唐寶佳 葉作東 蔣煌舟 陳康銀 湯一榕 福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院 （福建 寧德 352100）

血紅蛋白電泳技術(shù)在地中海貧血診斷中的價值

唐寶佳 葉作東 蔣煌舟 陳康銀 湯一榕 福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院 （福建 寧德 352100）

目的：探討血紅蛋白電泳技術(shù)在地中海貧血診斷中的價值。方法：選取2015年1月～2016年12月在寧德市醫(yī)院婦產(chǎn)科、婦?？萍皟罕？频冗M(jìn)行地中海貧血篩查患者1768例。對結(jié)果異?；颊呒翱梢傻刂泻Ｘ氀颊哌M(jìn)行地貧基因檢測并以基因檢測結(jié)果為確診標(biāo)準(zhǔn)，分析血紅蛋白電泳結(jié)果共473例。結(jié)果：血紅蛋白電泳檢測異?；颊哌_(dá)735例，占41.57%，其中HbA2<2.5%患者306例，占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者439例，占24.8%，檢出異常條帶HbH 3例、HbBart`s 5例、HbJ/K 11例；血紅蛋白電泳對α-地中海貧血篩查結(jié)果：準(zhǔn)確度83.5%、特異度86.8%、陽性預(yù)測值68.8%、陰性預(yù)測值90.0%、敏感度75.0%；對β-地中海貧血篩查結(jié)果：準(zhǔn)確度86.5%、特異度96.8%、陽性預(yù)測值96.5%、陰性預(yù)測值79.1.0%、敏感度77.2%；經(jīng)血紅蛋白電泳檢測，α-地中海貧血患者HbA、HbA2值明顯低于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；β-地中海貧血者HbA值明顯低于陰性患者，HbA2明顯高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)論：血紅蛋白電泳對地中海貧血患者診療過程中有重要的意義，但存在一定的假陽性、假陰性結(jié)果，僅作為一種篩查手段，如需確診，還需進(jìn)一步進(jìn)行基因檢測確診。

地中海貧血 血紅蛋白電泳 篩查方法

珠蛋白生成障礙性貧血又稱為地中海貧血，簡稱地貧。它是由于珠蛋白多肽鏈完全不能或合成不足所致的一種遺傳性疾病。目前尚無有效的治療辦法?；颊咧荒芤揽枯斞纳曝氀Y狀，維持生命，給家庭、社會帶來巨大的負(fù)擔(dān)。蘇珊珊等[1]報(bào)道稱對育齡期人群、孕婦等篩查地中海貧血，早期發(fā)現(xiàn)，預(yù)防為主，減少患兒的出生率尤為重要。本文主要探討有效的篩查方法，血紅蛋白電泳技術(shù)，在診斷地中海貧血中的價值。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2015年1月～2016年12月在本院體檢篩查人群1768例，經(jīng)血紅蛋白電泳技術(shù)進(jìn)行篩查，對結(jié)果異常患者及可疑地中海貧血患者進(jìn)行地貧基因檢測并診斷。因各種原因最終自愿進(jìn)行地中海貧血基因檢測患者共473例，其中男性148例，女性325，年齡（24.8±4.4）歲。EDTA-K2真空采血管采集靜脈血2支，2ml/支，分別用于篩查實(shí)驗(yàn)（血紅蛋白電泳檢測）和基因診斷實(shí)驗(yàn)（地中海貧血基因檢測）。

1.2 血紅蛋白電泳檢測技術(shù)

主要儀器試劑：法國Sebia全自動血紅蛋白電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)；配套的血紅蛋白測定試劑盒試劑（加樣梳、瓊脂糖膠片、pH8.5±0.1堿性緩沖液海綿條、溶血素、染液等）；生理鹽水。

1.2.1 標(biāo)本準(zhǔn)備：將抗凝血標(biāo)本于1500rpm離心5min，去除血漿；用10倍的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次；去除紅細(xì)胞上多余的鹽水；取10ul紅細(xì)胞置于130ul溶血素的試管內(nèi)溶血5min備用。

1.2.2 電泳操作：加樣梳每孔加入10ul溶血標(biāo)本，加濕艙放置5min；按試劑操作說明分別將瓊脂糖膠片、堿性緩沖液海綿條放入相應(yīng)位置；選擇血紅蛋白電泳程序；340V恒壓下進(jìn)行電泳自動程序。

