李成應(yīng) 焦偉麗 溫錦芳

(佛山市南海東方澳龍制藥有限公司,廣東佛山 528234)

三氯苯達唑的國內(nèi)外研究與應(yīng)用現(xiàn)狀

李成應(yīng) 焦偉麗 溫錦芳

(佛山市南海東方澳龍制藥有限公司,廣東佛山 528234)

概述了一種用于草食動物的苯并咪唑類驅(qū)蟲藥三氯苯達唑的理化性質(zhì)、作用機制、藥代動力學(xué)、藥效學(xué)等特點，以期為該藥在獸醫(yī)臨床應(yīng)用提供參考。

三氯苯噠唑 藥代動力學(xué) 作用機制 苯并咪唑類驅(qū)蟲藥

1 前言

寄生蟲感染是危害畜禽生產(chǎn)和畜牧業(yè)發(fā)展的重要疾病，其防治方式主要以藥物預(yù)防為主。三氯苯達唑（Triclabendazole，TCBZ）是20 世紀(jì)80 年代由瑞士汽巴－嘉基（Ciba－Geigy）藥廠開發(fā)生產(chǎn)的一類苯丙咪唑類衍生物，主要用于控制綿羊和牛中肝片吸蟲的感染。1983年開始在獸醫(yī)實踐中用于治療肝片吸蟲病，直到1989年里海地區(qū)附近的肝片吸蟲流行，伊朗當(dāng)局批準(zhǔn)使用獸用制劑治療感染之前的時候才在人類上使用。肝片吸蟲病在61個國家地方性蔓延，現(xiàn)已成為世界各地公眾重要的食源性感染疾病，如玻利維亞，厄瓜多爾和秘魯?shù)陌驳谒垢咴＜暗哪崃_河三角洲和北部伊朗。據(jù)估計，全世界有240萬人感染，超過1.8億人有感染風(fēng)險。本文就三氯苯噠唑的理化性質(zhì)、藥代動力學(xué)及毒理學(xué)等研究現(xiàn)狀進行了介紹，以期為該藥在獸醫(yī)臨床上的合理應(yīng)用以及開展相關(guān)研究提供參考。

2 理化性質(zhì)

三氯苯噠唑的化學(xué)名稱為：5-氯-6-（2，3-二氯苯氧基）-2-甲硫基-1H-苯并咪唑，分子式為C14H9CL3N2OS，CAS登記號為68786-66-3，分子質(zhì)量359.65，密度為1.59g/cm3，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1。

圖1 化學(xué)結(jié)構(gòu)式

三氯苯噠唑物理性質(zhì)：白色致類白色結(jié)晶性粉末，無臭。溶于甲醇和乙酸乙酯等有機溶劑中，有輕微芳香味，國外藥劑類型主要有混懸液和藥丸兩種劑型，國內(nèi)有顆粒劑劑型。混懸液分別施用于綿羊和牛10或12mg/kg體重的口服劑量。三氯苯噠唑由4-氯-5-（2，3-二氯苯氧基鄰苯二胺為起始原料，與二硫化碳環(huán)合得5-氯-6-（2，3-二氯苯氧基）-ZH-1，3-2氫苯并咪哩-2-硫酮，爾后與碘甲烷反應(yīng)即得。

3 作用機制

三氯苯達唑?qū)€蟲沒有活性。它與目前在人類中使用的其他苯并咪唑驅(qū)腸蟲藥（例如阿苯達唑，甲苯達唑）不同，因為這些化合物對線蟲具有選擇性活性，并且對吸蟲和其他吸蟲蠕蟲沒有顯著活性。三氯苯噠唑不僅針對存在于膽管中的成蟲，而且針對通過肝實質(zhì)遷移的肝片吸蟲的未成熟幼蟲階段，作用機制尚未完全了解。然而，三氯苯達唑顯示通過轉(zhuǎn)介吸收穿透肝片吸蟲，然后抑制寄生蟲的運動性，可能與微管結(jié)構(gòu)被破壞導(dǎo)致寄生蟲的死亡有關(guān)；固定效應(yīng)與寄生蟲的靜息膜電位的變化平行，強烈抑制蛋白水解酶的釋放，這一過程對于寄生蟲的存活也是至關(guān)重要的。

