任秀云 王沖 劉欣 李豪 馬千惠 林牧 石學(xué)雪 高晉華

山西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院牙周科，太原 030001

·牙周病學(xué)專欄·

口腔干預(yù)措施對(duì)牙周炎大鼠頸動(dòng)脈牙齦卟啉單胞菌檢出量及C-反應(yīng)蛋白表達(dá)的影響

任秀云 王沖 劉欣 李豪 馬千惠 林牧 石學(xué)雪 高晉華

山西醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院牙周科，太原 030001

目的 建立慢性牙周炎（CP）合并高脂血癥（HL）的SD大鼠模型并對(duì)其進(jìn)行口腔干預(yù)，檢測(cè)大鼠頸動(dòng)脈局部C-反應(yīng)蛋白（CRP）的表達(dá)情況及牙齦卟啉單胞菌的檢出量，探討牙周炎與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性。方法SD大鼠隨機(jī)分為3組，A組為對(duì)照組，B組為HL組，C組為CP+HL組。C組分為C1組（不治療組），C2組（基礎(chǔ)治療組），C3組（拔牙組）；C2組又分為C2-1組（單純牙周基礎(chǔ)治療組），C2-2組（牙周基礎(chǔ)治療+米諾環(huán)素+抗生素組）；C3組又分為C3-1組（拔除患牙組），C3-2組（拔除患牙+抗生素組）。建模開始15周后隨機(jī)處死B組大鼠1只，取頸動(dòng)脈分叉血管組織進(jìn)行油紅O染色，觀察到泡沫細(xì)胞形成則HL建模成功。建模成功后進(jìn)行2次口腔干預(yù)，干預(yù)結(jié)束后5周處死所有大鼠，取雙側(cè)頸動(dòng)脈血管分叉處組織，分別采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CRP相對(duì)含量，16sRNA半定量法檢測(cè)樣本中的牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量。結(jié)果免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，B、C組CRP陽性表達(dá)明顯高于A組（P＜0.05），與C1組相比，C組各干預(yù)組的CRP表達(dá)均降低（P＜0.05），其中輔助抗生素組較不加抗生素組陽性表達(dá)更低（P＜0.05），C2-2組在各干預(yù)組中陽性表達(dá)最低。牙齦卟啉單胞菌檢測(cè)結(jié)果顯示，C1組檢出量最高，明顯高于A、B組（P＜0.05）；C組各干預(yù)組的檢出量均較C1組低（P＜0.05），C3-2組最低（P＜0.05）。結(jié)論伴HL的牙周炎大鼠不加干預(yù)任其發(fā)展，頸動(dòng)脈血管中CRP的表達(dá)及牙齦卟啉單胞菌檢出量都明顯增加，血管病變逐漸加重。牙周基礎(chǔ)治療和拔牙均可有效降低頸動(dòng)脈血管中CRP的表達(dá)及致病菌含量，其中牙周基礎(chǔ)治療對(duì)CRP表達(dá)的降低作用更明顯，拔牙對(duì)降低牙周致病菌的作用更有效；基礎(chǔ)治療或拔牙時(shí)若輔以局部及全身抗炎藥物，均可以有效提高CRP和牙周致病菌的降低作用。

高脂血癥； 牙周炎； 牙齦卟啉單胞菌； C-反應(yīng)蛋白； 牙周基礎(chǔ)治療

近年來，慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）與心血管疾?。╟ardiovascular disease，CVD）之間的關(guān)系越來越受重視。研究[1]證實(shí)，牙周狀態(tài)不良可能是導(dǎo)致CVD發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一，牙周病患者CVD患病率較健康人高25%～50%。CVD的主要病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化，慢性感染及其相關(guān)的炎癥過程可直接影響動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理學(xué)過程，而慢性牙周炎同樣也是一種由牙周致病菌所引起的慢性感染。牙周袋內(nèi)的菌斑微生物及其毒性代謝產(chǎn)物可隨咀嚼活動(dòng)通過破損的牙周袋壁軟組織進(jìn)入血液循環(huán)播散至全身，引起反復(fù)的無癥狀菌血癥，同時(shí)可定植于血管內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)心血管系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響。本研究通過檢測(cè)CP合并高脂血癥（hyperlipidemia，HL）大鼠模型的頸動(dòng)脈血管組織中牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量，同時(shí)對(duì)血管局部組織C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）的表達(dá)情況進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，以探討口腔各種干預(yù)措施對(duì)合并高脂血癥的牙周炎大鼠模型的影響，為臨床合并高脂血癥的牙周炎患者的治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD大鼠50 只，雄性，6周齡，體重200～250 g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，合格證號(hào)SCXK（京）2009—0004。

