杜碧瑩

(廣東省廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160)

·檢驗(yàn)檢測·

頂空氣相色譜法檢測環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥中5種殘留溶劑

杜碧瑩

(廣東省廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160)

目的 建立檢測環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥中5種殘留溶劑的頂空氣相色譜法。方法 色譜柱采用 Agilent DB－WAXetr毛細(xì)管柱(30m×250μm，0.5μm)，程序升溫，流速為1.5mL／min；進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為10∶1；進(jìn)樣口溫度為200℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃；頂空瓶平衡溫度為110℃，平衡時間為30min；進(jìn)樣量為1mL。按外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。結(jié)果 環(huán)戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶的檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為25～100，250～1 000，150～600，250～1 000，12.5～50.0μg／m L，r分別為0.999 49，0.999 73，0.999 68，0.999 73，0.999 58，精密度試驗(yàn)結(jié)果的 RSD分別為1.4%，0.7%，1.4%，1.4%，2.5%（n＝6）；加樣回收率分別為104.55%，93.74%，100.94%，96.42%，94.52%，RSD分別為1.19%，1.40%，1.68%，1.02%，3.50%(n＝6)；檢出限為0.04～0.70μg／m L，定量限為0.10～2.5μg／m L。結(jié)論 該方法簡單，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥中5種殘留溶劑的測定。

環(huán)戊丙酸雌二醇；頂空氣相色譜法；殘留溶劑

環(huán)戊丙酸雌二醇為長效雌激素，作用比戊酸雌二醇強(qiáng)而持久，臨床用于治療卵巢功能不全、閉經(jīng)、更年期綜合征、老年性陰道炎和前列腺癌等，如環(huán)戊丙酸雌二醇與醋酸甲羥孕酮組成復(fù)方注射用避孕藥(商品名Lunelle)，可作為長效避孕針每月使用1次，并已獲美國食品藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)上市[1－4]，臨床應(yīng)用廣泛。企業(yè)在生產(chǎn)時使用了環(huán)戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶等有機(jī)溶劑，由于殘留溶劑無治療作用，但又具有一定的毒性，且不同溶劑間可能會有毒性累加作用，故不能僅控制每種溶劑殘留量的限度。目前，國內(nèi)暫無環(huán)戊丙酸雌二醇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，溶劑殘留量相關(guān)檢測方法尚未見報(bào)道。根據(jù)藥物雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則，殘留溶劑作為雜質(zhì)限量檢查是質(zhì)量控制指標(biāo)之一[5－6]。參考文獻(xiàn)[7－10]及殘留溶劑指導(dǎo)原則要求，本研究中建立了測定環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥中5種殘留溶劑的頂空氣相色譜法，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，簡便、靈敏，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥中殘留溶劑控制的檢測方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient7890A型氣相色譜儀（安捷倫公司）；氫火焰離子化檢測器（FID）；AglientG1888頂空進(jìn)樣器（上海安譜科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試藥

環(huán)戊丙酰氯(批號為10120482，含量為98%），乙酸乙酯（批號為20101003－2，含量為99.5%），甲醇（批號為081029，含量為99.5%），乙醇(批號為20110718，含量為 99.7%)，吡啶（批號為 20050302－2，含量為99.5% ），二甲亞砜（色譜純，批號為 2011094，20110442，含量為99.9%），均購自廣州化學(xué)試劑廠；環(huán)戊丙酸雌二醇(北京紫竹藥業(yè)有限公司，批號分別為20110941，20110942，20110943）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：AgilentDB－WAXetr毛細(xì)管柱（30m×250μm，0.5μm）；程序升溫：初始溫度40℃，保持8 min，再以20℃ ／min的速率升溫至200℃，保持5 min；載氣：氮?dú)?；流速?.5 m L／min；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比10∶1；進(jìn)樣口溫度：200℃。檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250℃；頂空瓶平衡溫度：110℃，平衡時間：30min；進(jìn)樣量：1m L。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對照品溶液頂空進(jìn)樣，各組分色譜峰間的分離度均應(yīng)符合要求，見圖1。再取供試品溶液與對照品溶液頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見表1。

表1 5種成分理論板數(shù)與分離度

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

混合對照品溶液：稱取環(huán)戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶適量，精密稱定，用二甲亞砜定量稀釋成每1mL各含50，500，300，500，20μg的混合溶液，精密量取5mL置頂空瓶中，密封，即得。

供試品溶液：取樣品0.5 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加二甲亞砜5mL使溶解，密封，即得。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別稱取環(huán)戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶適量，用二甲亞砜溶解并稀釋成每1m L含環(huán)戊丙酰氯5 mg、乙酸乙酯50mg、甲醇30 mg、乙醇50mg、吡啶2.5mg的溶液，得混合對照貯備液。分別精密量取1，2，1，3，3，1 m L，置 200，250，100，250，200，50mL容量瓶中，用二甲亞砜定容并搖勻。精密量取5mL置頂空瓶中，密封。按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程見表2。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下的對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，測定，乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶、環(huán)戊丙酰氯峰面積的 RSD分別為0.7%，1.4%，1.4%，2.5%，1.4%（n＝6），表明儀器精密度良好。

