俞鵬飛，杜義安，楊立濤，戴丐國，黃 靈

浙江省腫瘤醫(yī)院腹部外科，浙江 杭州 310022

胃癌組織中microRNA-210的表達與臨床病理因素及預后關(guān)系的研究

俞鵬飛，杜義安，楊立濤，戴丐國，黃 靈

浙江省腫瘤醫(yī)院腹部外科，浙江 杭州 310022

背景與目的：miR-210與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其作用機制及臨床意義仍不明確。該研究旨在探討miR-210在胃癌組織中的表達情況及其臨床意義。方法：采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)檢測78例胃癌組織及相應的癌旁組織中miR-210的表達情況，分析其與臨床病理因素及預后的關(guān)系。結(jié)果：RTFQ-PCR檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-210在胃癌組織中的表達高于癌旁組織，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。miR-210的表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，而與患者年齡、性別、腫瘤的分化程度及浸潤深度等無關(guān)。miR-210低表達患者5年生存率為48.2%，miR-210高表達患者5年生存率為30.4%，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.216，P=0.040)。結(jié)論：miR-210在胃癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織，可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及預后有關(guān)。miR-210有望成為胃癌新的診斷標志物及治療靶點。

胃癌；microRNA-210；轉(zhuǎn)移；預后

胃癌是我國最常見的腫瘤之一，死亡率在全部惡性腫瘤中排第三位［1］，侵襲和轉(zhuǎn)移是導致胃癌預后不良的主要原因［2］。MicroRNA (miRNA，miR)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種有重要功能的非編碼RNA，miR通過與目標mRNA的3’非編碼區(qū)相互作用廣泛參與基因的表達調(diào)控，在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用［3］。miR-210是一種受缺氧誘導因子-1(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1)調(diào)控的miR［4］，既往研究發(fā)現(xiàn)miR-210在肝癌等多種腫瘤中表達上調(diào)［5-7］，發(fā)揮癌基因的作用。但到目前為止，miR-210與胃癌臨床病理因素及與預后關(guān)系仍不明確。本文旨在檢測胃癌組織中miR-210的表達水平，研究其與胃癌的臨床病理特征及預后的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

收集2009年1月—2010年12月在浙江省腫瘤醫(yī)院腹部外科接受治療的胃癌患者組織標本共78例。入院后行標準的胃癌根治手術(shù)，在腫瘤標本離體30 min內(nèi)，從切除的胃癌組織中留取腫瘤標本，同時在距腫瘤切緣大于2 cm處留取非腫瘤組織作為對照。所有患者手術(shù)前均未接受放化療。本研究所收集的組織標本均在浙江省腫瘤醫(yī)院生物樣本標本庫登記，經(jīng)浙江省腫瘤醫(yī)院倫理委員會同意?；颊叩呐R床資料見表1。

1.2 方法

1.2.1 總RNA的提取

采用TRIzol試劑(美國Invitrogen公司)提取組織RNA，將最終獲得的RNA溶于無RNase水中，于-80 ℃保存。采用紫外分光光度計檢測其純度，用1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定樣品的完整性。

1.2.2 RTFQ-PCR檢測miR-210的含量

逆轉(zhuǎn)錄反應依照NCodeTMVILOTMmiRNA cDNA合成試劑盒(購自美國Invitrogen公司)合成cDNA，進行實時熒光定量聚合酶鏈反應(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)檢測。以 U6 作為內(nèi)參基因，U6正義鏈為5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，U6 反義鏈為5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3。miR-210正義鏈為5’-GTGCAGGGTCCGAGG T-3’，miR-210反義鏈為5’-TATCTGTGCGTG TGACAGCGGCT-3’。結(jié)果采用ABI 7900統(tǒng)計軟件進行分析， 實驗重復3次。miR-210的相對表達水平采用 2-△CT法，取U6作為內(nèi)參，以miR-210/U6基因的比值作為miR-210的表達含量。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對資料進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗，并用Kaplan-Meier法及l(fā)og-rank法進行生存分析和生存率比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 miR-210在胃癌及癌旁非腫瘤組織中的表達情況

胃癌組織中miR-210的相對表達量為4.42±3.56，癌旁非腫瘤組織中相對表達量為2.98±1.50，兩者相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，圖1)。

圖 1 miR-210在胃癌及癌旁組織中的表達情況Fig. 1 The expression of miR-210 in gastric cancer and adjacent nontumorous tissues

2.2 miR-210的表達與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系

78例患者按照不同的臨床病理因素進行重新分組統(tǒng)計分析，每組胃癌患者的組織標本中的miR-210表達水平見表1。結(jié)果顯示，miR-210在腫瘤大于等于5 cm患者中的表達明顯高于腫瘤小于5 cm的患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，Ⅲ、Ⅳ期的表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，差異有統(tǒng)計學意義；而與患者年齡、性別，分化程度及浸潤深度等無關(guān)(P＞0.05)。

表 1 miR-210的表達與胃癌患者臨床病理指標的相關(guān)性Tab. 1 Correlation of miR-210 expression with clinicopathological parameters in patients with gastric cancer