1.1.2 主要試劑與實(shí)驗(yàn)儀器 OlympusDP72型顯微照相系統(tǒng)（Olympus公司，日本）。膽固醇（分析純）、豬膽鹽飼料（北京奧博星生物技術(shù)有限公司提供）。維生素D3注射液（上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為111111）。阿莫西林膠囊（哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號(hào)為A111200318）。甲硝唑片（亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為120105）。鹽酸米諾環(huán)素軟膏（日本SunStar INC公司，批號(hào)為1111181）。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定

本實(shí)驗(yàn)使用的牙周致病菌為牙齦卟啉單胞菌ATCC 33277標(biāo)準(zhǔn)菌株[2]，由首都醫(yī)科大學(xué)口腔微生物研究室提供。

1.3 動(dòng)物分組

將50只SD大鼠分為3組，A組為正常對(duì)照組（7只），B組為HL組（8只），C組為CP+HL組（35只）。C組又分為3個(gè)組，C1為自然進(jìn)程組（7只），C2為基礎(chǔ)治療組，C3為拔牙組；C2組再分為單純牙周基礎(chǔ)治療組（C2-1組，7只）和牙周基礎(chǔ)治療+米諾環(huán)素+抗生素組（C2-2組，7只），C3組再分為拔牙組（C3-1組，7只）和拔牙+抗生素組（C3-2組，7只）。

1.4 動(dòng)物建模

1）A組不進(jìn)行任何干預(yù)。2）B組HL模型建立方法[2]如下。一次性腹腔注射維生素D3（每100 g體重注射劑量為0.23 mL），2周內(nèi)逐漸增加高脂飼料（高脂飼料配方：質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%膽固醇+0.2%豬膽鹽+5%豬油+93.3%基礎(chǔ)飼料）直至完全替代普通飼料。15周后隨機(jī)處死B組大鼠1只，取其頸動(dòng)脈分叉處約1 cm血管組織，剝離動(dòng)脈筋膜，冰凍切片，油紅O染色，觀察紅染泡沫細(xì)胞。3）C組為CP+HL組，HL模型建立同上，CP模型建立方法（與HL模型在時(shí)間上同步）如下。腹腔注射5%水合氯醛溶液（每100 g體重注射劑量為0.7 mL）麻醉。以大鼠雙側(cè)上頜第一、二磨牙作為實(shí)驗(yàn)牙。先用3—0絲線纏繞于0.20 mm的正畸結(jié)扎絲上，再將結(jié)扎絲以8 字結(jié)扎的形式結(jié)扎于雙側(cè)上頜第一、二磨牙（M1、M2）的牙頸部，定期涂布牙齦卟啉單胞菌懸液并檢查結(jié)扎情況[3]。術(shù)后15 周（從開始建模起），隨機(jī)檢查C組口腔情況，發(fā)現(xiàn)大鼠有牙齦紅腫、探診出血、深牙周袋、實(shí)驗(yàn)牙松動(dòng)等臨床牙周炎表現(xiàn)即為CP建模成功；同時(shí)安樂死法隨機(jī)處死1只B組大鼠，油紅O染色，若發(fā)現(xiàn)有脂質(zhì)沉積形成，說明HL建模成功，即開始進(jìn)行口腔干預(yù)。

