董文統(tǒng), 劉君昂*, 周國(guó)英, 張 茜,2, 何苑皞, 蘇圣淞

(1. 中南林業(yè)科技大學(xué),森林有害生物防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 長(zhǎng)沙 410004; 2. 湖南汽車工程職業(yè)學(xué)院, 株洲 412001)

降香黃檀炭疽病藥劑篩選及林間防效

董文統(tǒng)1, 劉君昂1*, 周國(guó)英1, 張 茜1,2, 何苑皞1, 蘇圣淞1

(1. 中南林業(yè)科技大學(xué),森林有害生物防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;經(jīng)濟(jì)林培育與保護(hù)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 長(zhǎng)沙 410004; 2. 湖南汽車工程職業(yè)學(xué)院, 株洲 412001)

為了篩選出防治降香黃檀炭疽病的環(huán)境友好型藥劑,本文測(cè)定了10種殺菌劑的室內(nèi)毒力,并從中篩選出毒力較強(qiáng)的藥劑進(jìn)行林間防效試驗(yàn)。結(jié)果表明:25%丙環(huán)唑EC,60%唑醚·代森聯(lián)WG和40%氟硅唑EC對(duì)降香黃檀炭疽病菌的毒力較強(qiáng),其EC50分別為0.12,0.15和1.12 mg/L。其他供試藥劑的EC50分別為:75%百菌清WP 231.42 mg/L，10%苯醚甲環(huán)唑WG 3.60 mg/L，80%醚菌酯WG 1.58 mg/L，70%甲基硫菌靈WP 4.51 mg/L，3%中生菌素WP 19.36 mg/L，80%代森錳鋅WP 79.76 mg/L，80%多菌靈WP 11.47 mg/L?？紤]到氟硅唑、唑醚·代森聯(lián)價(jià)格較高,建議將這兩種藥劑使用在降香黃檀苗木炭疽病的防治上。人工林炭疽病的防治采用25%丙環(huán)唑EC、80%醚菌酯WG、70%甲基硫菌靈WP和3%中生菌素WP,每隔15 d依次施用,林間防治效果達(dá)到71.53%,明顯高于其他防治方法。因此,在人工林降香黃檀炭疽病的防治中采用這4種藥劑每隔15 d依次施用可以有效控制降香黃檀炭疽病的暴發(fā)。噴霧時(shí)間應(yīng)選擇在陰天或晴天早晨露水干后8:00-10:00或者15:00-17:00。

降香黃檀; 炭疽病; 藥劑篩選; 林間防效

降香黃檀Dalbergiaodorifera,俗稱黃花梨、花梨母,屬于蝶形花科黃檀屬,全球分布約有120種,我國(guó)目前已知的有25種。是我國(guó)天然分布的兩種珍貴紅木樹種之一,為海南省的特有樹種。

降香黃檀病害主要發(fā)生于葉部,由膠孢炭疽菌ColletotrichumgloeosporioidesPenz.引起的炭疽病是其主要葉部病害,發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致葉片全部脫落[1]。目前,在海南省,無論是苗圃、人工林、還是房前屋后散生的花梨,降香黃檀炭疽病發(fā)病率都很高。由于海南省目前降香黃檀市場(chǎng)比較混亂,沒有形成大規(guī)模的產(chǎn)業(yè)化,主要是一些小的公司、林場(chǎng)、科研所、農(nóng)戶在進(jìn)行育苗和栽培,所以沒有統(tǒng)一的、可進(jìn)行推廣的防治技術(shù),主要靠經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行防治。目前,海南省市面防治炭疽病主要采用的藥劑有多菌靈、代森錳鋅、波爾多液等,其防治效果的好壞很大程度上取決于生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)者的意識(shí)。

本研究旨在從市面常見藥劑中篩選防治炭疽病的藥劑,經(jīng)室內(nèi)毒力和林間防效試驗(yàn)找到防治降香黃檀炭疽病的有效方法。

1 材料與方法

1.1 材料

供試植物材料:采自海南省澄邁縣國(guó)營(yíng)澄邁林場(chǎng)降香黃檀人工林葉片。

供試病原菌:從海南省澄邁縣國(guó)營(yíng)澄邁林場(chǎng)采集降香黃檀典型炭疽病病葉,由本實(shí)驗(yàn)室對(duì)其致病菌進(jìn)行分離、鑒定為膠孢炭疽菌ColletotrichumgloeosporioidesDOT-20。

