趙書(shū)凡++朱科學(xué)++朱紅英++賀書(shū)珍++譚樂(lè)和

摘 要 為了研究苦丁茶冬青多糖醇沉規(guī)律及產(chǎn)物理化性質(zhì)。通過(guò)熱水浸提和不同濃度乙醇分級(jí)沉淀，得到乙醇終濃度為20%、40%、60%和80%的4種苦丁茶冬青多糖組分，即ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4。比色法檢測(cè)各多糖組分總糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)和總酚含量；高效凝膠滲透色譜法進(jìn)行相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定；紫外和紅外光譜掃描考察各組分的光譜性質(zhì)。結(jié)果表明：ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4總糖含量分別為19.21%、34.91%、37.70%和30.21%，糖醛酸含量分別為5.04%、44.90%、24.20%和5.84%；凝膠滲透色譜圖表明：ICP-2和ICP-3為高純度均一組分，分子量為440.440與348.279 ku；4種多糖組分在280 nm處均有吸收峰，說(shuō)明均為糖蛋白質(zhì)化合物。紅外結(jié)果顯示，各組分均為吡喃糖環(huán)構(gòu)型。以上結(jié)果表明，乙醇分級(jí)沉淀的方法可用于分級(jí)純化制備組分均一、純度較高的苦丁茶冬青多糖組分。

關(guān)鍵詞 苦丁茶冬青 ；多糖 ；理化性質(zhì) ；光譜性質(zhì)

中圖分類(lèi)號(hào) TS272 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.04.018

Ethanol Fractionation and Physico-chemical Properties of Soluble

Polysaccharides from Ilex kudingcha C.J. Tseng

ZHAO Shufan1，2） ZHU Kexue2，3） ZHU Hongying2，3） HE Shuzhen2，3） TAN Lehe3）

（1 College of Food Science and Technology of Huazhong Agricultural University，

Wuhan， Hubei 430070；

2 Spice and Beverage Research Institute， CATAS， Wanning， Hainan 571533；

3 Hainan Provincial Engineering Research Center for Tropical Spice and Beverage Crops，

Wanning， Hainan 571533）

Abstract Ilex kudingcha C.J. Tseng was extracted with hot water and then fractionated with ethanol to produce different concentrations of water-soluble polysaccharides， and the physico-chemical properties of these polysaccharides was analyzed. The polysaccharides were fractionated and purified into fractions with concentrations of 20%， 40%， 60% and 80%， and were named ICP-1， ICP-2， ICP-3 and ICP-4， respectively. The polysaccharides were detected by using colometrics in terms of total sugar， protein， alduronic acid and total phenol； their molecular weight （Mw） was determined by using high performance gel permeation chromatography， and their spectroscopic properties by using UV and IR spectra analysis. The polysaccharides fractions ICP-1， ICP-2， ICP-3 and ICP-4 were detected to contain 19.21%， 34.91%， 37.70% and 30.21% of total sugar， respectively， and their alduronic acid contents were 5.04%， 44.90%， 24.20% and 5.84%， respectively. The gel permeation chromatograph showed that ICP-2 and ICP-3 were of high and uniform purity， their Mw being estimated about 440.440 and 348.279 ku. The UV spectra showed that these four fractions all had a characteristic absorption peak at near 280 nm. The IR spectrum indicated that all the fractions had a structure of pyranose ring. These results showed that this extraction and fractionation method can be used to produce uniformly pure water-soluble polysaccharides with higher concentrations from I. kudingcha C.J. Tseng.

Keywords Ilex kudingcha C.J.Tseng ； polysaccharides ； physicochemical properties ； spectroscopic properties

苦丁茶具有極高的藥用和保健價(jià)值，在中國(guó)消費(fèi)歷史已超過(guò)2 000多年[1]，至少涉及12個(gè)科30多個(gè)不同品種[2-3]，市面上常見(jiàn)的苦丁茶種類(lèi)以木犀科為代表的小葉苦丁茶及冬青科為代表的大葉苦丁茶為主[4]?？喽〔韪缓喾?、黃酮、三萜類(lèi)、皂苷和多糖等生理活性物質(zhì)，具有抗氧化、抗衰老、降血脂、降血壓和抑菌等多種生理功效[5]。