1.5 口腔干預(yù)方法

拆除結(jié)扎絲后，各組給予不同的口腔干預(yù)措施。C1組：任其自然發(fā)展，不加任何口腔干預(yù)治療措施。C2組：C2-1組分別于建模成功后第2、4周進(jìn)行牙周基礎(chǔ)治療（包括牙周刮治和根面平整術(shù)），每次選擇同側(cè)2顆實(shí)驗(yàn)牙；C2-2組，在基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上局部用米諾環(huán)素，每次干預(yù)后同時(shí)用抗生素（200 mg·kg-1阿莫西林+100 mg·kg-1甲硝唑）灌胃，每日1次，療程3 d。C3-1組基礎(chǔ)治療同步進(jìn)行2次拔牙，每次拔除同側(cè)2顆實(shí)驗(yàn)牙；C3-2組在此基礎(chǔ)上每次拔牙后加用抗生素（200 mg·kg-1阿莫西林+100 mg·kg-1甲硝唑）灌胃，每日1次，療程3 d。

1.6 標(biāo)本采集及處理

實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行2次牙周干預(yù)，干預(yù)結(jié)束后5周處死所有大鼠，取雙側(cè)頸動(dòng)脈血管分叉處約1 cm組織進(jìn)行檢測(cè)。左側(cè)血管組織經(jīng)固定包埋后以1.5 μm厚度橫斷切片，進(jìn)行CRP免疫組織化學(xué)染色，觀察染色強(qiáng)度，并使用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（BI-2000），對(duì)所有切片進(jìn)行半定量分析，以頸動(dòng)脈分叉處內(nèi)側(cè)為測(cè)量部位，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色染色為CRP陽性，按照分層抽樣法在每個(gè)部位隨機(jī)選擇5個(gè)陽性區(qū)域，測(cè)定該部位的灰度值，染色程度越深，灰度值越小。右側(cè)血管新鮮組織置于-70 °C保存，放入無菌Eppendorf管中，應(yīng)用德國(guó)Analytik Jena AG公司提供的細(xì)菌DNA提取試劑盒，采用16sRNA法測(cè)定各組大鼠頸總動(dòng)脈血管組織中的牙齦卟啉單胞菌DNA相對(duì)含量，具體方法見本課題組前期研究[2]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理各組數(shù)據(jù)，組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差分析，各組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為雙側(cè)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 頸動(dòng)脈血管組織的CRP表達(dá)

頸動(dòng)脈血管組織CRP表達(dá)的定位結(jié)果見圖1。

圖1 頸動(dòng)脈血管壁CRP的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色 × 400Fig1 CRP expression in carotid artery immunohistochemical staining × 400

A組（正常對(duì)照組），血管壁形態(tài)正常，無明顯增厚，彈性纖維排列整齊，未見CRP陽性表達(dá)（圖1A）。B組（HL組），血管壁明顯增厚，內(nèi)膜下可觀察到脂質(zhì)沉積，內(nèi)中膜可見大量泡沫細(xì)胞（圖1B中箭頭示），CRP陽性表達(dá)，泡沫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈黃褐色著色，平滑肌細(xì)胞變性、萎縮，彈性纖維排列紊亂。C1組（CP+HL自然進(jìn)程組）內(nèi)膜下觀察到多個(gè)明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊病灶、脂質(zhì)核并有鈣鹽沉積（圖1C中黃色箭頭），泡沫細(xì)胞（圖1C中紅色箭頭）散在，平滑肌細(xì)胞萎縮變性，細(xì)胞數(shù)目減少，并向內(nèi)膜遷移，導(dǎo)致內(nèi)膜增厚，CRP呈強(qiáng)陽性表達(dá)且著色呈深褐色，彈性纖維萎縮甚至斷裂。C2-1組（CP+HL基礎(chǔ)治療組），可見血管壁增厚，內(nèi)膜下散在脂質(zhì)沉積，泡沫細(xì)胞較多，CRP陽性表達(dá)，呈黃褐色著色，平滑肌細(xì)胞部分變性，彈性纖維排列較為整齊（圖1D）。C2-2組（CP+HL基礎(chǔ)治療+米諾環(huán)素+抗生素組），可見稍增厚的內(nèi)中膜，有陽性表達(dá)區(qū)，呈棕黃色至黃褐色，泡沫細(xì)胞較少，平滑肌細(xì)胞少量變性，彈性纖維排列較為整齊（圖1E）。C3-1組（CP+HL拔牙組），血管壁厚薄不均，平滑肌細(xì)胞層觀察到多個(gè)脂質(zhì)核，可見鈣化壞死組織、纖維帽，細(xì)胞數(shù)目顯著減少，CRP強(qiáng)陽性表達(dá)，泡沫細(xì)胞較少（圖1F）。C3-2組（CP+HL拔牙+抗生素組），可見血管壁增厚，大量泡沫細(xì)胞，CRP陽性表達(dá)呈黃褐色，平滑肌細(xì)胞變性萎縮，彈性纖維排列紊亂（圖1G）。

