食品中多種獸藥殘留的同時篩查檢測

朱萬燕++徐文遠++楊曉玉

摘 要：建立了食品中7類獸藥殘留的定性篩查檢測方法。樣品采用QuEChERS方法進行前處理（乙腈提取，Al2O3吸附劑凈化），采用超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜儀（UPLC-Q-TOF MS）檢測，以化合物的色譜保留時間和精確質(zhì)量數(shù)定性，在Target MS/MS采集模式下，通過碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)進一步確證化合物。該方法簡便、快速、靈敏，適用于食品中多種獸藥殘留的同時定性篩查。

關(guān)鍵詞：食品 多類獸藥殘留 數(shù)據(jù)譜庫 篩查 確證 QuEChERS UPLC-Q-TOF MS

中圖分類號：S859.84 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2017）02（a）-0051-02

近年來，獸藥的過量和違禁使用不可避免地引起動物源性食品中獸藥殘留，危害消費者身體健康，這使得人們對于食品中獸藥殘留這一問題越來越關(guān)注?，F(xiàn)在的檢測標準主要是分種類檢測[1-3]，方法費時、費力，現(xiàn)在分析人員開始嘗試多類獸藥同時檢測分析[4，5]。該文擬建立目前常用的7類獸藥殘留（磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、硝基咪唑類、大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類、三苯甲烷類）的同時檢測方法。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 6530B Accurate-mass Q-TOF LC/MS；分離柱：ZORBAX SB-C18；凈化粉：C18、PSA、NH2、中性Al2O3、PAX、PCX、PEP、GCB；純水機：美國Millipore。

1.2 標準溶液配制

分別準確稱取適量的標準品于容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到1 mg/mL的標準儲備液，待用。上機標準溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品前處理

稱取上述制備好的樣品4.0 g，于50 mL離心管中，加入提取液（12 mL乙腈），超聲波振蕩提取2 min，9 000 r/min均質(zhì)提取1 min，9 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中；另取一50 mL離心管加入15 mL乙腈，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻璃棒搗碎離心管中的沉淀，超聲波振蕩提取2 min，9 000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管中，待凈化。在上清液中加入500 mg中性氧化鋁粉，充分振蕩，以盡可能多得除去提取液中的干擾性雜質(zhì)，最后取上清液濃縮、定容，待上機測定。

1.4 儀器工作條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，3.5 μm，100×2.1 mm；流動相：有機相為乙腈，水相為0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫；流速：0.3 mL/min；進樣量：20 μL。

Ion Source：ESI+；Capillary：4 000 V；Nebulizer：35 psi；Drying Gas Temp：325 ℃；Drying Gas：10 L/min；Sheath Gas Temp：325 ℃；Sheath Gas：11 L/min。

2 結(jié)果與討論

2.1 定性測定

在上述色譜、質(zhì)譜條件下測定待測樣液，LC-Q-TOF-MS在MS模式下進行一級全掃描，獲得MS全掃描數(shù)據(jù)。通過樣品中化合物的實測分子量、保留時間與TOF數(shù)據(jù)庫中的精確質(zhì)量數(shù)及保留時間匹配，在質(zhì)量精確度絕對值小于10 ppm，保留時間偏差在0.3 min之內(nèi)，且得分≥70時，可初步確定為疑似獸藥，待由Q-TOF進一步確證。

對于TOF數(shù)據(jù)庫偵測疑似獸藥，需要進行Q-TOF數(shù)據(jù)庫的核查確證。在Q-TOF方法條件下，對實際樣品進行再次測定，獲得樣品碎片離子全掃描信息，經(jīng)過與Q-TOF數(shù)據(jù)譜庫中的碎片離子信息檢索比對，得到二級檢索得分和對應(yīng)的化合物，對于檢索得分≥70的化合物被確證為目標獸藥。對于檢索得分<70的化合物通過背景扣除來降低雜質(zhì)離子對檢索的影響；對于仍不能達到得分要求的化合物需對比其主要碎片離子，若有兩個或兩個以上的主要碎片離子匹配，則可確證為目標獸藥。

2.2 提取方式的選擇

實驗比較了振蕩、超聲和均質(zhì)三種提取方式對提取效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，均質(zhì)提取取得了最好結(jié)果，所有待測化合物的平均回收率為85.6%，振蕩和超聲都不利于動物組織樣品的充分分散，其回收率結(jié)果均低于均質(zhì)提取。

2.3 凈化時間和凈化方式的選擇

對樣品凈化所需的振蕩時間進行了優(yōu)化，比較5 min、10 min、15 min、20 min、25 min、30 min的凈化效果及目標化合物的平均回收率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，幾個不同的振蕩時間對提取液的凈化效果及目標化合物的平均回收率無明顯影響，從縮短分析時間和提高分析效率方面考慮，初步確定振蕩時間為5 min。

比較振蕩和渦旋兩種凈化方式的凈化效果，具體方法如下：比較渦旋1 min、2 min、3 min、4 min與振蕩5 min的凈化效果及目標化合物的回收率。結(jié)果表明，除渦旋1 min的樣品凈化效果差，回收率較低外，其余凈化方式的凈化效果與目標化合物的回收率無明顯差別?？紤]到批量樣品量的測定，樣品單獨進行渦旋凈化反而增加總的分析時間，將所有樣品提取液同時進行振蕩凈化可以節(jié)約時間。因此，最終確定凈化方式為振蕩凈化5 min。

2.4 方法的線性和檢出限

采用不含待測物質(zhì)的空白基質(zhì)溶液稀釋標準儲備液，根據(jù)化合物的性質(zhì)配制成不同濃度的系列標準溶液，上LC-Q-TOF-MS儀測定，以標準溶液的峰面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線。當(dāng)信噪比等于3（S/N=3）時的標準溶液濃度，即為化合物的檢出限（LOD）。實驗表明，待測物質(zhì)的線性范圍為0.25～2 000 μg/kg，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，LOQ為0.5～100 μg/kg。

2.5 方法的回收率和精密度

采用空白樣品做基質(zhì)，添加高、中、低3個濃度水平進行回收率和精密度實驗，每個濃度水平平行做6次，計算所測化合物的回收率和相對標準偏差（RSD）。實驗表明，7類化合物的回收率均在66.2%～104.3%之間，相對標準偏差為4.2%～15.1%，說明方法的準確度好。

3 結(jié)語

該文建立的用于獸藥殘留分析的QuEChERS-超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜檢測技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的檢測技術(shù)，具有經(jīng)濟、環(huán)保、簡單、快速等優(yōu)點，適用于食品中多種獸藥殘留的同時檢測分析，可以滿足批量樣品快速分析的需求。

參考文獻

[1] Chonan T，F(xiàn)yjimoto T，Inoue M，et al.Tour Fujimoto-Research Gate[J].Shokuhin Eiseigaku Zasshi，2008，49（3）：244-248.

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