汪靜文， 徐明娟

(第二軍醫(yī)大學(xué)第三附屬東方肝膽外科醫(yī)院婦產(chǎn)科， 上海 201600)

P2X7受體在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系研究

汪靜文， 徐明娟

(第二軍醫(yī)大學(xué)第三附屬東方肝膽外科醫(yī)院婦產(chǎn)科， 上海 201600)

目的：探討配體門控離子通道受體(P2X7)在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系。方法：收集2013年1月至2015年6月門診因?qū)m頸病變行宮頸活檢、LEEP手術(shù)治療的90例CIN患者(CIN組)以及73例宮頸癌患者(宮頸癌組)和112例子宮肌瘤全子宮切除術(shù)患者(正常子宮組)的宮頸組織石蠟標(biāo)本。采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)3組研究對(duì)象宮頸組織中P2X7受體表達(dá)差異，分析P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)與其分期間的關(guān)系， 探討P2X7受體的表達(dá)強(qiáng)度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間關(guān)系及其與病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果：宮頸癌組宮頸組織中P2X7受體陰性表達(dá)率90.41%最高，CIN組73.33%次之，子宮肌瘤全子宮切除術(shù)組4.46%最低，3組之間兩兩相較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)陰性率Ⅱ期高于I期(P<0.05)；隨著P2X7受體表達(dá)強(qiáng)度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高，不同強(qiáng)度之間兩兩相較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，P2X7受體陰性表達(dá)患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達(dá)組明顯高(P<0.05)。結(jié)論：P2X7受體在宮頸癌組織中陰性表達(dá)率較正常宮頸組織明顯高，其在宮頸癌組織中表達(dá)與宮頸癌病理分期、高危型HPV陽性CT值及病理相關(guān)參數(shù)存在一定關(guān)聯(lián)，對(duì)指導(dǎo)本病診治提供重要參考價(jià)值。

宮頸癌；P2X7受體；宮頸組織；免疫組織化學(xué)法

宮頸癌為臨床常見女性生殖道惡性腫瘤，以接觸性出血為主要臨床表現(xiàn)，因其可發(fā)生周圍浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，對(duì)女性身心健康造成嚴(yán)重影響，雖目前細(xì)胞學(xué)、宮頸高危人乳頭瘤病毒等對(duì)本病早期診斷提供了重要參考，在一定程度上提高了宮頸癌早期準(zhǔn)確診斷率，然而仍有20%的宮頸癌患者確診時(shí)仍處于中晚期，致使遠(yuǎn)期預(yù)后效果不佳[1,2]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)告指出通過探討宮頸癌發(fā)生及進(jìn)展過程中相關(guān)生物學(xué)機(jī)制對(duì)改善患者遠(yuǎn)期預(yù)后效果有著重要參考價(jià)值[3]。宮頸癌發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，目前對(duì)其病因尚未完全明確，然而近期一項(xiàng)文獻(xiàn)報(bào)告指出P2X7受體在婦科疾病腫瘤中發(fā)揮重要作用[4]，但一直以來對(duì)P2X7受體在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系研究較少涉及，為此筆者于本文展開臨床對(duì)照性研究，結(jié)果報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料:收集2013年1月至2015年6月我院門診收治的112例子宮肌瘤全子宮切除術(shù)患者(正常宮頸組，平均年齡47.24±9.80)、90例宮頸癌前病變(CIN)患者(CIN組，平均年齡46.83±9.92)及住院手術(shù)治療的73例宮頸癌患者(宮頸癌組，平均年齡46.53±9.42)為研究對(duì)象。其中宮頸癌組鱗癌73例，患者的分期情況為，Ia1期5例(7%)，Ia2期1例(1%),Ib1期21例(29%)，Ib2期9例(12%)，IIa1期23例(32%)，IIa2期11例(15%)，IIb期3例(4%)。CIN組患者中，CIN I 47例(52%)，CIN II-III 43例(48%)。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn): ①經(jīng)手術(shù)病理學(xué)證實(shí)為宮頸癌；②納入研究前未接受放化療及免疫治療；③子宮無先天畸形；④對(duì)本研究及目的知情并自愿簽署知情同意書，征得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①納入研究前有婦科手術(shù)史；②合并凝血功能障礙；③合并嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙；④對(duì)本研究依從性不高。子宮肌瘤全子宮切除術(shù)組年齡30～66(47.24±9.80)歲，體重48～72(63.87±7.03)kg；CIN組年齡31～61(46.83±9.92)歲，體重49～72(64.01±7.51)kg；宮頸癌組年齡32～59(46.53±9.42)歲，體重49～73(63.91±7.11)kg。3組研究對(duì)象上述基線資料相較無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.3 研究方法①試劑：P2X7抗體(美國Santa Cruz)，稀釋比1：200，二抗GTVisionIII抗鼠/兔通用型免疫組化學(xué)試劑盒及DBA顯色劑(K5007)購自丹麥Dako公司。②檢測(cè)方法：免疫組織化學(xué)法，采集3組研究對(duì)象宮頸組織并制成標(biāo)本，將石蠟切片置于烘箱中62℃烤1～2h，常規(guī)脫蠟、水化；用PH=6.0的0.01mol/L檸檬酸鈉抗原修復(fù)液修復(fù)；3%H2O2抑制內(nèi)源性過氧化物酶室溫孵育；血清封閉后孵育一抗、二抗， DAB顯色3～5min；蘇木素復(fù)染45s，流水沖洗5min；鹽酸酒精分化1s,流水沖洗15min；梯度酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片；鏡下(購自上海精密儀器有限公司的Stemi508OLIPICS電子顯微鏡)觀察，細(xì)胞核呈藍(lán)色，陽性產(chǎn)物呈棕黃色或黃色。③結(jié)果判斷：陽性顯色為棕黃色顆粒，可依據(jù)切片中陽性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分級(jí)評(píng)分：陽性細(xì)胞的百分比≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。著色強(qiáng)度：0分為不著色，1分淺黃色，2分黃色，3分棕褐色。取上述兩項(xiàng)分值的乘積作為總積分：0分為陰性(-)，1-4分為弱陽性(+)，6-8分為陽性(++)，9-12分為強(qiáng)陽性(+++)。其中陽性表達(dá)率=(陽性+強(qiáng)陽性)/總例數(shù)×100%。

