劉軍++程云斌++劉騫++沈菁

摘要：建立液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)油菜子、植株和土壤中三唑醇?xì)埩袅康姆椒?。油菜子和植株?jīng)乙腈提取，經(jīng)Carbon/NH2柱凈化，實(shí)現(xiàn)樣品的制備；土壤則經(jīng)乙腈提取濃縮后直接檢測(cè)。在島津VP-ODS色譜柱上，以乙腈+0.1%甲酸水為流動(dòng)相，梯度洗脫，采用電噴霧正離子（ESI+）sim掃描離子模式，以m/z 296為定量檢測(cè)離子。結(jié)果表明，三唑醇保留時(shí)間在11.9 min左右。在0.02～2.00 mg/L的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.999 7。在油菜子、植株、土壤中添加0.02、0.20、2.0 mg/kg 3個(gè)濃度的三唑醇標(biāo)樣，其回收率為71%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）均小于10%，最低檢出量（S/N=10）為1.7×10-9 g。該方法準(zhǔn)確度和精密度均能滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

關(guān)鍵詞：三唑醇；殘留；液相色譜-質(zhì)譜；油菜子；土壤

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）22-5934-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.22.051

Determination of Triadimenol Residue in Rapeseed，Plants and Soil by LC-MS

LIU Jun，CHENG Yun-bin，LIU Qian，SHEN Jing

（Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science，Wuhan 430064，China）

Abstract：A method for determination of triadimenol residue in rapeseed，plants and soil was established by LC-MS. Triadimenol residue was extracted from sample with acetonitrile，cleaned up by ProElut CARB/NH2 SPE to achieve sample preparation，and separatesd on the Shimadzu VP-ODS column，using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution as mobile phase. Determination was made by using ESI and under the mode of SIM. Quectionantitative detection of ions at m/z 296，the retention time of pyraclostrobin was about 11.9 min. Linearity were held in the ranges of 0.02～2.00 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 7. The average recoveries of triadimenol in rapeseed，plants and soil at the spiked amounts of 0.02～2.00 mg/kg were 71%～110%，and the relative standard deviation was lower than 10%. The limit of detectable amount（S/N=10） was 1.7×10-9 g. The accuracy and precision of this method can meet the determinate requirements.

Key words： triadimenol； residue； LC-MS； rapeseed； soil

三唑醇（Triadimenol），又名百坦，屬于高效、廣譜的三唑類(lèi)殺菌劑。目前，關(guān)于三唑醇的檢測(cè)方法有黃超群等[1]用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中7種三唑醇類(lèi)殺菌劑的殘留量；沈偉健等[2]采用固相分散萃取與氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中三唑醇的殘留量；徐穎潔[3]采用SPE-GC-μECD測(cè)定蔬菜中6種三唑類(lèi)農(nóng)藥的殘留量；分子印記法[4，5]以及大豆植株[6]、玉米植株[7]、大豆[8]、玉米[9]、香蕉[10，11]、煙葉[12]、小麥[13]、土壤[14]、水[15，16]、酒精飲料[17-19]等介質(zhì)中的殘留均有研究，但未有在油菜子中殘留檢測(cè)的報(bào)道。本研究檢測(cè)方法是為了解三唑醇在防治油菜作物菌核病后，油菜子、植株和土壤中三唑醇的殘留量水平，其針對(duì)性更強(qiáng)。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

LC-20AD型液相色譜儀（日本島津公司），配有LC-MS 2010 EV型質(zhì)譜檢測(cè)器和電噴霧電離源，自動(dòng)進(jìn)樣器，LC-MS工作站。

三唑醇（98%，江蘇劍牌農(nóng)化有限公司），甲醇、乙腈（色譜純，美國(guó)Baker公司），甲酸（99.0%，美國(guó)Acros Organics公司），氯化鈉（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），超純水用Barnstead超純水機(jī)制備，其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

油菜子：準(zhǔn)確稱(chēng)取磨碎的油菜子樣品5.0 g，先加10 mL純水充分浸潤(rùn)，再加入30 mL乙腈，搖勻超聲15 min，加入5.0 g NaCl 搖勻后超聲5 min， 3 500 r/min離心5 min。移取上清液12 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發(fā)近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1，V∶V，下同）待凈化。