天然產(chǎn)物多糖廣泛存在于自然界中，已有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，香菇多糖、靈芝多糖、車(chē)前子多糖等生物活性多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗腫瘤、抗炎癥等活性[6-8]?？喽〔枳鳛橹袊?guó)傳統(tǒng)的藥食植物資源，其中含有豐富的多糖類(lèi)化合物。何玲玲等[9]研究發(fā)現(xiàn)，苦丁茶冬青多糖為一種復(fù)雜的糖蛋白類(lèi)化合物，F(xiàn)an等[5]針對(duì)大葉冬青多糖的一級(jí)結(jié)構(gòu)及其生理功效進(jìn)行了一系列的探索研究。目前，除了對(duì)苦丁茶多糖的生理活性有研究外，關(guān)于苦丁茶多糖的提取純化工藝及理化性質(zhì)卻鮮有報(bào)道。

因此，本實(shí)驗(yàn)擬以苦丁茶冬青為研究對(duì)象，采用乙醇分級(jí)沉淀的方法分離得到組分單一且純度較高的苦丁茶冬青多糖，并測(cè)定不同分級(jí)組分的總糖含量、糖醛酸含量、蛋白質(zhì)含量及總酚含量等理化指標(biāo)，采用凝膠滲透色譜法對(duì)其進(jìn)行純度鑒定和相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定，同時(shí)考察各組分紫外和紅外光譜特性，以期為高純度的苦丁茶冬青多糖的快速分離提供理論依據(jù)，為其開(kāi)發(fā)利用奠定一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料

苦丁茶冬青，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所提供。

1.1.2 試劑

考馬斯亮藍(lán)G250購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；牛血清蛋白、半乳糖醛酸、葡萄糖、KBr購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；焦性沒(méi)食子酸購(gòu)自阿拉丁生化科技股份有限公司；葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（T-10、T-40、T-70、T-500、T-2000）、福林酚購(gòu)自上海荔達(dá)生物科技有限公司；苯酚、濃硫酸、疊氮鈉為分析純?cè)噭?gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；無(wú)水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、無(wú)水乙醚均為分析純?cè)噭?，?gòu)自西隴化工股份有限公司。

1.1.3 儀器與設(shè)備

ME4002E電子天平，購(gòu)自梅特勒-托利多有限公司；DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋，購(gòu)自天津泰斯特儀器有限公司；R-215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購(gòu)自瑞士步琪實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司；LXJ-IIB多管離心機(jī)，購(gòu)自上海安亭科學(xué)儀器廠；Scientz-18ND真空冷凍干燥機(jī)，購(gòu)自寧波新芝生物科技股份有限公司；SPECORD 250 PLUS紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，購(gòu)自德國(guó)耶拿分析儀器公司；Nicolet FT-IR 5700傅立葉紅外光譜儀，購(gòu)自賽默飛世爾科技公司；Waters2695超高效凝膠滲透色譜儀，購(gòu)自美國(guó)Waters公司。

1.2 方法

1.2.1 苦丁茶冬青多糖的提取

取苦丁茶冬青干葉，用粉碎機(jī)磨成粉狀，然后用85%的乙醇溶液浸提24 h，過(guò)濾，濾渣于50℃烘箱中烘干備用。稱(chēng)取一定量的苦丁茶干燥粉末，與蒸餾水按1∶20于80℃條件水浴3 h，重復(fù)2次，合并收集濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮。濃縮液經(jīng)Sevage試劑（氯仿∶正丁醇為4∶1，V/V）除蛋白，重復(fù)3次，透析（自來(lái)水48 h，蒸餾水24 h）。

收集透析液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至適當(dāng)?shù)捏w積，加入無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)乙醇溶液終濃度分別為20%、40%、60%、80%，4℃冰箱中放置12 h，4 000 r/min離心10 min，分別收集對(duì)應(yīng)乙醇濃度下的沉淀物質(zhì)，真空冷凍干燥至恒重，得到4種不同組分的苦丁茶冬青多糖ICP-1、ICP-2、ICP-3、ICP-4。

1.2.2 理化指標(biāo)測(cè)定

以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)，采用苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量（w/w）；以半乳糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)，采用硫酸-咔唑法測(cè)定糖醛酸含量（w/w）；以牛血清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，采用考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定蛋白質(zhì)含量（w/w）；以焦性沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)，采用福林酚法測(cè)定總酚含量（w/w）。

1.2.3 多糖純度及相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定

多糖的相對(duì)分子質(zhì)量大小與其在凝膠柱上的洗脫體積具有一定的線(xiàn)性關(guān)系，通過(guò)繪制不同相對(duì)分子質(zhì)量葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)相同條件下多糖樣品的洗脫體積，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可測(cè)定苦丁茶冬青多糖的相對(duì)分子質(zhì)量。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液：蒸餾水配置1 mg/mL的葡萄糖、Dextran T-10、Dextran T-40、Dextran T-70、Dextran T-500、Dextran T-2000溶液。