1.4 觀察指標(biāo):①3組研究對(duì)象宮頸組織中P2X7受體表達(dá)差異。②P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)與宮頸癌分期間的關(guān)系，宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期：Ⅰa 鏡下浸潤(rùn)癌。所有肉眼可見的病灶，包括表淺浸潤(rùn)，均為ⅠB；Ⅰa1 間質(zhì)浸潤(rùn)深度<3 mm，水平擴(kuò)散≤7 mm；Ⅰa2 間質(zhì)浸潤(rùn)深度3～5 mm，水平擴(kuò)散≤7 mm；Ⅰb 肉眼可見癌灶局限于宮頸，或者鏡下病灶>Ⅰa2；Ⅰb1 肉眼可見癌灶最大徑線≤4 cm；Ⅰb2 肉眼可見癌灶最大徑線>4 cm；Ⅱ期 腫瘤超越子宮，但未達(dá)骨盆壁或未達(dá)陰道下 1/3；Ⅱa 無宮旁浸潤(rùn)；Ⅱb 有宮旁浸潤(rùn)。③P2X7受體的表達(dá)強(qiáng)度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關(guān)系。④P2X7受體與宮頸癌病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 3組研究對(duì)象宮頸組織中P2X7受體表達(dá)差異:宮頸癌組宮頸組織中P2X7受體陰性表達(dá)率最高，CIN組次之，子宮肌瘤全子宮切除術(shù)組最低，3組之間兩兩相較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組研究對(duì)象宮頸組織中P2X7受體表達(dá)差異n(%)

表2 P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)與宮頸癌分期間的關(guān)系n(%)

2.2 P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)與宮頸癌分期間的關(guān)系：P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)陰性率Ⅱ期高于Ⅰ期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3 P2X7受體表達(dá)強(qiáng)度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關(guān)系：隨著P2X7受體表達(dá)強(qiáng)度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高，不同強(qiáng)度之間兩兩相較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 P2X7受體表達(dá)強(qiáng)度與宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值間的關(guān)系

2.4 P2X7受體與宮頸癌病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系:P2X7受體陰性表達(dá)患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達(dá)組明顯高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2組其它病理參數(shù)相較無明顯差異(P<0.05)，經(jīng)見表4。

表4 P2X7受體與宮頸癌病理相關(guān)參數(shù)的關(guān)系n(%)