油菜植株：準(zhǔn)確稱(chēng)取攪碎的油菜植株樣品10.0 g，加入30 mL 乙腈，14 000 r/min勻質(zhì)2 min，加入5.0 g NaCl再14 000 r/min勻質(zhì)1 min，3 500 r/min離心5 min。移取上清液6 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發(fā)近干，加入2 mL乙腈/甲苯（3/1）待凈化。

土壤：準(zhǔn)確稱(chēng)取晾干磨碎的土壤樣品5.0 g，加入10 mL純水充分浸潤(rùn)，加入30 mL乙腈，劇烈搖勻，超聲15 min，加入5.0 g NaCl搖勻后再超聲5 min，3 500 r/min離心5 min。移取上清液12 mL于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發(fā)近干，加入2 mL乙腈溶解過(guò)膜待檢測(cè)。

1.3 樣品凈化

用5 mL乙腈/甲苯（3/1）預(yù)淋洗Carbon/NH2柱（1 000 mg，6 mL），待淋洗液近干時(shí)迅速將油菜子、油菜植株的待凈化液轉(zhuǎn)移其中，10 mL乙腈/甲苯（3/1）淋洗，淋洗液收集于100 mL燒杯中，水浴70 ℃蒸發(fā)近干，加入2 mL乙腈溶解過(guò)膜待檢測(cè)。

1.4 液相色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：島津VP-ODS（150 mm×2.0 mm，5 μm）；流動(dòng)相采用含0.1%甲酸的水-乙腈，梯度洗脫（表1）；流速0.2 mL/min；進(jìn)樣體積5 μL；柱溫40 ℃；離子源ESI（+），SIM掃描模式（m/z 296）；CDL溫度250 ℃； 加熱模塊溫度200 ℃；霧化氣流速（N2）1.5 L/min；干燥氣（N2）壓力80 kPa；檢測(cè)電壓1.75 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量離子的選擇

在上述色譜條件下選擇Scan（+）模式，進(jìn)10 mg/L的三唑醇標(biāo)樣溶液，掃描范圍m/z 150～350，得到全掃描質(zhì)譜圖（圖1）。由圖1可見(jiàn)，m/z 296（M+H）的為目標(biāo)離子，所以選擇m/z 296為定量離子。以m/z 296為定量離子采用Sim（+）模式，油菜子中的三唑醇的添加回收、標(biāo)樣質(zhì)譜以及空白質(zhì)譜見(jiàn)圖2，油菜植株的質(zhì)譜見(jiàn)圖3，土壤中的質(zhì)譜見(jiàn)圖4。

2.2 線性范圍和檢出限

配制濃度為0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mg/L三唑醇標(biāo)樣，以m/z 296質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的三唑醇質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖5）。其線性回歸方程為Y=1.082×10-7X+89 220，線性相關(guān)系數(shù)r2=0.999 7。按 S/N=10的信噪比計(jì)算三唑醇最低檢出量為1.7×10-9 g。

2.3 SPE凈化柱淋洗溶劑體積的選擇

在空白油菜子5.0 g、油菜植株10.0 g中添加0.2 mg/kg的三唑醇標(biāo)樣，按上述方法提取，樣品凈化時(shí)淋洗溶劑乙腈/甲苯（3/1）的體積按每次5 mL，共5次，分開(kāi)收集，分別蒸發(fā)近干、定容，0.22 μm濾膜過(guò)濾，質(zhì)譜檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，選擇10 mL為最佳淋洗體積。

2.4 方法的添加回收率、精確度和最小檢出濃度

利用未施藥的油菜子、油菜植株、土壤樣品作為空白樣品，分別添加0.02、0.2、2.0 mg/kg 3個(gè)水平，每個(gè)水平5次重復(fù)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可見(jiàn)，添加樣品中三唑醇加標(biāo)回收率為71%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.5%～9.6%。以最小添加濃度0.02 mg/kg作為最小檢出濃度，其回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和最小檢測(cè)濃度都能滿(mǎn)足農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)的要求。

3 結(jié)論

本研究采用乙腈提取，Carbon/NH2柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)三唑醇在油菜子、油菜植株、土壤中的殘留，該方法操作簡(jiǎn)單，其添加回收率、精確度和最小檢出濃度均能達(dá)到農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)的要求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 黃超群，丁慧瑛，朱曉雨，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定蔬菜中7種三唑醇類(lèi)殺菌劑的殘留量[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2011，30（6）：656-660.