表1. 血紅蛋白電泳篩查結(jié)果

表2. 血紅蛋白電泳在地貧篩查中的診斷價值

1.2.3 染色操作：將膠片放入染色模塊進(jìn)行自動染色

1.2.4 圖譜分析：將干燥后的膠片進(jìn)行掃描分析電泳圖譜。

1.3 基因診斷

凱普生物化學(xué)有限公司提供的α、β地中海貧血基因檢測試劑盒（PCR+導(dǎo)流雜交法）配套儀器及設(shè)備。按說明書操作。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 異常血紅蛋白帶：血紅蛋白在pH8.5±0.1堿性條件下，蛋白移動速度為HbH、HbBart`s、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E。正常血紅蛋白指標(biāo)：HbA≥95.0%、HbF≤2.0%、2.5%≤HbA2≤3.5%，無其他特殊血紅蛋白條帶。通過掃描比對發(fā)現(xiàn)含量異常條帶及異常條帶。

1.4.2 分組標(biāo)準(zhǔn)：

圖1.

成人HbA2<2.5%和（或）出現(xiàn)異常條帶HbH、HbBart`s，則初步定為疑似α-地中海貧血組；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%，則初步定為疑似β-地中海貧血組；若出現(xiàn)異常血紅蛋白條帶則診斷為異常血紅蛋白病。最后的確診，需進(jìn)行基因分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 11.5軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用u檢驗(yàn)，p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3. 確診為地中海貧血的血紅蛋白電泳結(jié)果比對

2.結(jié)果

2.1 血紅蛋白電泳檢測

（通過掃描比對發(fā)現(xiàn)含量異常條帶及異常條帶，典型案例圖1所示）：體檢篩查人群1768例，血紅蛋白電泳檢測異?；颊哌_(dá)735例，占41.57%；其中HbA2<2.5%患者306例，占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者439例，占24.8%；檢出異常條帶HbH 3例、HbBart`s 5例、HbJ/K 11例。血紅蛋白電泳檢測異常患者達(dá)735例，占41.57%。

2.2 血紅蛋白電泳結(jié)合基因診斷結(jié)果分析

將同時進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測及地中海貧血基因檢測的473例患者，按1.3.2分組標(biāo)準(zhǔn)分為：疑似α-地中海貧血組（125例）；疑似β-地中海貧血組（250例）；篩查正常組（98例）。地中海貧血基因檢測結(jié)果確診為α-地中海貧血137例，；β-地中海貧血193例；α-+β-地中海貧血7例，未檢出病例136例。α-地中海貧血、β-地中海貧血的攜帶率分別為8.14%、11.31%。血紅蛋白電泳技術(shù)的篩查結(jié)果（表1），其診斷價值（表2）。

2.3 確診為地中海貧血的血紅蛋白電泳結(jié)果比對。見表3。

3.討論

人體內(nèi)的血紅蛋白由四個亞基構(gòu)成，多肽鏈α、β、γ、δ組成了正常的人血紅蛋白。人在不同的發(fā)育階段血紅蛋白的種類是不同的。成人體內(nèi)主要血紅蛋白為兩個α亞基和兩個β亞基組成，血紅蛋白A(HbA)，α2β2，占成人血紅蛋白的98%左右；血紅蛋白A2(HbA2)，α2δ2，占成人血紅蛋白的2%左右；血紅蛋白F(HbF)，α2γ2，僅存在于胎兒及新生兒血液中，隨著年齡的增長，逐漸減少消失。當(dāng)血紅蛋白的合成數(shù)量、合成質(zhì)量異常、基因突變等，可導(dǎo)致地中海貧血疾病或?qū)е庐惓Ｑt蛋白病。

地中海貧血是我國影響最大的遺傳性疾病之一，在南方發(fā)病率高[2]。目前預(yù)防重型患兒的出生是控制該病的最有效可行方法。

血紅蛋白電泳技術(shù)是依據(jù)各種血紅蛋白均具有不同的等電點(diǎn)，在一定pH緩沖液中所帶的正、負(fù)電荷不同。經(jīng)電泳后各血紅蛋白的移動方向不同，借此方法可分離出不同的血紅蛋白成分，并對其進(jìn)行定量。利用該技術(shù)可提示異常血紅蛋白；能較準(zhǔn)確的提示α-地中海貧血、β-地中海貧血；本法檢測成本較基因檢測低，檢測速度快，是大多數(shù)患者所能接受。目前血紅蛋白電泳技術(shù)是最常用的實(shí)驗(yàn)方法。