樣品溶液：蒸餾水配成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的ICP-1、ICP-2、ICP-3、ICP-4溶液。

采用UltrahydrogelTM Linear Column （7.8 mm×300 mm）色譜柱，以0.02%（w/w）疊氮鈉水溶液為流動(dòng)相，示差檢測(cè)器溫度為40℃，流速為0.6 mL/min。樣品進(jìn)樣前用0.45 μm的膜過(guò)濾，進(jìn)樣量為10 μL。

1.2.4 紫外可見(jiàn)光譜分析

蒸餾水配成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的樣品溶液，紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描并采集ICP-1、ICP-2、ICP-3、ICP-4溶液在190～900 nm波段范圍內(nèi)的圖譜信息。

1.2.5 紅外光譜分析

分別稱(chēng)取苦丁茶冬青各組分多糖ICP-1、ICP-2、ICP-3、ICP-4各1～2 mg，與光譜級(jí)溴化鉀混合研磨成細(xì)小顆粒，壓制成透明薄片，在波數(shù)為400～4 000 cm-1范圍內(nèi)掃描其紅外光譜圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 理化性質(zhì)測(cè)定

由圖1可知，苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量的回歸方程為y=12.254x+0.010 1，R2=0.999 8；硫酸-咔唑法測(cè)定半乳糖醛酸含量的回歸方程為y=6.922 7x+0.018 9，R2=0.998 0；考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的回歸方程為y=7.021 4x+0.005 97，R2=0.996 2；福林酚法測(cè)定總酚含量的回歸方程為y=37.980x+0.015 4，R2=0.999 6。

由表1可知，ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4的總糖含量分別為19.21%、34.91%、37.70%和30.21%，其中乙醇濃度在40%和60%時(shí)，總糖濃度高于其他組分。ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4的糖醛酸含量分別為5.04%、44.90%、24.20%和5.84%，推斷苦丁茶冬青多糖可能為酸性多糖。ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4組分中的總酚含量較少，表明通過(guò)乙醇分級(jí)沉淀的方式能有效降低苦丁茶冬青多糖組分里的雜質(zhì)含量，達(dá)到初步純化、分離的目的。經(jīng)過(guò)sevag法重復(fù)脫除蛋白質(zhì)之后，ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4四組分仍均含有較少的蛋白質(zhì)，推測(cè)苦丁茶冬青多糖可能是一種復(fù)雜的糖蛋白類(lèi)物質(zhì)。從表1中各理化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果中可以得出，ICP-2和ICP-3組分的多糖純度較高，其總糖、糖醛酸和蛋白質(zhì)三者含量之和分別為87.59%與66.01%，具有較高的研究?jī)r(jià)值。

2.2 純度及相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定

從圖2可看出，ICP-2與ICP-3組分為均勻?qū)ΨQ(chēng)單峰，說(shuō)明乙醇濃度在40%和60%濃度條件下沉淀所得的苦丁茶冬青多糖純度較高。而ICP-1和ICP-4組分的凝膠滲透色譜圖則顯示含有多個(gè)峰形，說(shuō)明存在不同相對(duì)分子質(zhì)量的苦丁茶冬青多糖組分。與表1的理化性質(zhì)檢測(cè)結(jié)果相對(duì)應(yīng)，ICP-1中含有較多的雜質(zhì)可能為其出現(xiàn)多個(gè)色譜峰的主要原因。

對(duì)比4個(gè)不同分離組分的凝膠滲透色譜圖可發(fā)現(xiàn)，不同乙醇濃度得到的組分的保留時(shí)間有明顯的后移趨勢(shì)，說(shuō)明采用乙醇分級(jí)的方法能達(dá)到將不同相對(duì)分子質(zhì)量的苦丁茶冬青多糖分離、純化的目的。

按1.2.3中的色譜條件進(jìn)樣，分別記錄各葡聚糖系列標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)保留時(shí)間tR，并計(jì)算其分配系數(shù)Kav值（表2）。根據(jù)分子量和分配系數(shù)Kav值繪制凝膠滲透色譜葡聚糖系列標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程Kav=-0.255 2logMw+1.539 7，R2=0.981 4（圖3）。