將CRP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，結(jié)果見表1。陽性染色強(qiáng)度與灰度值呈反比，即陽性染色越強(qiáng)，則灰度值越小，分析結(jié)果可見：不同組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=102.190，P=0.000），其中B、C組灰度值均小于A組（P＜0.05），C1組灰度值最低；與C1組相比，C組各干預(yù)組（C2-1、C2-2、C3-1、C3-2）中除C3-1組外，其灰度值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中C2-2組灰度值最高；C3-2組灰度值大于C3-1組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 頸動(dòng)脈血管組織牙齦卟啉單胞菌DNA相對(duì)含量

頸動(dòng)脈血管組織牙齦卟啉單胞菌DNA的相對(duì)含量見圖2和表2。

表1 CRP在各組頸動(dòng)脈血管壁陽性表達(dá)的灰度值Tab1 Gray values of CRP positive expression in carotid artery in different groups n=7, x±s

圖2 頸動(dòng)脈部分樣本的聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果Fig2 Electrophoresis results of polymerase chain reaction amplification product of carotid artery samples

表2 牙齦卟啉單胞菌在各組頸動(dòng)脈血管壁的相對(duì)含量Tab2 The relative expression of Porphyromonas gingivalis in carotid artery in different groups n=7, x±s

由圖2可見，所有大鼠的頸總動(dòng)脈分叉區(qū)組織標(biāo)本均擴(kuò)增出預(yù)期條帶，牙齦卟啉單胞菌檢出率為100%。每份標(biāo)本使用通用引物和細(xì)菌特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果表現(xiàn)不完全相同。經(jīng)16sRNA半定量檢測(cè)，牙齦卟啉單胞菌在各組中的相對(duì)含量見表2。由表2可見，C1組最高，達(dá)到1.22±0.07，明顯高于A、B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與C1組相比，C組各干預(yù)組（C2-1、C2-2、C3-1、C3-2）的相對(duì)含量均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在基礎(chǔ)治療組，C2-2組牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量較C2-1組更低（P＜0.05）；所有干預(yù)組（C2-1、C2-2、C3-1、C3-2）中，C3-2組牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量最低（P＜0.05），提示拔牙+抗生素的應(yīng)用在降低牙齦卟啉單胞菌含量方面更有效。

3 討論

目前已有大量流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持牙周炎可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化疾病進(jìn)程這一觀點(diǎn)，CRP作為聯(lián)系這兩大炎癥性疾病的重要炎癥標(biāo)志物，其作用已經(jīng)得到了充分的驗(yàn)證[4-5]。

本課題組在前期研究[2-3]中發(fā)現(xiàn)，牙周干預(yù)治療不同時(shí)期血清CRP的含量呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，牙周基礎(chǔ)治療、單純藥物治療以及拔除患牙等口腔干預(yù)措施在短期內(nèi)都可能增加動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)，而長(zhǎng)期效果則顯示可能會(huì)降低該風(fēng)險(xiǎn)。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，取大鼠處死后雙側(cè)頸動(dòng)脈血管組織，一側(cè)血管組織采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CRP的相對(duì)含量，另一側(cè)組織采用16sRNA的方法檢測(cè)牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：自然進(jìn)程組血管病變最嚴(yán)重，出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、纖維帽及鈣鹽沉積，血管CRP陽性表達(dá)及細(xì)菌相對(duì)含量最高，提示伴有HL的牙周炎大鼠如果不予治療任其病變發(fā)展，可能會(huì)加重其血管病變，并且CRP和牙齦卟啉單胞菌可能均參與了該病變的過程。

