)到180多種自身抗體[2]，其中一些可用于疾病的診斷，一些可作為疾病活動(dòng)的標(biāo)志物?？筪s-DNA抗體和抗Sm抗體是目前公認(rèn)的SLE特征性自身抗體，具有高特異度，但抗Sm抗體的陽(yáng)性率較低，大約5%～30%[3]。研究表明，Sm抗原為剪接復(fù)合體的一部分，是由9種不同的多肽組成，相對(duì)分子質(zhì)量9 000～29 500，包括B(B1，28 000)，B′(B2，29 000)，N(B3，29 500)，D1(16 000)，D2(16 500)，D3(18 000)，E(12 000)，F(xiàn)(11 000)，G(9 000)，其中Sm抗原最主要的抗原性表位集中于B和D1多肽[4]。本研究采用基于SmD1多肽的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)抗SmD1抗體，探討其在SLE中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)象與方法

對(duì)象

來(lái)源于2011年2月至2015年2月在北京協(xié)和醫(yī)院就診并納入中國(guó)系統(tǒng)性紅斑狼瘡治療和注冊(cè)研究數(shù)據(jù)庫(kù)的150例SLE患者，其中女性140例，男性10例，年齡14～56歲，平均(31.2±9.6)歲，其中有101例系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)度評(píng)分(systemic lupus erythematosus diseaseactivity index，SLEDAI)>4分的活動(dòng)性SLE患者，診斷符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American College of Rheumatology,ACR)1997年推薦的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。非SLE自身免疫性疾病患者146例，包括：強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)20例，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)40例，干燥綜合征(Sjogren’s syndrome，SS)33例，系統(tǒng)性硬化癥(systemic sclerosis，SSc)53例，診斷均符合相應(yīng)的國(guó)際分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[6- 9]。健康體檢者70例，來(lái)源于北京協(xié)和醫(yī)院健康體檢中心(表1)。采集患者清晨空腹靜脈血4 ml，室溫凝集1 h后，4 ℃ 1 500×g離心5 min分離血清，將血清分裝并凍存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

試劑

抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司)；抗SmD1抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(德國(guó)胡曼實(shí)驗(yàn)診斷股份公司)；SUNRISE酶標(biāo)儀(奧地利Tecan公司)。

方法

ELISA檢測(cè)抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體：血清1∶200稀釋后加100 μl入微孔與抗原室溫孵育反應(yīng)30 min(同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性和陰性對(duì)照)，洗板3次，加入酶標(biāo)記的二抗避光室溫孵育30 min，洗板3次，加入底物反應(yīng)15 min后終止，在SUNRISE酶標(biāo)儀上檢測(cè)吸光度(absorbance，A)值。抗Sm抗體以≥20 RU/ml為陽(yáng)性，抗ds-DNA抗體以≥100 IU/ml為陽(yáng)性。

表1　研究對(duì)象的性別和年齡分布Table 1　The gender and age distribution of the subjects

活動(dòng)性紅斑狼瘡指SLEDAI>4

ELISA檢測(cè)抗SmD1抗體：血清1∶100稀釋后加100 μl入微孔與抗原室溫孵育反應(yīng)1 h(同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性和陰性對(duì)照)，洗板3次，加入酶標(biāo)記的二抗避光室溫孵育30 min，洗板3次，加入底物反應(yīng)10 min后終止，在SUNRISE酶標(biāo)儀上檢測(cè)A值。以≥25 U/ml為陽(yáng)性。

觀察指標(biāo)

比較抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體陽(yáng)性對(duì)診斷SLE的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性；比較抗SmD1抗體在頰部紅斑、皮疹、脫發(fā)、腎臟受累、關(guān)節(jié)炎、口腔潰瘍、漿膜炎、血液系統(tǒng)受累、神經(jīng)系統(tǒng)受累、間質(zhì)性肺炎、肺動(dòng)脈高壓等活動(dòng)性SLE常見(jiàn)臨床表現(xiàn)中的表達(dá)情況；觀察抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體的相互關(guān)系。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0 for Windows(SPSS.Inc.，Chicago，IL)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體三者的陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。抗SmD1抗體與SLE的常見(jiàn)臨床表現(xiàn)相互關(guān)系分析采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　　果