根據(jù)圖2中ICP-2與ICP-3的凝膠滲透色譜圖的相對(duì)保留時(shí)間12.880和13.010 min，計(jì)算得出ICP-2與ICP-3組分的苦丁茶冬青多糖的相對(duì)分子質(zhì)量約為440.44與348.279 ku。

2.3 紫外可見(jiàn)光譜分析

由圖4可知，ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4組分在280 nm處均有吸收峰，說(shuō)明均有蛋白質(zhì)的存在，且ICP-1中蛋白質(zhì)的含量最高，這與表1所列理化性質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果相一致。從圖4可看出，與ICP-1和ICP-4相比，ICP-2和ICP-3的紫外掃描圖譜顯得更為平滑，說(shuō)明其中雜質(zhì)相對(duì)較少。結(jié)合圖2中4種多糖的凝膠滲透色譜圖可看出，ICP-2與ICP-3是純度相對(duì)比較高的苦丁茶冬青多糖組分。

2.4 紅外光譜分析

由圖5可知，ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4這4個(gè)組分的主要吸收譜帶基本相同，說(shuō)明不同分級(jí)組分具有相同的官能團(tuán)，其分子結(jié)構(gòu)基本相同。其中3 400～3 300 cm-1出現(xiàn)寬且強(qiáng)的吸收峰應(yīng)為糖類(lèi)結(jié)構(gòu)中O-H伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的，2 930 cm-1處應(yīng)該為C-H的伸縮振動(dòng)所形成的吸收峰，1 400～1 200 cm-1的吸收譜帶可能為糖類(lèi)結(jié)構(gòu)中C-H的變角振動(dòng)所產(chǎn)生，由以上3點(diǎn)可初步判定這4個(gè)組分的主要組分均為多糖類(lèi)化合物。

紅外圖譜中1 738～1 640 cm-1之間的吸收峰推測(cè)為-COOH中-C=O的吸收峰，1 250～1 230 cm-1出現(xiàn)的吸收峰推測(cè)為-COOH中O-H的變角振動(dòng)所形成。同時(shí)，3 400～3 300 cm-1范圍內(nèi)存在O-H的伸縮振動(dòng)，判斷ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4這4個(gè)組分含有-COOH和-CHO這2種官能團(tuán)，表明所得到的多糖組分均含有糖醛酸，與前面理化性質(zhì)結(jié)果一致。

此外，紅外譜圖中1 602 cm-1附近及1 530～1 510 cm-1范圍內(nèi)的一組弱吸收峰應(yīng)為酰胺結(jié)構(gòu)中N-H的彎曲振動(dòng)產(chǎn)生，1 440 cm-1附近存在N-H變角振動(dòng)產(chǎn)生的振動(dòng)吸收，1 110～1 070 cm-1附近產(chǎn)生的強(qiáng)而尖的吸收峰推測(cè)為C-N伸縮振動(dòng)所產(chǎn)生，由此可判斷ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4組分中均含有蛋白質(zhì)，與理化指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果及紫外掃描的圖譜信息一致（圖5）。

1 020～980 cm-1范圍內(nèi)出現(xiàn)的弱吸收峰應(yīng)為吡喃型糖苷的特征吸收。920～890 cm-1范圍內(nèi)的弱吸收峰為β-吡喃糖環(huán)的非對(duì)稱(chēng)伸縮振動(dòng)所產(chǎn)生，850～810 cm-1范圍所產(chǎn)的弱吸收則為α-吡喃糖環(huán)的特征吸收，由此說(shuō)明苦丁茶冬青多糖的單糖主要以吡喃型糖環(huán)的形式存在。

3 討論

多糖的純化對(duì)于從天然產(chǎn)物中篩選高效的天然活性多糖組分具有重要的意義。傳統(tǒng)熱水浸提的方法所得到的多糖大多為糖類(lèi)的混合物[10]，其差異性主要表現(xiàn)在不同組分之間的理化性質(zhì)、化學(xué)組成和微觀結(jié)構(gòu)的不同。天然產(chǎn)物多糖的抗氧化[11]、抗腫瘤[12]及促免疫調(diào)節(jié)[13]的功能與其復(fù)雜的結(jié)構(gòu)組成有著密切聯(lián)系[14]。Fan等[5]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大葉冬青苦丁茶多糖清除活性氧自由基的能力隨糖醛酸含量升高及分子量增加呈明顯上升趨勢(shì)。Miao等[12]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，花臉香蘑多糖中糖醛酸含量能顯著影響其抗腫瘤的能力，具有更佳的潛在利用價(jià)值。本研究利用乙醇分級(jí)沉淀的方法從苦丁茶冬青水提物中分離得到純度較高且組分均一的苦丁茶冬青多糖組分ICP-2與ICP-3，具有更加方便、快捷的優(yōu)點(diǎn)。

