楊惟喜

（南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，福建 南平 353000）

全自動固相萃取儀分析蔬菜中5種有機磷農(nóng)藥的方法研究

楊惟喜

（南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，福建 南平 353000）

文中建立了利用全自動固相萃取儀（Fotector 02HT）對蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留檢驗方法。蔬菜經(jīng)過制樣超聲提取后，分取，使用Auto EVA-60濃縮至3.0mL后經(jīng)過 Fotector 02HT全自動固相萃取儀凈化，自動完成 SPE 柱活化、樣品上樣、淋洗、收集等步驟，經(jīng)過濃縮后的收集液經(jīng)過氮吹濃縮、溶劑轉(zhuǎn)換、定容后，用氣相色譜檢測，外標法定量。通過全自動固相萃取的蔬菜樣品，目標組分的回收富集更加充分，經(jīng)多次試驗發(fā)現(xiàn)，蔬菜樣品的加標回收率均在84.7%～92.7%，相關(guān)系數(shù)在0.9998～0.9999，線性關(guān)系很好，RSD均小于10%。通過該方法，能夠比較快速準確測定五種有機磷農(nóng)藥殘留含量。

有機磷；氣相色譜；全自動固相萃取

1 引言

近年來我國農(nóng)業(yè)病蟲害的不斷發(fā)生，農(nóng)民以及部分蔬菜生產(chǎn)基地，為了獲得更美觀更豐產(chǎn)的蔬菜，過量使用有機磷等農(nóng)藥。根據(jù)國家質(zhì)檢總局以及各省質(zhì)監(jiān)局試驗數(shù)據(jù)通報中發(fā)現(xiàn)，農(nóng)藥殘留超標情況依然存在，尤其是三唑磷、毒死蜱農(nóng)藥殘留在蔬菜中超標的問題多次被曝光，這些農(nóng)藥會通過生物富集和食物鏈的作用，富集和傳遞，嚴重危害人類的健康[1]。蓄積的殘留農(nóng)藥甚至能通過母乳排出，影響下一代[2]。目前，針對我國農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥最高殘留限量（MRL）已經(jīng)制定了嚴格的國家標準，農(nóng)藥殘留檢驗仍然是目前各個質(zhì)檢機構(gòu)面臨的比較艱巨的檢驗任務(wù)。針對廣大質(zhì)檢工作者困惑的有機磷前處理回收率低，檢出限不夠靈敏的問題，文中采用Fotector 02HT全自動固相萃取儀，建立蔬菜中有機磷農(nóng)藥殘留全自動固相萃取前處理方法，檢出限及加標回收率令人滿意。

2 所需試劑、儀器及耗材

2.1 試劑

（1）農(nóng)藥標準品，純度≥99%；5種農(nóng)藥標準品儲備液：分別稱取適量的標準品，用丙酮溶解，配制成1000mg/L的單一農(nóng)藥標準儲備液，-18℃保存；農(nóng)藥混合標準溶液：量取適量的單一農(nóng)藥標準儲備液用丙酮配制成50.0mg/L的混合標準溶液，-18℃保存；量取適量的農(nóng)藥混合標準溶液，用丙酮配制成5.0mg/L的標準工作液。

（2）乙腈（色譜純），甲苯（色譜純），正己烷（色譜純），無水硫酸鈉（優(yōu)級純）。

2.2 儀器及耗材

瑞科全自動固相萃取系統(tǒng)(Fotector 02HT SPE)；

氣相色譜儀器（島津氣相GC2010plus）；

Auto EVA-60全自動平行濃縮儀；

C18(CNW,500mg/6mL)；

石墨化碳氨基復合柱NH2carb(CNW,500mg/6mL)。

3 實驗方法

3.1 樣品制備

稱取蓋菜、菠菜以及豆角各200g，取可食部分將其研磨粉碎。經(jīng)過研磨的樣品10.00g（精確至0.01g）加入一定的標準溶液，樣品制備及加標信息見下表1，加入40.0mL乙腈高速均質(zhì)2min。勻漿后的樣品經(jīng)4000r/min離心5min后上清液轉(zhuǎn)移到另外50.0mL的離心管中，加入5g～7g無水硫酸鈉，蓋上蓋子，劇烈震蕩1min，4000r/ min離心5min，使水相和有機相分層[3]。分取20.0mL，使用Auto EVA-60全自動平行濃縮儀將樣品濃縮至3.0mL，將所有的濃縮液轉(zhuǎn)移至全自動固相萃取儀樣品管中，上樣分析。

表1 樣品信息表（mg/kg）

3.2 固相萃取凈化條件

3.0mL樣品提取液經(jīng)過全自動固相萃取儀，用乙腈+甲苯（3+1）活化固相萃取柱[4]，攔截雜質(zhì)，洗脫收集目標組分，收集上樣流出液和淋洗液用氮氣濃縮，氮氣吹干溫度控制在50℃，濃縮至大約0.5mL后用丙酮定容到1.0mL供GC-FPD檢測。具體固相萃取凈化條件見表2。

固相萃取柱：石墨化碳 氨基復合柱NH2carb (CNW,500mg/6mL)