SLE患者抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性比較

在101例活動(dòng)性SLE患者中抗SmD1抗體的陽(yáng)性率為83.17%，49例穩(wěn)定SLE中抗SmD1抗體的陽(yáng)性率為51.02%，兩者陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.52，P=0.002)。150例SLE患者的抗SmD1抗體的敏感度為66.00%，明顯高于抗Sm抗體敏感度36.00%(χ2=27.01，P<0.05)和抗ds-DNA抗體的敏感度51.33%(χ2=6.65，P<0.05)；抗SmD1抗體的特異度為87.50%，低于抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體的特異度98.15%(χ2=18.38，P<0.05)和98.61%(χ2=20.63，P<0.05)；抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體的準(zhǔn)確性分別為78.69%、72.68%、79.23%，兩兩比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為3.59、0.03，均P>0.05)(表2)。

表2　抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體的敏感度、特異度和準(zhǔn)確性比較Table 2　Compare of sensitivity, specificity, and accuracy among anti-SmD1， anti-Sm, and anti-dsDNA antibody

抗SmD1抗體與SLE臨床表現(xiàn)的關(guān)系

在101例活動(dòng)性SLE患者中，對(duì)抗SmD1抗體與SLE的常見(jiàn)臨床表現(xiàn)：頰部紅斑、皮疹、脫發(fā)、腎臟受累、關(guān)節(jié)炎、口腔潰瘍、漿膜炎、血液系統(tǒng)受累、神經(jīng)系統(tǒng)受累、間質(zhì)性肺炎、肺動(dòng)脈高壓等進(jìn)行分析，結(jié)果表明頰部紅斑與脫發(fā)的SLE患者與不存在上述癥狀的患者相比，抗SmD1抗體表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體相互關(guān)系

單獨(dú)抗SmD1抗體陽(yáng)性率為13.33%，單獨(dú)抗Sm抗體陽(yáng)性率為1.33%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=15.89，P<0.05)。單獨(dú)抗ds-DNA抗體陽(yáng)性率為8.00%，與單獨(dú)抗SmD1抗體陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.24，P>0.05)。在抗ds-DNA抗體陰性的SLE中抗SmD1抗體陽(yáng)性率為22.67% (表4，圖1)。

表3　101例活動(dòng)性SLE中抗SmD1抗體與臨床表現(xiàn)的關(guān)系Table 3　Relationship between anti-SmD1 antibody and clinical feature in 101 patients with active SLE　(n)

表4　抗SmD1抗體、抗Sm抗體和抗ds-DNA抗體陽(yáng)性的相互關(guān)系Table 4　Cross positivity analysis of anti-SmD1,anti-Sm,and anti-dsDNA antibody

圖1　150例SLE患者中三種抗體陽(yáng)性的相互關(guān)系Fig 1　Relationship of three kinds of positive antibodies in 150 patients with SLE

討　　論

SLE是一種臨床表現(xiàn)復(fù)雜，多系統(tǒng)多臟器受損的全身性自身免疫性疾病。SLE患者常伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)和皮膚、腎臟等器官的功能障礙。免疫學(xué)檢測(cè)在SLE的診療中非常重要，已經(jīng)被納入到SLE的診療指南[5]。本研究中采用基于SmD1多肽的ELISA檢測(cè)SLE患者及其對(duì)照組的抗SmD1抗體，研究結(jié)果顯示抗SmD1抗體的敏感度為66.00%，明顯高于抗Sm抗體敏感度(36.00%，χ2=27.01，P<0.05)和抗ds-DNA抗體的敏感度(51.33%,χ2=6.65，P<0.05)。