供試培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。

供試藥劑:75%乙醇、10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(山東青島翰生生物科技有限公司)、80%代森錳鋅可濕性粉劑(天津施普樂農(nóng)藥技術(shù)發(fā)展有限公司)、80%多菌靈可濕性粉劑(天津施普樂農(nóng)藥有限公司)、75%百菌清可濕性粉劑(威海韓孚生化藥業(yè)有限公司)、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑(青島奧迪斯生物科技有限公司)、25%丙環(huán)唑乳油(山東億嘉農(nóng)化集團(tuán))、80%醚菌酯水分散粒劑(陜西湯普森生物科技有限公司)、40%氟硅唑乳油(美國(guó)志信公司廣州代表處)、60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑(德國(guó)巴斯夫有限公司)、3%中生菌素可濕性粉劑(福建凱立生物制品有限公司)。

儀器設(shè)備:小型噴霧機(jī)、尼康照相機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定

1.2.1.1 供試藥劑的抑菌作用

以DOT-20為供試菌株,采用菌絲生長(zhǎng)速率法[2]測(cè)定10種供試藥劑(表1)的抑菌作用。首先將供試的10種藥劑按所需濃度配制成100 mL的母液,再按梯度稀釋法,用無菌水稀釋成系列濃度梯度。每種藥劑設(shè)置5個(gè)不同的濃度梯度,以無菌水作為對(duì)照。

用無菌移液槍吸取1 mL的不同濃度藥液加入到49 mL PDA培養(yǎng)基中,以1 mL蒸餾水代替供試藥劑作為對(duì)照。每種藥劑的1個(gè)濃度為1個(gè)處理,每處理倒3個(gè)平板。在已培養(yǎng)5 d的DOT-20菌落邊緣打取6 mm的菌絲塊,分別接種到含藥平板的中央。于28℃的普通光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),5 d后采用十字交叉法[3]測(cè)量菌落直徑。計(jì)算不同濃度藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的相對(duì)抑菌率(%)、毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)(r)和EC50,然后進(jìn)行比較[4]。

表1 10種供試藥劑的濃度梯度

1.2.1.2 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS進(jìn)行方差分析,用LSD法比較各藥劑結(jié)果的差異顯著性(α=0.05)[5]。計(jì)算不同濃度下藥劑的抑菌率,將抑菌率轉(zhuǎn)換為幾率值y,以藥劑濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)x,用SPSS軟件求得毒力回歸方程,EC50及相關(guān)系數(shù)。

1.2.2 林間防效測(cè)定

目前,海南省市面上防治炭疽病的藥劑包括多菌靈、波爾多液、代森錳鋅等,但防治效果不太理想,不能有效遏制炭疽病的發(fā)生。所以進(jìn)行林間防效試驗(yàn),進(jìn)行藥劑篩選及防治方法的研究是有必要的。

1.2.2.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

澄邁林場(chǎng)(19°11′N,111°1′E)位于海南省澄邁縣內(nèi)。試驗(yàn)地位于澄邁林場(chǎng)場(chǎng)部所在地古嶺工區(qū),距離澄邁縣城8 km左右,毗鄰加潭水庫(kù),水源充足。林場(chǎng)的地形為低丘陵、臺(tái)地。境內(nèi)的大小嶺共138個(gè)。屬于熱帶季風(fēng)氣候,年降水量1 707 mm,年均溫23.6℃。海拔高度40～120 m。極端高溫38.9℃,極端低溫為2.8℃[6]。土壤種類有鐵質(zhì)磚紅壤、砂壤土和磚紅壤。試驗(yàn)地為林場(chǎng)內(nèi)10 hm2降香黃檀人工林,砂壤土,林下植被包括含羞草MimosapudicaL.、闊葉豐花草BorrerialatifoliaAubl.、假馬鞭草Stachytarphetajamaicensis(L.) Vahl.、飛機(jī)草EupatoriumodoratumL.、地毯草Axonopuscompressus(Sw.) Beauv. 等。