[2] 沈偉健，林 宏，趙增運(yùn)，等.固相分散萃取與氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中三唑醇的殘留量[J].色譜，2008， 26（4）：515-518.

[3]徐穎潔.SPE-GC-μECD測(cè)定蔬菜中6種三唑類(lèi)農(nóng)藥的殘留量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（18）：5813-5815.

[4] 胡 靜，褚建功，高文惠.三唑醇分子印跡聚合物的制備及在食品檢測(cè)中的應(yīng)用[J].藥物分析雜志，2011，31（12）：2260-2265.

[5] 劉麗梅，李志偉，于奕峰，等.三唑醇分子印跡整體柱用于結(jié)構(gòu)類(lèi)似物的分離與分析[J].農(nóng)藥，2007，46（10）：677-678.

[6] 李俊凱，王 勇，程 玲.氣相色譜法測(cè)定大豆植株中三唑醇?xì)埩袅垦芯縖J].長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，5（3）：58-59.

[7] 張偉國(guó)，陳姍姍，高金山，等.玉米植株中三唑酮、三唑醇-a、三唑醇-b殘留量測(cè)定[J].農(nóng)藥，2005，44（7）：324-325.

[8] 李春風(fēng)，沈偉健，蔣 原，等.分散固相萃取氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜法測(cè)定大豆和玉米中20種農(nóng)藥的殘留量[J].色譜，2009，27（2）：176-180.

[9] 沈偉健，桂茜雯，余可垚，等.氣相色譜-負(fù)化學(xué)離子源質(zhì)譜測(cè)定大豆和玉米中12種三唑類(lèi)殺菌劑的殘留量[J].色譜，2009，27（1）：91-95.

[10] 王明月，林靖凌.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定香蕉中的三唑醇?xì)埩鬧J].食品科學(xué)，2011，32（12）：292-295.

[11] 羅金輝，王明月.優(yōu)化氣相色譜法測(cè)定香蕉中三唑醇?xì)埩袅縖J].農(nóng)藥，2011，50（2）：128-129.

[12] 陳 萍，師君麗，孔光輝，等.煙葉中三唑酮、三唑醇-a、三唑醇-b殘留量的GC-MS檢測(cè)[J].光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（4）：1990-1993.

[13] 王 軍，萬(wàn) 宇，陳 楓，等.三唑醇在京皖兩地小麥和土壤中殘留動(dòng)態(tài)研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2007，28（8）：14-17.

[14] 王 軍，邊俠玲，萬(wàn) 宇，等.麥田環(huán)境中三唑醇?xì)埩粜袨榧捌浒踩栽u(píng)價(jià)[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，36（4）：666-669.

[15] WANG C，WU Q H，WU C X，et al. Application of dispersion-solidification liquid-liquid microextraction for the determination of triazole fungicides in environmental water samples by high-performance liquid chromatography[J].Journal of Hazardous Materials，2011，185：71-76.

[16] SAMPEDRO M C，MART？魱N O，L？魷PEZ DE ARMENTIA C， et al. Solid-phase microextraction for the determination of systemic and non-volatile pesticides in river water using gas chromatography with nitrogen-phosphorous and electron-capture detection[J].Journal of Chromatography A，2000，893：347-358.

[17] PLAZA BOLA■OS P，ROMERO-GONZ？魣LEZ R，GARRIDO FRENICH A，et al. Application of hollow fibre liquid phase microextraction for the multiresidue determination of pesticides in alcoholic beverages by ultra-high pressure liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2008，1208：16-24.

[18] NOZAL M J，BERNAL J L，JIM？魪NEZ J J，et al. Determination of azolic fungicides in wine by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionization-mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2005，1076：90-96.

[19] MILL？魣N S，SAMPEDRO M，Cunceta N，et al. Coupling solid-phase microextraction and high-performance liquid chromatography for direct and sensitive determination of halogenated fungicides in wine[J].Journal of Chromatography A，2003，995：135-142.