苦丁茶冬青多糖是苦丁茶冬青中一類(lèi)重要的功能活性組分。王新等[15]利用DEAE-纖維素陰離子交換柱層析法對(duì)苦丁茶粗多糖KPSⅡ進(jìn)行分離純化，得到2個(gè)精制的分離組分KPSⅢa和KPSⅢb，其總糖含量分別為72.31%和67.26%，蛋白質(zhì)含量分別為2.72%和3.27%。本實(shí)驗(yàn)利用苯酚-硫酸法測(cè)得ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4中總糖含量分別為19.21%、34.91%、37.70%和30.21%；利用硫酸-咔唑比色法測(cè)得糖醛酸含量分別為5.04%、44.90%、24.20%和5.84%，其中，ICP-2和ICP-3的糖含量較高，且經(jīng)過(guò)sevag法脫除蛋白處理后仍含有少量的蛋白質(zhì)，這表明苦丁茶冬青多糖可能是一類(lèi)與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合的糖蛋白類(lèi)聚合物，該結(jié)果與何玲玲等[9]、王新等[15]、吳曉鵬等[16]報(bào)道的研究結(jié)果一致。苦丁茶冬青多糖ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4的紫外可見(jiàn)分光廣度計(jì)掃描圖譜中260、280、330 nm處均存在吸收峰，說(shuō)明含有一定量的蛋白質(zhì)、核酸和多酚等成分，其中ICP-2和ICP-3為純度相對(duì)較高的乙醇分級(jí)組分。

蔡娟等[17]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苦丁茶冬青粗多糖在1 520（N-H彎曲振動(dòng)）、1 450（N-H變角振動(dòng)）和1 080 cm-1（C-N伸縮振動(dòng)）附近存在較強(qiáng)的吸收峰，這可說(shuō)明苦丁茶冬青多糖中存在緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)。本研究結(jié)果表明，苦丁茶冬青多糖ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4均為含有蛋白質(zhì)的酸性多糖，其單糖構(gòu)型主要以吡喃型糖環(huán)為主，與前期報(bào)道的 研究結(jié)果一致。Xu等[18]通過(guò)HP-GPC測(cè)得滸苔多糖PHPE1、PHPE2、PHPE3的相對(duì)分子質(zhì)量分別為103、45.4、9.8 ku。殷軍藝等[19]利用HPGPC對(duì)運(yùn)用生物大分子純化系統(tǒng)的大粒車(chē)前子分離組分PLP進(jìn)行純度及分子量的測(cè)定，其研究結(jié)果表明，PLP為均一多糖，相對(duì)分子量約為891.3 ku。本研究利用高效凝膠滲透色譜法（HP-GPC）對(duì)苦丁茶冬青多糖4種分級(jí)組分的純度及其相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，ICP-2與ICP-3的HP-GPC圖譜為對(duì)稱(chēng)的單峰，說(shuō)明這2個(gè)組分為純度較高的苦丁茶冬青多糖，相對(duì)分子質(zhì)量分別為440.440與348.279 ku。與同類(lèi)研究比較發(fā)現(xiàn)，乙醇分級(jí)沉淀作為一種簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的分離手段，適用于制備組分均一的苦丁茶冬青多糖，能有效簡(jiǎn)化其分離純化的工藝，并為其生產(chǎn)應(yīng)用提供一定的理論支撐。

綜上所述，本研究利用乙醇分級(jí)沉淀的方法來(lái)分離、純化苦丁茶冬青多糖，并對(duì)各組分進(jìn)行理化性質(zhì)分析。結(jié)果表明，乙醇濃度40%、60%和80%分離得到的ICP-2、ICP-3和ICP-4的總糖含量較高，且均含有一定量的蛋白質(zhì)，其中ICP-2與ICP-3這2個(gè)組分的糖醛酸含量較高，各苦丁茶冬青多糖組分主要以吡喃型糖環(huán)的形式存在。其中，ICP-2與ICP-3為均一的苦丁茶冬青多糖組分，其相對(duì)分子質(zhì)量分別為440.44與348.279 ku。因此，乙醇分級(jí)沉淀的方法可用于分級(jí)純化制備組分均一、純度較高的苦丁茶冬青多糖組分。

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