DeStefano等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，牙周治療能夠降低包括血清CRP在內(nèi)的一些炎癥因子的濃度。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行口腔干預(yù)后，各干預(yù)組與自然進(jìn)程組相比，血管壁CRP陽性表達(dá)弱，血管病變程度減輕，這與De-Stefano等[6]的研究結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)中基礎(chǔ)治療輔助局部米諾環(huán)素和服用甲硝唑組的血管最接近正常對(duì)照組，各干預(yù)組的頸動(dòng)脈血管局部CRP表達(dá)及牙齦卟啉單胞菌檢出量均降低，其中基礎(chǔ)治療輔助局部米諾環(huán)素和服用甲硝唑組CRP的陽性表達(dá)最低。這提示在牙周基礎(chǔ)治療的基礎(chǔ)上加用局部及全身藥物可能會(huì)有助于頸動(dòng)脈血管的改善。這與本課題組前期血清CRP變化的研究結(jié)果一致[2]，均提示對(duì)合并HL的牙周炎患者進(jìn)行治療時(shí)，輔以局部及全身藥物治療，可能會(huì)降低有創(chuàng)治療引起的全身炎癥反應(yīng)加劇而可能造成CVD發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。拔牙組結(jié)果顯示，單純拔牙對(duì)頸動(dòng)脈血管造成的風(fēng)險(xiǎn)可能不亞于自然進(jìn)程組，拔牙后輔以甲硝唑則可顯著降低該風(fēng)險(xiǎn)。這提示臨床對(duì)于合并HL的牙周炎患者，即使是拔除不能保留的牙周炎患牙，也應(yīng)該輔以全身藥物以降低風(fēng)險(xiǎn)。

各型牙周致病菌中，牙齦卟啉單胞菌是證據(jù)充分的牙周致病菌，各類研究報(bào)告的檢出率各有不同，84%～100%不等[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與自然進(jìn)程組和牙周基礎(chǔ)治療組相比，拔牙組的頸動(dòng)脈血管組織牙齦卟啉單胞菌的相對(duì)含量顯著下降（P＜0.05），拔牙時(shí)輔以抗生素組的細(xì)菌相對(duì)含量最低（P＜0.01），這提示在降低血管內(nèi)牙齦卟啉單胞菌含量方面，拔牙措施較常規(guī)牙周基礎(chǔ)治療措施更徹底。由此推測(cè)，臨床上及時(shí)拔除無法保留的松動(dòng)患牙，可能更有利于降低牙周組織及頸動(dòng)脈血管中牙周病原菌的數(shù)量。Takamatsu等[9]曾采用DNA探針法檢測(cè)牙周基礎(chǔ)治療對(duì)牙周致病菌檢出率的影響，發(fā)現(xiàn)牙周基礎(chǔ)治療可使牙齦卟啉單胞菌減少，與本研究結(jié)果一致。值得注意的是，本實(shí)驗(yàn)在所有的頸動(dòng)脈標(biāo)本中均檢測(cè)到牙齦卟啉單胞菌，檢出率為100%。Ford等[10]采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，牙齦卟啉單胞菌的檢出率為100%；另外的研究[11-12]則較低，分別為26%和21.6%。本研究中，對(duì)照組也檢測(cè)出牙齦卟啉單胞菌，提示該細(xì)菌可能是口腔常駐菌。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，雖然對(duì)照組與HL組均有牙齦卟啉單胞菌的檢出，但組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二者與HL+CP組間的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。由此推測(cè)：牙齦卟啉單胞菌作為口腔常駐菌，在健康牙周組織內(nèi)即存在，且易通過咀嚼等口腔運(yùn)動(dòng)隨血液循環(huán)播散定植于血管分叉處，但此時(shí)菌量很少，并不會(huì)導(dǎo)致血管的炎癥改變。本課題組將進(jìn)一步對(duì)牙周組織內(nèi)牙齦卟啉單胞菌進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證此結(jié)論。