抗Sm抗體被認(rèn)為是SLE的標(biāo)志性抗體，在SLE的診斷中具有高特異度，被ARC作為診斷條件之一，但其陽(yáng)性率較低。因?yàn)镾m抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，至少有9種相對(duì)分子質(zhì)量從9 000～29 500抗原多肽，以SmB1/B2(28 000、29 000)和SmD(16 000)抗原性最強(qiáng)。其中SmB1/B2在抗原序列上與核糖核蛋白(ribose nucleoprotein，RNP)有相似的片段PPPGMRPP，導(dǎo)致交叉反應(yīng)[10]，而后者在MCTD中的陽(yáng)性率較高。最近的研究發(fā)現(xiàn)以SmD1多肽序列(aa 83～119)取代整個(gè)Sm分子作為抗原可以顯著提高SLE患者的抗Sm抗體的陽(yáng)性檢出率[11]。本研究結(jié)果也證實(shí)抗SmD1抗體敏感度高于抗Sm抗體敏感度，但抗SmD1抗體特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值稍差?？筍mD1抗體的敏感度66.00%與報(bào)道的在SLE患者中有36%～70%的陽(yáng)性率[12]基本一致。單獨(dú)抗SmD1抗體陽(yáng)性率為13.33%，高于單獨(dú)抗Sm抗體陽(yáng)性率1.33%，單獨(dú)檢測(cè)抗SmD1抗體優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)抗Sm抗體(P<0.05)，特別是在抗ds-DNA抗體陰性的SLE患者中檢測(cè)抗SmD1抗體具有重要臨床意義。

SLE相關(guān)的自身抗體可以在SLE患者具有典型臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室異常前10年檢測(cè)到，現(xiàn)有研究表明SLE患者體內(nèi)最早出現(xiàn)的是抗SSA抗體，而抗Sm抗體一般可在SLE患者確診前1.5年檢測(cè)出來(lái)[13]，目前尚不明確抗SmD1抗體是否可在SLE 確診前檢測(cè)出。SLE臨床癥狀多種多樣，常伴發(fā)頰部紅斑、脫發(fā)、腎病、癲癇、肺動(dòng)脈高壓、低補(bǔ)體等，本研究結(jié)果顯示抗SmD1抗體與SLE的常見(jiàn)臨床表現(xiàn)頰部紅斑、脫發(fā)的發(fā)生差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SLE患者常伴有不同程度的腎臟損害導(dǎo)致狼瘡性腎炎，狼瘡性腎炎被認(rèn)為是免疫復(fù)合物沉積引起，有報(bào)道發(fā)現(xiàn)抗Sm抗體、抗ds-DNA抗體與腎臟疾病關(guān)系緊密[14]，本研究中抗SmD1抗體與腎臟疾病關(guān)系顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。低補(bǔ)體同時(shí)伴有抗Sm抗體是無(wú)蛋白尿的隱性狼瘡腎炎的前兆[15]，本研究表明抗SmD1抗體與低補(bǔ)體的發(fā)生差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。SLE疾病發(fā)展中血細(xì)胞受到多種抗血細(xì)胞抗體作用，出現(xiàn)單系或多系減少[16]，本研究表明抗SmD1抗體在有無(wú)血液疾病組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。有報(bào)道表明急性精神紊亂與抗Sm抗體相關(guān)[17]，本研究表明抗SmD1抗體在有無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。肺動(dòng)脈高壓是SLE的嚴(yán)重并發(fā)癥，已經(jīng)成為中國(guó)SLE患者第三大死亡原因[18]，過(guò)去研究表明抗Sm抗體與肺動(dòng)脈高壓有關(guān)[19]，本研究表明抗SmD1抗體在有無(wú)肺動(dòng)脈高壓組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。另抗SmD1抗體在有無(wú)關(guān)節(jié)炎、有無(wú)口腔潰瘍、漿膜炎發(fā)生、有無(wú)間質(zhì)性肺炎組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究所得結(jié)論仍需要更大樣本進(jìn)一步研究。

綜上所述，抗SmD1抗體檢測(cè)對(duì)SLE患者疾病診斷和病情評(píng)估具有重要的臨床意義，特別是在抗ds-DNA抗體陰性的SLE患者中檢測(cè)抗SmD1抗體具有重要臨床價(jià)值。對(duì)抗SmD1抗體與SLE患者臨床表現(xiàn)及臟器受損關(guān)系的研究仍需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。

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