表2 固相萃取儀程序

3.3 氣相色譜法測定儀器條件

（1）Rtx-1701石英毛細管柱30m×250μm×0.25μm或者相當者；

（2）色譜柱程序升溫：70℃（1min）→100℃/ (30℃/min)→220℃（30℃/min，5min）→260℃（15℃/min，2min）；

（3）檢測條件：進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；GC2010Plus氫氣流量62.5ml/min，空氣流量90ml/min；進樣模式：不分流；柱流量1.5ml/min。

4 試驗結(jié)果與討論

4.1 樣品前處理的優(yōu)化

采用傳統(tǒng)的前處理方法，樣品直接用有機試劑溶解然后進樣分析的方法，樣品雜質(zhì)峰比較多，檢出限達不到檢驗要求。本方法采用全自動固相萃取的方法，根據(jù)目標組分的吸附特性，選擇合適的固相萃取小柱。通過多次試驗驗證，發(fā)現(xiàn)氨基復合柱NH2carb能有效的滿足實驗要求。試驗過程中，采用全自動固相萃取，減少了有機試劑甲苯、丙酮等對人體的傷害，并且有效提高了工作效率。

4.2 色譜條件的優(yōu)化

針對常做的五種有機磷農(nóng)藥殘留，通過優(yōu)化色譜條件，探索出合適的升溫程序，在保證目標組分有效分離的情況下，縮短了出峰時間，也可以有效提高試驗速度。

4.3 方法的標準曲線及線性范圍

敵敵畏、甲拌磷、毒死蜱、馬拉硫磷、三唑磷五種混合標準溶液系列，添加到相應(yīng)的樣品基底中，樣品經(jīng)過制樣后通過氣相色譜檢驗，保留時間定性，外標法計算定量，以質(zhì)量濃度（mg/kg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。有機磷混合標準系列溶液，線性范圍、線性回歸方程（x為質(zhì)量濃度；y為峰面積）相關(guān)系數(shù)及最低檢出限如表3所示，五種農(nóng)藥殘留在0.01mg/kg到1.00mg/kg的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系滿足標準要求，五種有機磷色譜圖如圖1。

表3 5種有機磷的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

圖1 有機磷混標色譜圖

圖1中從左到右出峰順序依次為敵敵畏、甲拌磷、毒死蜱、馬拉硫磷、三唑磷；采用當前設(shè)定的升溫程序，五種有機磷農(nóng)藥殘留分離度均大于1.5，該色譜條件下多次進樣分析，試驗穩(wěn)定，平行線非常好。

4.4 方法精密度及回收率

根據(jù)表1制備三種蔬菜加標樣品，相同試驗條件下，加標蔬菜樣品進行全自動固相萃取處理，經(jīng)過多次分析得出試驗數(shù)據(jù)，五種有機磷農(nóng)藥殘留加標數(shù)值及實際回收測的數(shù)字如下表4，計算精密度及回收率，可得出測得結(jié)果的相對標準差在0.65%～3.61%，樣品中目標組分的回收率大致在84.7%～92.7%。試驗過程中發(fā)現(xiàn)，在將乙腈甲苯濃縮至近干時，需要把握好濃縮程度，如果濃縮蒸干太久，有機磷會揮發(fā)，影響目標組分的回收率。

表4 回收率試驗及精密度測定結(jié)果

5 小結(jié)

在本實驗室條件下，優(yōu)化了蔬菜中農(nóng)藥殘留檢驗樣品前處理過程，采用全自動固相萃取裝置，克服了手動固相萃取前處理過程中存在的對流速控制不準確以及有機試劑對人體傷害等問題，同時結(jié)合筆者所在單位目前比較繁重的檢驗任務(wù)，優(yōu)化了升溫程序，有效縮短了目標組分出峰時間，雜質(zhì)干擾小，精密度及準確度均達到滿意的結(jié)果，在批量的檢驗工作中具有較高的實踐指導意義。

[1]有機磷農(nóng)藥的聯(lián)合毒性及其毒理學機理研究［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社,2002.20-35.

[2]林錚，黃金祥.全球農(nóng)藥中毒概況［J］.中國工業(yè)醫(yī)學雜志，2005,12,18（6）：376-379.

[3]GB/T 19679-2006，糧谷中475種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定 氣相色譜—質(zhì)譜法[S].

[4]張艷.農(nóng)藥殘留分析中不同提取溶劑的評價［J］.甘肅農(nóng)業(yè)科技，2006(9):28-29.

Study on Determination of 5 Organophosphorus Pesticide Residues in Vegetables by Automatic SPE

YANG Wei-Xi
(Quality Inspection Institute of Nanping,Nanping 353000,Fujian,China)

A method for the determination of organophosphorus pesticide residues in vegetables by automatic solid-phase extraction (Fotector 02HT) was established in this paper. The vegetables sample was through ultrasonic extraction,separation,the use of Auto EVA-60 to 3mL Fotector 02HT enrichment by automatic solid-phase extraction column puri fication,automated SPE activation,sample collection,leaching,condensed liquid with the nitrogen concentration,solvent conversion and constant volume. The recoveries of the spiked samples were in the range of 84.7%~92.7%,the linear relationship was good,the correlation coef ficient was 0.9998~0.9999,RSD was less than 10%,and the content of the five organophosphorus pesticides could be determined quickly and accurately.

Organic phosphorus; HPGC; Automatic solid-phase extraction

2017-02-08

楊惟喜，男，南平市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗所，所長，高級質(zhì)量工程師