馬凱
摘 要:采用超聲法和索氏提取法對(duì)蘆筍老莖中蘆丁進(jìn)行提取,高效液相色譜法對(duì)蘆丁的含量進(jìn)行測(cè)定。索氏提取法提取的蘆丁含量高于超聲法。高效液相色譜法方便、簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確,可用于蘆筍老莖中蘆丁含量測(cè)定。
關(guān)鍵詞:蘆筍;蘆?。凰魇?;超聲;高效液相
蘆丁,屬于黃酮苷類(lèi)化合物,又稱蕓香苷、槲皮苷,為淡黃色粉末或極細(xì)的淡黃色針狀結(jié)晶,無(wú)臭無(wú)味。蘆丁廣泛用于醫(yī)藥、保健食品中,具有抗菌消炎、抗輻射、調(diào)節(jié)毛細(xì)血管壁的滲透和對(duì)紫外線具有極強(qiáng)的吸收以及很好的抗氧化等作用。蘆筍,學(xué)名石刁柏,具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值,是一種食藥兼用的名貴蔬菜。蘆筍過(guò)了收獲季節(jié)后有大量的老莖無(wú)法利用,其中含有豐富的黃酮類(lèi)化合物。本課題研究用超聲和索氏提取的方法,從蘆筍老莖中提取蘆丁,可為蘆丁的提取提供新的資源和工藝,擴(kuò)大蘆筍老莖的綜合利用,變廢為寶。
1儀器與試劑
1.1儀器。美國(guó)Waters公司W(wǎng)aters2695高效液相色譜儀;Waters2996二極管陣列檢測(cè)器;WatersXTerra?MSC18色譜柱(2.1mm×150mm3.5?m);電子天平(上海恒平);WK-1200A高速藥物粉碎機(jī)(青州精誠(chéng));0.45?m有機(jī)相濾膜(上海興亞);
1.2材料和試劑。蘆筍(采集于秋季農(nóng)田);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所);甲醇為色譜醇(美國(guó)天地);水為純凈水(娃哈哈純凈水經(jīng)20℃超聲處理);石油醚(天津永大);無(wú)水乙醇(天津廣成);石油醚、無(wú)水乙醇均為分析純。
2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1材料處理。蘆筍老莖洗凈,自然晾干后,置于干燥箱中60℃恒溫干燥24h,稱其總重量,再放入烘箱中繼續(xù)干燥,反復(fù)稱量至恒重,粉碎成粉末后保存?zhèn)溆谩?/p>
2.2蘆筍老莖中蘆丁的提取
2.2.1去除色素。精密稱取粉末10g,置索氏提取器中,加石油醚250ml,水浴回流提取5h,棄去石油醚液,將樣品中殘存的石油醚全部揮去。
2.2.2蘆丁的提取。將樣品分成兩等份,每一份相當(dāng)于原料5g。超聲提取法提取:將另一份樣品置具塞錐形瓶中,加無(wú)水乙醇30ml,超聲提取2h,濾過(guò),收集濾液,濾渣再加無(wú)水乙醇30ml,重復(fù)提取3次,合并濾液置500ml圓底燒瓶中,減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。得樣品1。索氏提取法提?。簩⑵渲幸环輼悠芳訜o(wú)水乙醇250ml,再置索氏提取器中提取5h,放涼,濾過(guò),置500ml圓底燒瓶中,減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。得樣品2。
2.3樣品含量測(cè)定
2.3.1對(duì)照品溶液的配制。精密稱取蘆丁對(duì)照品0.2mg,置10ml容量瓶中用甲醇定容至刻度,搖勻得蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml。
2.3.2樣品溶液的配制。向樣品1和樣品2圓底燒瓶中加入甲醇使樣品溶解在甲醇中,濾過(guò),微孔濾膜過(guò)濾,置50ml容量瓶中定容至刻度,搖勻得樣品溶液0.1g/ml。
2.3.3色譜條件。采用XTerra?MSC18色譜柱(2.1mm×150mm×3.5?m);流速:0.20ml/min;柱溫:室溫;波長(zhǎng)掃描范圍:260nm~280nm。Waters2996二極管陣列檢測(cè)器;工作站:MassLynxV4.0系統(tǒng);流動(dòng)相:甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脫。