綜上所述，伴有HL的牙周炎大鼠如果不干預(yù)任其病變發(fā)展，頸動(dòng)脈血管的動(dòng)脈粥樣硬化病變會(huì)明顯加重，并且CRP和牙齦卟啉單胞菌可能均參與了病變過程。進(jìn)行各種口腔干預(yù)措施時(shí)，拔牙在降低血管內(nèi)口腔致病菌含量方面有優(yōu)勢(shì)，但是牙周基礎(chǔ)治療對(duì)改善血管局部炎癥反應(yīng)較拔牙更有效；但二者均屬于侵入性治療方法，其造成的炎癥反應(yīng)有加劇動(dòng)脈粥樣硬化病變的風(fēng)險(xiǎn)，輔助局部和全身抗生素應(yīng)用則可以有效降低風(fēng)險(xiǎn)。臨床上對(duì)于此類患者的治療應(yīng)綜合考慮各方面因素，選出最佳方案。

[1] Bartova J, Sommerova P, Lyuya-Mi Y, et al. Periodontitis as a risk factor of atherosclerosis[J]. J Immunol Res, 2014, 2014:636893.

[2] 林牧, 任秀云, 常樂, 等. 大鼠慢性牙周炎模型中牙齦卟啉單胞菌的檢測(cè)[J]. 國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 40(5):572-576.

Lin M, Ren XY, Chang L, et al. Detection ofPorphyromonas gingivalisin SD rats with chronic periodontitis[J]. Int J Stomatol, 2013, 40(5):572-576.

[3] 任秀云, 常樂, 岳姿潔, 等. 輔以抗生素的牙周機(jī)械治療對(duì)伴動(dòng)脈粥樣硬化牙周炎大鼠的頸動(dòng)脈及血清超敏C-反應(yīng)蛋白的影響[J]. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 31(5):504-508.

Ren XY, Chang L, Yue ZJ, et al. Effects of periodontal mechanical therapy with local and systemic drugs on carotid artery and serum high-sensitivity C-reactive protein in rats with chronic periodontitis associated with atherosclerosis [J]. West Chin J Stomatol, 2013, 31(5):504-508.

[4] Slade GD, Offenbacher S, Beck JD, et al. Acute-phase inflammatory response to periodontal disease in the US population[J]. J Dent Res, 2000, 79(1):49-57.

[5] Devaraj S, Yun JM, Duncan-Staley C, et al. C-reactive protein induces M-CSF release and macrophage proliferation [J]. J Leukoc Biol, 2009, 85(2):262-267.

[6] DeStefano F, Anda RF, Kahn HS, et al. Dental disease and risk of coronary heart disease and mortality[J]. BMJ, 1993, 306(6879):688-691.

[7] 王者玲, 崗本公彰, 楊圣輝, 等. PCR直接檢測(cè)齦下菌斑主要可疑牙周致病菌[J]. 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志, 2003, 15(2): 115-116.

Wang ZL, Masaaki O, Yang SH, et al. Detection of main putative periodontopathic bacteria in subgingival plaque by polymerase chain reaction[J]. Chin J Microecol, 2003, 15(2):115-116.

[8] 馮向輝, 孟煥新. 牙周炎可疑致病微生物的檢測(cè)及抗Aa抗體水平的分析[D]. 北京: 北京大學(xué), 2008.

Feng XH, Meng HX. Detecting the suspicious pathogenic microorganism of periodontitis and analyzing the level of Aa antibody[D]. Beijing: Peking University, 2008.

[9] Takamatsu N, Yano K, He T, et al. Effect of initial periodontal therapy on the frequency of detectingBacteroides forsythus,Porphyromonas gingivalis, andActinobacillus actinomycetemcomitans[J]. J Periodontol, 1999, 70(6):574-580.