1.2.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果,從10種藥劑中篩選出4種藥劑進(jìn)行林間防治試驗(yàn)。試驗(yàn)于2013年6月-10月在澄邁林場(chǎng)降香黃檀示范林進(jìn)行。2014年及2015年6月-10月進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。試驗(yàn)共施藥4次,每次施藥間隔15 d,依次為第1天、第16天、第31天和第46天。施藥時(shí),用在太陽(yáng)底下曝曬2 d的自來水將藥劑配制成所需濃度。選擇陰天或晴天早晨露水干了以后(8:00-10:00)或者下午溫度稍微低點(diǎn)的時(shí)候(15:00-17:00)用噴霧機(jī)噴霧,使藥劑在葉片上形成均勻的霧滴[8]。如遇大雨天氣則推遲1～2 d用藥。

施藥方式包括單一藥劑連續(xù)施用和不同藥劑輪換施用。單一藥劑連續(xù)施用方式是指同種藥劑每15 d用藥1次,連續(xù)施用4次；不同藥劑輪換施用方式是指每15 d施藥1次,連續(xù)施用4次,每次使用4種藥劑中的1種。以噴施清水為對(duì)照,共計(jì)29種施藥方式[7]。每種施藥方式處理5排樹(50株),重復(fù)3次。每次施藥前1 d調(diào)查植株發(fā)病率及病情指數(shù)。單一藥劑連續(xù)施藥方式于第1次藥后5、10、15 d各調(diào)查1次,以后每次藥后14 d調(diào)查1次,評(píng)價(jià)4種藥劑的防治效果及藥效持續(xù)時(shí)間；不同藥劑輪換施藥方式于每次施藥后14 d調(diào)查,評(píng)價(jià)不同輪換組合的防治效果。調(diào)查時(shí)以當(dāng)年新生葉片為標(biāo)準(zhǔn),毎株樹分東南西北4個(gè)方向調(diào)查,每個(gè)方向用紅繩固定一根枝條,調(diào)查該枝條上50～60片葉[9],分別記載總?cè)~片數(shù)和發(fā)病葉片數(shù),計(jì)算發(fā)病率、病情指數(shù)和防治效果[10]。

病情指數(shù)=

防治效果(%)=

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定

采用SPSS分析10種藥劑對(duì)DOT-20菌絲生長(zhǎng)的抑制作用,結(jié)果表明,不同藥劑濃度處理間抑菌率對(duì)應(yīng)的幾率值存在極顯著差異(P<0.001),說明分析結(jié)果具有生物統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10種殺菌劑對(duì)炭疽病菌的抑制效果差別很大(表2),各藥劑對(duì)炭疽病菌的EC50從大到小依次為百菌清>代森錳鋅>中生菌素>多菌靈>甲基硫菌靈>苯醚甲環(huán)唑>醚菌酯>氟硅唑>唑醚·代森聯(lián)>丙環(huán)唑。抑菌效果較好的殺菌劑為氟硅唑、唑醚·代森聯(lián)和丙環(huán)唑。效果最差的為百菌清和代森錳鋅。考慮到氟硅唑和唑醚·代森聯(lián)價(jià)格昂貴,建議在降香黃檀苗木炭疽病的防治中選用。苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑同屬于環(huán)唑類藥劑,甲基硫菌靈和多菌靈也屬于同一大類藥劑,兩者擇優(yōu)進(jìn)行下一輪連續(xù)單一和輪換用藥兩種方式研究。因此選擇80%醚菌酯WG、70%甲基硫菌靈WP、3%中生菌素WP、25%丙環(huán)唑EC進(jìn)行林間防效試驗(yàn)。

2.2 林間防效測(cè)定

根據(jù)室內(nèi)毒力測(cè)定選出的4種藥劑在林間對(duì)降香黃檀炭疽病均有一定的防效(表3)。第1次施藥后5 d,25%丙環(huán)唑EC 2 200倍液和80%醚菌酯WG 5 000倍液的防治效果最好,分別達(dá)到70.92%和64.70%；70%甲基硫菌靈WP 1 500倍液效果次之,防效為56.52%；效果最差的為3%中生菌素WP 900倍液,防效為51.07%。第1次施藥后10 d,各藥劑的防治效果都有所降低,此時(shí),25%丙環(huán)唑EC 2 200倍液和80%醚菌酯WG 5 000倍液的防治效果依然最好,分別達(dá)到67.64%和57.57%。第1次施藥后15 d,4種藥劑的防治效果依次為20%丙環(huán)唑EC>80%醚菌酯WG>70%甲基硫菌靈WP>3%中生菌素WP,各藥劑的防效大幅度降低,均低于50%,而降香黃檀炭疽病的發(fā)病率都達(dá)到70%。為了防止病害再次大面積發(fā)生,需要重新施藥。