3 討 論

宮頸癌是目前國內(nèi)發(fā)病率較高的惡性腫瘤，因本病早期易發(fā)生髂內(nèi)淋巴結(jié)、閉孔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及宮旁組織浸潤(rùn)程度較高，目前臨床對(duì)其治療尚缺乏行之有效的治療方法，患者遠(yuǎn)期生存指標(biāo)較差，此外患者無瘤生存期和疾病無進(jìn)展生存期較短，一直以來臨床對(duì)宮頸癌患者遠(yuǎn)期預(yù)后效果尚缺乏靈敏指標(biāo)[5]。近年來細(xì)胞學(xué)檢查及宮頸HPV檢查在提高宮頸癌早期診斷水平中有著重要臨床意義，其中P2X7受體在宮頸癌中的作用備受關(guān)注[6]。

早期相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)告指出P2X7受體參與細(xì)胞因子釋放、骨重塑、炎癥反應(yīng)及神經(jīng)源性疼痛及婦科腫瘤等疾病中，因而臨床可考慮對(duì)宮頸癌患者組織中P2X7受體表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析可能對(duì)疾病診治有一定指導(dǎo)意義[7]。本文在既往研究基礎(chǔ)上另展開臨床對(duì)照性研究，研究結(jié)果顯示宮頸癌患者宮頸組織中P2X7受體陰性表達(dá)率90.41%最高，宮頸癌前病變患者73.33%次之，子宮肌瘤全子宮切除術(shù)組4.46%最低，各組之間相較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且P2X7受體在宮頸癌組織中表達(dá)陰性率隨著宮頸癌分期增加而升高，同時(shí)隨著P2X7受體表達(dá)強(qiáng)度增加，宮頸病變患者高危型HPV陽性CT值隨之升高， 此外P2X7受體陰性表達(dá)患者宮頸癌病灶大小≥4cm所占百分比較陽性表達(dá)組明顯高，初步證實(shí)了P2X7受體在宮頸癌患者宮頸組織中陽性表達(dá)率明顯降低，并且P2X7受體高陰性表達(dá)在宮頸癌患者分期及宮頸病變患者高危型HPV陽性鑒別診斷中有明顯應(yīng)用價(jià)值。P2X7受體屬于胞外核苷酸激活的嘌呤類受體P2受體中的配體門控的離子通道受體，ATP為其天然配體，受適當(dāng)濃度配體刺激后，P2X7受體調(diào)控非選擇鈣離子通道，當(dāng)ATP濃度升高時(shí)，各種陽離子均可通過分子量較大的有機(jī)陽離子，引起細(xì)胞膜通透性增高，使細(xì)胞外本不該通過的物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，最終導(dǎo)致細(xì)胞溶胞死亡[8,9]。研究表明P2X7受體在正常宮頸細(xì)胞中表達(dá)比癌細(xì)胞表達(dá)水平高，在正常子宮，多數(shù)P2X7受體存在外宮頸上皮組織[10,11]；此外P2X7受體與配體結(jié)合后可通過膜孔形成、增強(qiáng)Ca離子內(nèi)流以及依賴Ca離子活化的線粒體途徑等機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。早期一項(xiàng)研究結(jié)果表明，P2X7受體特效激動(dòng)劑BzATP可誘導(dǎo)正常及癌變宮頸細(xì)胞凋亡，并且這種作用在正常細(xì)胞中明顯強(qiáng)于宮頸癌細(xì)胞[12]；子宮癌細(xì)胞可能通過下調(diào)P2X7的mRNA繼而逃避生長(zhǎng)控制，國外一學(xué)者研究結(jié)果表明，在腫瘤形成早期會(huì)出現(xiàn)一定的P2X7受體缺失[13]，此外臨床標(biāo)本檢查表明P2X7受體的mRNA、蛋白表達(dá)水平在非典型增生、子宮內(nèi)膜癌中低于正常組織[14]。

綜上，P2X7受體在宮頸癌患者癌變組織中的表達(dá)較正常宮頸組織存在明顯差異，本次研究初步證實(shí)了宮頸癌發(fā)病機(jī)理可能與P2X7受體表達(dá)水平下降有關(guān)，為宮頸癌的診治療提供新的研究方向和研究基礎(chǔ)。

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1006-6233(2017)05-0806-04

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10.3969/j.issn.1006-6233.2017.05.030