[10] Ford PJ, Gemmell E, Hamlet SM, et al. Cross-reactivity of GroEL antibodies with human heat shock protein 60 and quantification of pathogens in atherosclerosis[J]. Oral Microbiol Immunol, 2005, 20(5):296-302.

[11] Haraszthy VI, Zambon JJ, Trevisan M, et al. Identification of periodontal pathogens in atheromatous plaques[J]. J Periodontol, 2000, 71(10):1554-1560.

[12] Ishihara K, Nabuchi A, Ito R, et al. Correlation between detection rates of periodontopathic bacterial DNA in coronary stenotic artery plaque and in dental plaque samples[J]. J Clin Microbiol, 2004, 42(3):1313-1315.

（本文編輯 吳愛華）

Effects of oral interventions on carotid artery in rats with chronic periodontitis for the detection of Porphyromonas gingivalis and the expression of C-reactive protein

Ren Xiuyun, Wang Chong, Liu Xin, Li Hao, Ma Qianhui, Lin Mu, Shi Xuexue, Gao Jinhua. (Dept. of Periodontology, School of Stomatology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

Objective This study aimed to establish a SD rat model of chronic periodontitis (CP) merged with hyperlipidemia (HL), perform periodontal treatment, detect the expression of partial C-reactive protein (CRP) and Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) in the rat carotid artery, and explore the relationship between periodontitis and atherosclerosis.MethodsSD rats were randomly divided into three groups: control group (A), HL group (B), and CP+HL group (C). Group C rats were divided into natural process group (C1), scaling and root planning group (C2), and tooth extraction group (C3). Group C2 rats were randomly divided into C2-1 (scaling and root planning group) and C2-2 (scaling and root planning+minocyline+systemic antibiotics group). Group C3 rats were randomly divided into C3-1 (tooth extraction group) and C3-2 (tooth extraction+systemic antibiotic group). One rat from group B was randomly selected and sacrificed after 15 weeks. Subsequently, the carotid vascular tissue was collected for oil red O staining. Modeling was successful when foam cell formation was observed. Periodontal treatments were conducted twice, and euthanasiawas performed after the experiment. Moreover, double-carotid artery bifurcation was carried out to detect the expression of CRP and P. gingivalis. Immunohistochemical and 16sRNA semiquantitative methods were used to detect the CRP expression and the relative contents of P. gingivalis, respectively.ResultsImmunohistochemical results showed that the CRP-positive expression in groups B and C was significantly higher than that in group A (P＜0.05). The CRP-positive expression in other group C rats were significantly lower than that in group C1 (P＜0.05). The CRP-positive expression in group C2-2 was the lowest among the groups (P＜0.05). The relative quantity of P. gingivalis in group C1 was the highest and significantly higher than that in groups A and B (P＜0.05). The relative quantities of P. gingivalis in groups C2-1, C2-2, C3-1, and C3-2 were significantly lower than that in group C1 (P＜0.05), and the quantity in group C3-2 was the lowest (P＜0.05).ConclusionRats with CP associated with HL will increase the CRP expression and oral bacteria quantity on carotid artery, and lesions will gradually aggravate. Interventions, such as periodontal basic treatment and tooth extraction, could improve carotid artery lesions. The basic treatment with local and systemic anti-inflammatory drugs exerts the most satisfactory effect on local CRP expression. Tooth extraction with antibiotics is an effective method on reducing oral bacteria in carotid artery. Periodontal basic treatment associated with local and systemic antiflammatory drugs can obviously improve the effect.

hyperlipidemia; periodontitis; Porphyromonas gingivalis; C-reactive protein; periodontal basic treatment

R 781.4

A

10.7518/hxkq.2017.02.016

Supported by: The National Natural Science Foundation of China (81271144, 31050002); The Natural Science Foundation of Shanxi Province (2010011050-1). Correspondence: Ren Xiuyun, E-mail: rxy611@163.com.

2016-09-30；

2016-12-02

國(guó)家自然科學(xué)基金（81271144，31050002）；山西省自然科學(xué)基金（2010011050-1）

任秀云，副教授，博士，E-mail：rxy611@163.com

任秀云，副教授，博士，E-mail：rxy611@163.com