表2 10種藥劑的室內(nèi)毒力回歸方程

表3 2013年4種藥劑對(duì)降香黃檀炭疽病的防治效果

第2次施藥后14 d,不論是單一藥劑連續(xù)施用還是不同藥劑輪換施藥方式其防治效果都有所提升,其中以25%丙環(huán)唑EC+80%醚菌酯WG+70%甲基硫菌靈WP+3%中生菌素WP (B+M+J+Z)組合輪換用藥的防治效果最好,為54.31%,高于其他所有的施藥方式,而連續(xù)兩次施用25%丙環(huán)唑EC的防治效果為49.98%,80%醚菌酯WG的防效為47.00%,70%甲基硫菌靈WP的防效為41.46%,防效最差的為連續(xù)兩次施用3%中生菌素WP,其防治效果僅為29.78%(表4)。

第3次施藥后14 d,除了連續(xù)施用3%中生菌素WP的防效有所降低外,其他連續(xù)施用同種藥劑的防治效果都有所提升,但提升幅度明顯低于第2次藥后防治效果提升的幅度。第3次施藥后防治效果最好的依然為B+M+J+Z組合輪換施藥方式,防效達(dá)64.68%。而單一藥劑連續(xù)施藥方式中,25%丙環(huán)唑EC的防治效果為50.67%,80%醚菌酯WG的防治效果為48.03%,70%甲基硫菌靈WP的防治效果為42.49%,3%中生菌素WP的防治效果僅為28.65%,比第2次藥后的防效還低(表4),說明此時(shí)病原菌已經(jīng)開始對(duì)同一類藥劑產(chǎn)生了抗藥性。

第4次施藥后14 d,單一藥劑連續(xù)施用方式的防治效果均急劇下降,低于第1次藥后的防治效果,其中25%丙環(huán)唑EC的防治效果為36.36%,80%醚菌酯WG的防治效果為33.31%,70%甲基硫菌靈WP的防治效果為31.22%,3%中生菌素WP的防治效果為22.70%。但以B+M+J+Z組合輪換用藥的防治效果達(dá)到71.53%(表4),高于25%丙環(huán)唑EC第1次用藥后5 d的防治效果(70.92%)。

由表4可知,不同藥劑輪換用藥方式下降香黃檀炭疽病的發(fā)病率明顯要低于單一藥劑連續(xù)施用方式下的發(fā)病率。連續(xù)4次施用25%丙環(huán)唑EC,藥后14 d降香黃檀炭疽病的發(fā)病率依次為72.56%、61.22%、60.34%、73.15%；施用80%醚菌酯WG,藥后14 d植株的發(fā)病率依次為76.47%、64.25%、63.05%、78.24%。施用70%甲基硫菌靈WP,藥后14 d植株的發(fā)病率依次為77.63%、65.56%、65.12%、80.54%。施用3%中生菌素WP,藥后14 d降香黃檀炭疽病的發(fā)病率依次為80.16%、68.27%、69.13%、83.27%?？梢钥闯鲭S著用藥次數(shù)增多,第4次施藥后植株的發(fā)病率明顯升高,說明病原菌的抗藥性增強(qiáng),藥劑已經(jīng)不能很好地控制降香黃檀炭疽病了。而采用以B+M+J+Z組合進(jìn)行輪換用藥,藥后14 d的發(fā)病率依次為73.15%、50.25%、44.12%、33.14%。其防治效果明顯優(yōu)于單一藥劑連續(xù)施藥方式和其他輪換施藥組合,為防治降香黃檀炭疽病的最優(yōu)組合。