4 藥代動力學(xué)研究

三氯苯噠唑在體內(nèi)代謝物主要是三氯苯噠唑亞砜和三氯苯噠唑砜。Muecke[1]等對大鼠單次口服0.5或25mg/kg體重的14C標(biāo)記的三氯苯達唑后的情況研究，得知藥物在體內(nèi)排泄快速，144h結(jié)束時，總回收率達98%，其中糞便為88%～95%，尿液為4%～10%，呼吸空氣中為0.05%以下，組織中為1%。與性別或劑量無相關(guān)性。給膽汁插管大鼠通過管飼方式給予5mg/kg的三氯苯噠唑，49h的膽汁排泄量為施用劑量的34%。使用先前研究大鼠的排泄物的色譜分析檢查降解產(chǎn)物，糞便代謝物為：原藥（6%～9%劑量），三氯苯達唑亞砜（20%～27%），三氯苯達唑砜（3%），2-苯并咪唑啉酮（8%～10%），4-羥基三苯并唑加少量未知物（12%），未知物質(zhì)（9%～13%）和無法提取（16%～32%）。尿液中的代謝物本質(zhì)上通常更具極性；2-苯并咪唑酮是唯一確定的代謝物。

Wiegand[2]等在1991年研究雌性兔子對三氯苯噠唑的口服吸收排泄情況，得知給予雌性兔單次口服3或26mg/kg的14C標(biāo)記的三氯苯達唑，8h達到血藥濃度峰值，其后水平迅速下降?？诜挽o脈內(nèi)劑量后的動力學(xué)比較表明胃腸道廣泛吸收。在低劑量后血漿中未檢測到未改變的藥物，而在較高劑量后僅觀察到少量的藥物。三氯苯達唑亞砜是前24h的主要血漿代謝物，其后的砜類似于或稍高。其他代謝物（未鑒定）開始出現(xiàn)在24h和48h之間。在7d內(nèi)，80～90%藥物被消除，其中糞便為66%～76%，尿液為7%～22%。在較高劑量時發(fā)現(xiàn)尿排泄量較大。在尿中檢測到亞砜和砜以及其他代謝物，但未發(fā)現(xiàn)三氯苯達唑。

三氯苯達唑[3]及其代謝產(chǎn)物在蠕蟲感染綿羊體內(nèi)藥動學(xué)顯示三氯苯達唑進入動物體內(nèi)，先轉(zhuǎn)化為羥基化三氯苯達唑和三氯苯達唑亞砜，三氯苯達唑亞砜又繼續(xù)轉(zhuǎn)化為羥基化亞砜和三氯苯達唑砜，三氯苯達唑砜最終代謝為羥基化砜。三氯苯噠唑進入綿羊體內(nèi)主要的代謝器官是肝臟，黃素單加氧酶（FMO）和細胞色素p450酶系統(tǒng)（CYP450）在肝臟微粒體參與TCBZ的代謝，最終以亞砜和砜兩種代謝產(chǎn)物出現(xiàn)在血漿中，而膽汁的中的藥物及代謝物成分較血漿中的成分復(fù)雜，除極微量的原形藥外，還有多種代謝產(chǎn)物，如砜和亞砜，羥基化三氯苯達唑，羥基化砜和亞砜以及羥基化代謝物形成的相應(yīng)的硫酸酯。Fairweather[4]等人認為TCBZ原藥TCBZSO是驅(qū)除肝片吸蟲的有效成分，而TCBZSO2及TCBZ的不同羥基代謝物的藥理活性很弱，甚至無藥理活性。有文獻報道，給藥后10min～12h在血漿樣品中檢測到微量三氯苯噠唑原藥，因為吸收后大部分通過動物機體的首過消除作用而被代謝轉(zhuǎn)化三氯苯達唑亞砜和三氯苯達唑砜。