表2 殘留溶劑線性回歸方程（n＝6）

表3 殘留溶劑回收試驗(yàn)結(jié)果（%，n＝9）

重復(fù)性試驗(yàn)：取環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥，依法平行制備供試品溶液6份，按擬訂色譜條件依法測定。結(jié)果乙酸乙酯、甲醇、吡啶均未檢出，乙醇和環(huán)戊丙酰氯含量的 RSD分別為1.5%和1.6%(n＝6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：分別稱取環(huán)戊丙酰氯、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶適量，用二甲亞砜溶解并稀釋成每1mL含環(huán)戊丙酰氯0.1mg、乙酸乙酯1.0mg、甲醇0.6mg、乙醇1.0mg、吡啶0.04mg的溶液，得回收貯備液。精密稱取已知?dú)埩羧軇┝康脑纤?.5 g，共9份，各置于頂空瓶中，分別精密加入上述貯備液 2，2，2，2.5，2.5，2.5，3，3，3m L，二甲亞砜3，3，3，2.5，2.5，2.5，2，2，2m L，密封，搖勻，制成80%，100%，120%的低、中、高濃度，頂空進(jìn)樣。結(jié)果見表3。

檢出限與定量限：精密量取對照品貯備液適量，作系列稀釋，乙酸乙酯、甲醇、乙醇、吡啶及環(huán)戊丙酰氯檢出限分別為 0.200 4，0.275 5，0.688 1，0.060 8，0.039 9μg／m L，定量限分別為0.668 0，0.918 2，2.293 6，0.202 7，0.133 2μg／m L。

2.4 樣品殘留溶劑測定結(jié)果

按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 限度選擇

在合成環(huán)戊丙酸雌二醇原料藥時，環(huán)戊丙酰氯作為起始原料使用，由于起始原料質(zhì)量與終產(chǎn)物質(zhì)量有關(guān)，且原料中所含的有機(jī)溶劑也易引入到終產(chǎn)物。目前，尚無足夠毒理學(xué)確定控制限度，但考慮合成中多種溶劑使用可能產(chǎn)生溶劑間毒性累加作用，故需對環(huán)戊丙酰氯的限度進(jìn)行嚴(yán)格控制，限度不得過0.05%。其他4種溶劑則根據(jù)文獻(xiàn)[7－8]要求，甲醇與吡啶屬二類溶劑，限度為0.30%和0.02%，此溶劑對人體有一定毒性，限制使用；乙醇與乙酸乙酯屬三類溶劑，限度均為0.50%，此溶劑對人體健康危險性較小[9－10]，推薦使用。

3.2 溶劑選擇

環(huán)戊丙酸雌二醇在水中不溶解，使用二甲亞砜為溶劑，結(jié)果二甲亞砜在5種待測溶劑之后出峰，對其他溶劑均無干擾。

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Determ ination of Five Residual Solvents in Estradiol Cypionate Crude Drug by Headspace Gas Chromatography

Du Biying
(Guangzhou Institute for Drug Control,Guangdong,Guangzhou,China 510160)

Ob jective To establish a headspace gas chromatography(HS－GC)method for determination of 5 residual solvents in Estradiol Cypionate crude drug.M ethods HS－GC method was performed by using Agilent DB－WAXetr column(30 m×250μm,0.5μm),programmed temperature,flow rate was 1.5 mL／min,split ratio was 10∶1,inlet temperature was 200℃,the detector was flame ionization detector,detecting temperature was 250℃.The bottles equilibrium temperature was 110℃,the equilibrium time was 30 min,and injection volume was 1 mL.External standard method was used for quantitative analysis.Results The Linear range were 25～100μg／mL (r＝0.999 49)for cyclopentyl propionyl chloride,250～1 000μg／m L(r＝0.999 73)for acetic ether,150～600μg／mL(r＝0.999 68) for methanol,250～1 000μg／m L(r＝0.999 73)for ethanol,12.5～50.0μg／m L(r＝0.999 58)for pyridine.The RSDs of precision were 1.4%,0.7%,1.4%,1.4%,2.5%(n＝6),respectively.The recoveries were 104.55%(RSD＝1.19%),93.74%(RSD＝1.40%), 100.94%(RSD＝1.68%),96.42%(RSD＝1.02%),94.52%(RSD＝3.50%).The detection limit was 0.04～0.70μg／mL and the quantitation limit was 0.10～2.5 μg／m L.Conclusion The method is simple,accurate and reproducible,which can be used for the determination of the 5 residual solvents in Estradiol Cypionate crude drug.

Estradiol Cypionate;headspace gas chromatography;residual solvent

2016－11－24；

2017－01－14)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.07.008

杜碧瑩，女，碩士研究生，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量，（電話）020－26282368（電子信箱）winddby＠tom.com。

TQ 460.4；TQ 460.7

A

1006－4931(2017)07－0024－03