3 結(jié)論與討論

10種殺菌劑對(duì)降香黃檀炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明,不同殺菌劑對(duì)炭疽病菌毒力大小順序分別為:丙環(huán)唑>唑醚·代森聯(lián)>氟硅唑>醚菌酯>苯醚甲環(huán)唑>甲基硫菌靈>多菌靈>中生菌素>代森錳鋅>百菌清。其中唑醚·代森聯(lián)和氟硅唑價(jià)格昂貴,建議用于降香黃檀苗木炭疽病的防治。苯醚甲環(huán)唑和丙環(huán)唑同屬于唑類藥劑,甲基硫菌靈在植物體內(nèi)轉(zhuǎn)化成多菌靈,屬于同一類型的殺菌劑。所以選擇醚菌酯、甲基硫菌靈、丙環(huán)唑、中生菌素4種類型的殺菌劑用于降香黃檀人工林炭疽病的防治。29種施藥方式對(duì)降香黃檀炭疽病的防治效果表現(xiàn)為依次施用丙環(huán)唑、醚菌酯、甲基硫菌靈、中生菌素(B+M+J+Z)(71.53%)>單一施用丙環(huán)唑(36.36%)>單一施用醚菌酯(33.31%)>單一施用甲基硫菌靈(31.22%)>單一施用中生菌素(22.70%)。單一藥劑連續(xù)施用方式在第3次用藥后其防治效果基本都開始降低,第4次用藥后發(fā)病率都比第1次施藥后還要高,這主要是由于這些藥劑作用位點(diǎn)單一,并具有高度的選擇?；?在連續(xù)高劑量藥劑的施用下,會(huì)使抗藥性問題日益嚴(yán)重。而每隔15 d依次施用25%丙環(huán)唑EC、80%醚菌酯WG、70%甲基硫菌靈WP、3%中生菌素WP,防治效果依次為44.48%、54.31%、64.68%、71.53%,防治效果明顯高于其他的方式,能有效防治降香黃檀炭疽病。

丙環(huán)唑?yàn)檫蝾悮⒕鷦?醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑,甲基硫菌靈屬于硫代氨基甲酸酯類殺菌劑,中生菌素屬于抗生素類殺菌劑,4種藥劑能以不同的作用方式來抑制炭疽病菌的生長(zhǎng)和繁殖,目前針對(duì)降香黃檀炭疽病的藥劑篩選研究較少,這些藥劑應(yīng)用范圍也很窄,該研究將這4種殺菌劑依次輪換使用取得了較好的防治效果,應(yīng)加以推廣。此外,還可以考慮用同類型的其他殺菌劑來替換,如可用三唑酮、三唑醇等替換丙環(huán)唑,多菌靈等替換甲基硫菌靈,嘧菌酯、嘧菌胺等替換醚菌酯。另外,考慮到藥劑復(fù)配的增效性,也可開展室內(nèi)復(fù)配毒力試驗(yàn),以找到更好的防治藥劑及方法。

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(責(zé)任編輯：楊明麗)

The screening and field efficacy of effective fungicides againstanthracnose ofDalbergiaodorifera

Dong Wentong1, Liu Jun’ang1, Zhou Guoying1, Zhang Qian1,2, He Yuanhao1, Su Shengsong1

(1.Hunan Provincial Key Laboratory for Control of Forest Diseases and Pests;Key Laboratory of Cultivation andProtection for Non-wood Forest Trees of Ministry of Education, Central South University of Forestry and Technology,Changsha 410004, China; 2. Hunan Automotive Engineering Vocational College, Zhuzhou 412001, China)

In order to screen pesticides against anthracnose ofDalbergiaodorifera, the indoor toxicity and the field control efficacy of ten fungicides were investigated. 25% propiconazole EC, 60% pyraclostrobin·metiram WG and 40% flusilazole EC showed the strong virulence against anthracnose ofD.odoriferawith EC50values of 0.12, 0.15 and 1.12 mg/L, respectively. The EC50of 25% chlorothalonil EC was 231.42 mg/L, 10% difenoconazole WG was 3.60 mg/L, 80% kresoxim-methyl WG was 1.58 mg/L, 70% thiophanate-methyl WP was 4.51 mg/L, 3% zhongshengmycin WP was 19.36 mg/L, 80% mancozeb WP was 79.76 mg/L, 80% carbendazim WP was 11.47 mg/L. Of all the tested pesticides, 40% flusilazole EC and 60% pyraclostrobin·metiram were recommended to control seedling anthracnose ofD.odoriferabecause of their higher price. The 25% propiconazole EC, 80% kresoxim-methyl WG, 70% thiophanate-methyl and 3% zhongshengmycin WP were recommended for prevention and control of anthracnose on plantation ofD.odorifera. When these four pesticides were applied in turn every 15 days,the control effect reached 71.53%, which was significantly higher than that of other control methods. It should be sprayed between 8:00-10:00 am on cloudy or sunny day, or between 15:00-17:00.

Dalbergiaodorifera; anthracnose; pesticide screening; field efficacy

2016-06-23

2016-08-15

國(guó)家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201304402)

S 763.7

B

10.3969/j.issn.0529-1542.2017.03.039

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