5 毒理學(xué)研究

Hunterd[5]等將20只雄性和20只雌性大鼠的組喂食含有10，10，100或1000ppm三氯苯達唑（純度97%）的飲食13周。試驗動物的攝入量在雄性中為每日0.7，6.6和68.5mg/kg，雌性為每日0.8，7.9和87.3 mg/kg。同樣的方式將12只比格犬分為兩組，公狗攝入量為每日0.35，3.4或37mg/kg，母狗為每日0.35，3.5或39mg/ kg。

結(jié)果顯示三氯苯達唑藥物對大鼠和比格犬都沒有明顯的毒性臨床癥狀，視力和聽力檢查沒有治療影響。

6 殘留

三氯苯達唑[7]是一種用于食用動物的苯并咪唑類驅(qū)蟲劑，主要用于控制綿羊和牛中肝吸蟲病。通常，在僥幸季節(jié)期間或在急性或亞急性病例中以5至6周的間隔，分別以綿羊和牛分別施用10mg/kg或12mg/kg的口服劑量。

分別在兔和狗中單次口服放射性物質(zhì)標(biāo)記的三氯苯噠唑26mg/ kg和5mg/kg劑量，8h后達到峰值血漿水平。在給予劑量為40mg/kg的狗中，在24h達到峰值血漿水平并保持2～3d。在大鼠，狗，綿羊，山羊和兔中的研究表明，大多數(shù)口服的三氯苯達唑在糞便中消除，尿液排泄最少。在大鼠中，口服劑量的0.5或25mg/kg體重的三氯苯噠唑在48h內(nèi)被消除大約93%，在144h后消除了98%，其中88%至95%在糞便中，4%至10%在尿中，組織中剩余1%沒有發(fā)現(xiàn)性別或劑量相關(guān)的影響。在膽管插管的大鼠中，以5mg/kg bw口服劑量的34%在49h內(nèi)以膽汁排泄。6d后大鼠測量組織殘留量，10d后羊和山羊的組織殘留量一般在1%～2%以下。在大鼠的心臟和腦部以及羊和山羊的肝臟和甲狀腺中發(fā)現(xiàn)最高濃度。

在牛（2只動物/時間點）中進行GLP適應(yīng)性放射性殘留物消耗研究，其中經(jīng)口給藥14C-三氯苯達唑12mg/kg，通過液體閃爍計數(shù)定量組織殘留（檢測限等于2～7μg/kg）。肝，腎，肌肉和脂肪分別在給藥后28d（僅時間點）的平均組織殘留濃度分別為：462，25，39和63μg/kg。通過比較總殘留量和標(biāo)記殘基耗盡數(shù)據(jù)的結(jié)果，估計常規(guī)分析方法能夠檢測牛組織樣品中28%～51%的總殘留量（給藥后28d）。

進行了兩項非GLP兼容性牛研究，其中牛經(jīng)口給藥12mg三氯苯達唑/kg bw，組織殘留物通過HPLC進行UV檢測定量。在第1項研究中（2只動物/時間點；檢測限等于40～60μg/kg），給藥后2d（第1個時間點）的組織殘留濃度分別為：肝臟中的5870，4300，1420和2470μg/kg，腎，肌肉和脂肪。治療42d后（最后時間點），這些濃度分別耗盡到80，75，100和小于60μg/kg。在第2項研究（2動物/時間點；檢測限等于27至43μg/kg）中，給藥后第2d（第1個時間點）的組織殘留濃度分別為：3250，3050，875和1800μg/kg肝臟，腎，肌肉和脂肪。治療后28d（最后時間點）這些濃度分別減少到52，47，23和小于3μg/kg。