2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定。將蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml配置成0.00125mg/ml,0.0025mg/l,0.005mg/ml,0.02mg/ml的溶液各2ml,過(guò)0.45m機(jī)相濾膜后置于4個(gè)進(jìn)樣瓶中,高效液相進(jìn)樣量為10 1,在紫外波長(zhǎng)為260nm~280nm范圍內(nèi)掃描檢測(cè)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液,測(cè)定峰面積分別為161987,330961,668672,2092391,4227087得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在0.0125~0.4g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,線性回歸方程為Y=10339265.8x+74569.3,R=0.9995。
2.3.5最低檢出限。將蘆丁對(duì)照品溶液0.02mg/ml不斷稀釋?zhuān)玫綑z測(cè)蘆丁的最低濃度。S/N>3,最低檢出限為0.05mg。
2.3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取樣品1溶液,分別于2h、12h、24h、36h、48h進(jìn)樣10 1,測(cè)定蘆丁峰面積以考察樣品溶液的穩(wěn)定性,結(jié)果顯示蘆丁在10h內(nèi)穩(wěn)定,RSD=0.58%。
2.3.7加樣回收試驗(yàn)。精密量取樣品1和樣品2溶液各3份,分別加入蘆丁對(duì)照品溶液0.1mg,測(cè)得峰面積得出回收率為樣品1為95.28%,樣品2為98.54%。
2.3.8樣品含量測(cè)定。取配制好的樣品溶液2ml于進(jìn)樣瓶中,按色譜條件進(jìn)樣10 1,連續(xù)進(jìn)樣3次,得到峰面積算出含量樣品1為1.126mg/g,樣品2為1.726mg/g。
3討論
3.1色譜條件的選擇。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道蘆丁在200~600nm的范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,在213nm、258nm、360nm處出現(xiàn)3個(gè)吸收峰,取標(biāo)準(zhǔn)品溶液于260~280nm區(qū)間內(nèi)掃描,得出的主峰高,分離效果好。
梯度洗脫法可以改變流動(dòng)相中各溶劑組成的比例,使樣品種的所有組分可在最短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)最佳分離。很多文獻(xiàn)報(bào)道是采用一種色譜體系,對(duì)于組分復(fù)雜的樣品,很難得到理想的分離結(jié)果。要么分離時(shí)間太長(zhǎng),要么分離度太差。而在液相中采用梯度洗脫,可以縮短時(shí)間,提高柱效。
3.2超聲法和索氏提取法的比較。超聲波提取法是近年來(lái)藥典收載應(yīng)用較多的一種樣品處理方法,具有提取效率高,處理時(shí)間短,操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。索氏提取法是利用溶劑回流及虹吸原理,使固體物質(zhì)連續(xù)不斷地被純?nèi)軇┹腿?,既?jié)約溶利萃取效率又高。但最大的不足就是耗時(shí)太長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)中采用索氏提取法提取的蘆丁含量略高于超聲法,由此可見(jiàn)索氏提取法在本實(shí)驗(yàn)中提取的蘆丁含量高,方法較佳,且節(jié)省試劑。
4結(jié)論
使用高效液相色譜法測(cè)定蘆筍老莖中蘆丁含量,該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,結(jié)果可靠,超聲法提取的蘆丁含量為1.126mg/g,索氏提取法提取的蘆丁含量為1.726mg/g。
蘆丁是我國(guó)一種豐富的天然藥物資源,我們?cè)谂R床應(yīng)用方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)積累,從而為蘆丁的開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。面對(duì)目前蘆丁在醫(yī)藥臨床方面的巨大作用但原料不足的情況,我們從天然藥物中提取蘆丁,擴(kuò)大蘆丁的原料來(lái)源,更好的促進(jìn)蘆丁在心腦血管等方面的作用,改善人類(lèi)的身體健康狀況,具有巨大的現(xiàn)實(shí)意義。
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作者簡(jiǎn)介:
馬凱(1987—),男,本科,畢業(yè)院校泰山醫(yī)學(xué)院,研究方向:分析檢測(cè)工作。