2.3 miR-210的表達與患者預后的關(guān)系

根據(jù)胃癌患者中miR-210表達水平差異(平均差異大于2倍)將患者分成低表達組(n=21)和高表達(n=57)兩組。結(jié)果顯示，miR-210低表達組3年生存率為66.7%，5年生存率為48.2%，miR-210高表達組3年生存率為57.1%，5年生存率為30.4%，miR-210低表達組3年及5年生存率均高于miR-210高表達組，其中5年生存率的差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.216，P=0.040)。

3 討 論

胃癌是我國常見的消化道惡性腫瘤，就診時多數(shù)已屬進展期，獲得根治性手術(shù)切除的比例較少，且術(shù)后局部復發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高，治療效果差，已成為嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤之一［8］。但到目前為止，胃癌發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)機制仍不明確。近些年的研究表明，miR在惡性腫瘤的發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移中可能起到了重要作用［9］。miR通過與靶基因 3’非翻譯區(qū)結(jié)合，導致RNA誘導的沉默復合體(RNA-induced silencing complex, RISC)降解靶mRNA或阻礙其翻譯，并且參與到包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病過程中［3，10］。miR-210是目前所知受缺氧調(diào)控最明顯的miR，在缺氧狀態(tài)下miR-210的異常表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［4］。既往的研究發(fā)現(xiàn)，miR-210在胰腺癌和肝癌等消化系統(tǒng)腫瘤中表達上調(diào)，且與患者預后相關(guān)［5，11］。miR-210與胃癌的發(fā)生、發(fā)展也有著密切的關(guān)系。Du等［12］的研究表明，miR-210的甲基化與幽門螺旋桿菌的感染有關(guān)，并可能在胃癌的形成中起到重要作用。Rotkrua等［9］的研究發(fā)現(xiàn)彌漫型胃癌小鼠血清中miR-210較對照組明顯升高，并可作為早期監(jiān)測腫瘤的可靠指標。

圖 2 miR-210高表達組和低表達組之間生存時間的比較Fig. 2 Comparison of survival time between miR-210 over-expression and low-expression groups

在本研究中，miR-210在胃癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示胃癌的發(fā)生、發(fā)展可能與miR-210表達上調(diào)有關(guān)。我們進一步分析miR-210的表達與胃癌患者臨床病理特征及預后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)miR-210的表達與患者的年齡、性別、分化程度及浸潤深度等無關(guān)(P＞0.05)，而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)、TNM分期及5年生存率有關(guān)(P＜0.05)。以上研究表明miR-210可能作為一種癌基因參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程，并與其預后密切相關(guān)。因此，在胃癌的治療中，我們是否可以通過抑制miR-210的表達，抑制其癌基因的作用從而達到治療疾病的目的，這也為胃癌的治療提供了新的靶點。當然，在本研究中也存在一些不足，比如樣本量偏小，以及沒有進一步研究miR-210下游通路或靶基因，這些都有待于進一步的改進和完善。

本研究通過檢測miR-210在胃癌組織中的表達情況，初步證實miR-210與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，并可作為判斷預后的可靠指標，有望為胃癌的治療提供新的靶點。

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Expression of microRNA-210 in gastric cancer and its relationship with clinicopathological factors and prognosis

YU Pengfei, DU Yian, YANG Litao, DAI Gaiguo, HUANG Ling (Department of Abdominal Surgery, Zhejiang Cancer Hospital, Hangzhou 310022, Zhejiang Province, China) Correspondence to: DU Yian E-mail: ypfzmu@163.com

Background and purpose: miR-210 was closely related to the occurrence and development of gastric cancer, but its mechanism and clinical significance were still not clear. The purpose of this study was to explore the expression of miR-210 in gastric cancer tissues and its clinical significance. Methods: The expression of miR-210 was detected in gastric cancer tissues and the corresponding adjacent tissues. The relationship between the expression of miR-210 and clinical pathological factors and prognosis was analyzed. Results: Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (RTFQ-PCR) showed that the expression of miR-210 in gastric cancer was higher than that in adjacent tissues, and there was a significant difference between the two groups (P＜0.05). The expression of miR-210 was closely related to tumor size, lymph node metastasis and TNM stage, but was not related to age, gender, tumor differentiation and depth of invasion. The 5-year survival rate of patients with low miR-210 expression was 48.2%, whereas the 5-year survival rate of patients with high miR-210 expression was 30.4% (χ2=4.216, P=0.040). Conclusion: The expression of miR-210 in gastric cancer was higher than that in adjacent tissues, and maybe related to the development and prognosis of gastric cancer. miR-210 is expected to be a new diagnostic marker and therapeutic target for gastric cancer.

Gastric cancer; MicroRNA-210; Metastasis; Prognosis

10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.03.006

R735.2

A

1007-3639(2017)03-0197-04

2016-08-10

2016-12-02）

浙江省自然科學基金(LY14H160007)。

杜義安 E-mail:ypfzmu@163.com