使用含有三氯苯達唑和左旋咪唑鹽酸鹽的組合產(chǎn)品進行非GLP符合性研究。給予相當(dāng)于12mg/kg三氯苯達唑+ 7.5mg/kg 左旋咪唑鹽酸鹽的單次口服劑量。在每次服藥后1d，21d和28d，每只宰殺4只牛。將可萃取的殘余物氧化成酮三苯唑并用UV檢測確定。肌肉，肝臟和腎臟中的平均殘留量在給藥后1d從1400，7050和5800μg/kg下降到給藥后28d的142，142和102μg/kg。脂肪中的平均殘留量為5800μg/kg，給藥后1d，并且在較晚時間點采集的所有樣品中均低于檢測限（40μg/kg）。

進行不符合GLP標(biāo)準(zhǔn)的研究，其中綿羊（未標(biāo)記的品種和性別）被給予單次口服10mg/kg體重三氯苯達唑的劑量。在每次服藥后7d，14d，21d，28d，42d和56d每只宰殺3只羊。將可萃取的殘余物氧化成酮三苯唑并用UV檢測確定。肌肉，肝臟和腎臟中的平均殘留量在給藥后7d從230，540和290μg/kg消耗至100，76和49μg/kg。給藥后28d，給藥后7d，脂肪中的平均殘留量為73μg/ kg，并且在給藥后14d低于檢測限（30μg/kg）。

7 國內(nèi)研究情況

選用該藥[8]在每年12月份對放牧羊進行一次普遍性驅(qū)蟲，可達到春季羊體內(nèi)無肝片吸蟲的最佳效果，能徹底控制春乏期羊肝片吸蟲病，降低春乏死亡，提高生產(chǎn)性能和經(jīng)濟效益，是一項簡便、實用、高效的驅(qū)蛭技術(shù)，應(yīng)大面積推廣應(yīng)用。同時該藥對人體肝片形吸蟲病也有良好的療效[9-10]，三氯苯達唑?qū)拎桶⒈竭_唑治療無效的肝片形吸蟲病具有很好的療效，同時三氯苯達唑療程短、不良反應(yīng)少。2010年，[11]中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所仲峰等人帶頭研究了羊組織中三氯苯達唑及其代謝物殘留的HPLC檢測方法，結(jié)果表明三氯苯達唑、三氯苯達唑酮濃度在20～600ng/ml范圍時與峰面積呈良好的線性關(guān)系，R2 均大于0.999 9，方法的定量限為30μg/kg。三氯苯達唑、三氯苯達唑酮在30～300μg/kg的濃度添加水平上，其回收率在60%～100%，批內(nèi)、批間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于15%。2013年[12]，為建立血漿樣品中三氯苯達唑（TCBZ）及其代謝產(chǎn)物三氯苯達唑砜（TCBZSO2）和三氯苯達唑亞砜（TCBZSO）的高效液相色譜同步檢測方法，內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院開展了研究，研究表明，三氯苯達唑、三氯苯達唑砜、三氯苯達唑亞砜以及內(nèi)標(biāo)物甲苯咪唑的保留時間分別為10.021、4.373、5.407、3.420min，分離良好，且不受干擾峰的影響；目標(biāo)物均在0.05～6.4μg/ml范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，R2分別為0.999 5、0.999 0和0.999 1；血漿樣品被測物含量的日內(nèi)和日間變異系數(shù)（CV）分別小于1%和12%；絕對回收率分別為84.96%、83.84%和86.27%，內(nèi)標(biāo)物甲苯咪唑的絕對回收率為90.16%；最低檢測限為0.05μg/ml。表明該方法適用于跟蹤檢測三氯苯達唑及其代謝產(chǎn)物在綿羊血漿中的濃度，是一種穩(wěn)定而準(zhǔn)確的檢測方法。

8 結(jié)語

三氯苯噠唑作為高效抗片蟲藥，其高效的抗蟲效果已在獸醫(yī)臨床上得到了肯定，目前該藥在FAO/WHO尚未被評估，故在美國和加拿大不可商業(yè)獲得。但國內(nèi)外已經(jīng)對三氯苯噠唑進行了深入研究，開發(fā)出了例如英國的藍色口服懸液，相信隨著研究的深入，該藥在獸醫(yī)臨床的應(yīng)用會有更加廣闊的前景。

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