3.1 通過研究分析，血紅蛋白電泳技術(shù)可以較好的分離各類

血紅蛋白如：HbH、HbBart`s、HbJ/K、HbA、HbF、HbS/D、HbA2/C/E等，可較好提示正常成人血紅蛋白成分，特殊人群（新生兒、幼兒、妊娠期女性）的正常組分，還能較好的提示地中海貧血，異常血紅蛋白病等。2015～2016年本地區(qū)檢測異?；颊哒?1.57%，其中HbA2<2.5%患者占17.3%；HbA2>3.5%和（或）HbF>2.0%患者占24.8%。但我們應(yīng)注意并有效區(qū)分缺鐵性貧血的假陽性結(jié)果。由于缺鐵性貧血亦是小細(xì)胞低色素性貧血，可表現(xiàn)為HbA2的檢測結(jié)果異常，HbA2在二者間的鑒別能力有所欠佳[3]，臨床上應(yīng)注意排除缺鐵貧的干擾后，對可疑地中海貧血的患者，為能進(jìn)一步確診，可行地中海貧血基因檢測。

3.2 地中海貧血基因檢測耗時長，且檢測費(fèi)用昂貴。本地地處山區(qū)，經(jīng)濟(jì)相對落后，群眾對地貧的重視程度不足，最終進(jìn)行基因檢測患者僅有473例。本研究示α-地中海貧血攜帶率為8.14%，與國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道一致[4]；β-地中海貧血的攜帶率為11.31%，較國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道高[4]，可能由于進(jìn)行基因檢測數(shù)量不夠完全，或是本地區(qū)β-地中海貧血基因攜帶率本身較高的緣故。本研究還提示血紅蛋白電泳對α-地中海貧血篩查結(jié)果：準(zhǔn)確度83.5%、特異度86.8%、、陽性預(yù)測值68.8%、陰性預(yù)測值90.0%；對β-地中海貧血篩查結(jié)果：準(zhǔn)確度86.5%、特異度96.8%、敏感度77.2%、陽性預(yù)測值96.5%、陰性預(yù)測值79.1.0%。該法對地中海貧血有較高特異性，但其中α-地中海貧血的陽性預(yù)測值較低，可能與缺鐵性貧血有關(guān)。另外還存在一定的漏診率，一些靜止型或輕型地貧患者可表現(xiàn)為正常的血紅蛋白電泳條帶。本文中血紅蛋白電泳表達(dá)正常的人群中，經(jīng)地貧基因檢測，仍存在一些陽性的基因攜帶，且攜帶率較高，α-地中海貧血檢出30例，占30.6%，β-地中海貧血檢出7例，占7.1%。

3.3 本文示：α-地中海貧血患者HbA、HbA2值明顯低于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；β-地中海貧血者HbA值明顯低于陰性患者，HbA2明顯高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）這與國內(nèi)報(bào)道大體一致[5]。

綜上所述，血紅蛋白電泳在地貧的篩查中起到非常重要的作用，篩查效果十分顯著，在楊生宙等[6]學(xué)者的報(bào)道中描述該技術(shù)操作簡便、快捷、價格低廉且臨床價值高，但在方法學(xué)上還是存在一定的假陽性、假陰性現(xiàn)象，僅可作為地中海貧血的初步篩查手段。為了減少地中海貧血的誤診率、漏診率，應(yīng)對臨床上高度可疑患者進(jìn)行基因檢測等手段確診。

[1] 蘇珊珊, 梁志, 黃健英, 等. 2000例孕婦地中海貧血基因攜帶情況的分析[J]. 廣西醫(yī)學(xué), 2015,37(4):566-567.

[2] 張俊武, 龍桂芳. 血紅蛋白與血紅蛋白[M]. 南寧:廣西科學(xué)技術(shù)出版社, 2003:156.

[3] 陳衛(wèi)東, 周宇, 王秋. 缺鐵性貧血對不同基因型α地中海貧血篩查的影響[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué), 2016,20(6):898-902.

[4] 蔡念, 李莉艷, 梁昕, 等. 廣西柳州市城鎮(zhèn)人群α和β地中海貧血發(fā)生率調(diào)查和分子鑒定[J]. 中華流行病學(xué)雜志, 2002,23(4):281-285.

[5] 楊應(yīng)松. 血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血患者的診斷價值[J]. 中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué), 2016,11(6):175-177.

[6] 楊生宙, 黃梅霞, 李祥順, 等. 兩種α地中海貧血檢測方法的應(yīng)用探討[J]. 中國熱帶醫(yī)學(xué), 2012,12(3):330-332.

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