微量殘留白血病檢測方法及對急性白血病的臨床意義

郝夢哲+夏薇

【摘要】急性白血病患者經化療后達到完全緩解可達80%，但5年存活率僅30～40%[1]，究其根源是完全緩解后，體內仍含少量白血病細胞。因此，對于微量殘留白血病（MRD）的檢測可更早預測急性白血病的復發(fā)。本文對MRD檢測方法以及對急性白血病的臨床意義進行綜述。

【關鍵詞】微量殘留白血?。粰z測；急性白血病

【中圖分類號】R733.7 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095-6681.2016.29.0.01

檢測方法：MRD常用的監(jiān)測方法分以下幾類：細胞遺傳學方法、分子生物學方法和免疫學方法。但這些方法都有一定局限性不能理想監(jiān)測MDR。

1 細胞遺傳學方法

1.1 染色體核型分析

多數白血病細胞伴隨染色體核型的異常，如在AML中出現(xiàn)異常分裂象或數量結構的改變。用此法檢測MRD的個體差異大且敏感性差，近年此法研究少在此不多敘述。

1.2 熒光原位雜交技術

熒光原位雜交技術（FISH）是利用熒光標記的特異染色體為探針檢測白血病細胞中染色體的異常。改善了傳統(tǒng)染色體核型分析的缺點，具有高敏感度且操作簡單等優(yōu)點，可短時間分析較多的骨髓、外周血或組織細胞，檢出難以識別的基因異常及斷裂點的異常。由于其檢測的靶分子為基因，可避免由于表面抗原的改變造成的假陰性等問題。

熒光原位雜交技術的臨床意義：在中國APL在AML中占有很大比例，90%以上的APL具有特征性融合基因PML-RARα，F(xiàn)ISH為檢測APL-MRD最常用的方法。黃正剛等[2]用FISH檢測了30例已達完全緩解并經三輪鞏固治療后的APL患者，發(fā)現(xiàn)融合基因PML-RARα持續(xù)陽性的有3例并最終復發(fā)。張濟等[3]用FISH檢測34例完全緩解的APL患者，9例PML-RARα融合基因陽性的患者中3例檢測結果為陰性；經鞏固維持治療后，4例PML-RARα融合基因陽性的患者中2例檢測結果為陰性。所以，F(xiàn)ISH檢測APL-MRD的敏感性有待提高。

2 免疫學方法

2.1 多參數流式細胞儀檢測（MFC）

因成本較低準確度敏感度較高，為目前應用最廣的方法，它是依據識別在白血病細胞表面聯(lián)合表達的特異白血病相關免疫表型（LAIPs）。能快速對單個細胞進行多參數分析，根據正常細胞與白血病細胞表達免疫表型的不同，可在104個細胞中檢測出一個白血病細胞。但在化療過程中，免疫表型可發(fā)生改變出現(xiàn)假陰性，要提高檢出率可結合初診LAIPs再輔以檢測其他抗體組合，也可同時檢測外周血和骨髓來提高檢出率。但目前并沒有標準化的抗體組合，且個體間差異也較大。

2.2 多參數流式細胞儀監(jiān)測MRD的臨床應用

MRD復發(fā)的患者檢出LAIPs往往與患者初發(fā)時LAIPs相同，因此殘留的白血病細胞會保持初期白血病細胞異常抗原的特征，可用MFC針對性的檢測MRD患者初期抗原的免疫表型。研究表明，用MFC檢測與AML密切相關的細胞特異性LAIPs信號，檢出LAIPs陽性細胞的患者有60%在造血干細胞移植后復發(fā)。而檢測LAIPs陰性的患者復發(fā)率極低。利用MFC對白血病細胞LAIPs的分析對AML患者預后有提示作用。

3 分子遺傳學方法

3.1 實時熒光定量PCR（RQ-PCR）

RQ-PCR在普通PCR中加入與PCR產物結合的熒光探針或染料，可以在每一次循環(huán)中通過熒光強度的變化達到定量檢測?？沙掷m(xù)性檢測白血病細胞的異常融合基因，突變基因等，動態(tài)觀察患者體內融合基因表達水平變化，靈敏度可達106。用此法檢測MRD比細胞遺傳學法早數月。也可避開由于患者免疫表型改變造成假陰性。但其成本較高，普及難度大。

3.2 實時熒光定量PCR監(jiān)測MRD的臨床意義

高海濤等[4]持續(xù)監(jiān)測20位AML患者治療后的ETO融合基因表達水平，其中15位患者的表達水平直至觀測結束均<0.001%，13位患者持續(xù)陰性，均未復發(fā)；其余5位在檢測期間表達陽性且持續(xù)升高，最終復發(fā)。但僅35%的AML患者有特異性的異?；?，限制了它的應用。

4 展 望

MRD因其白血病細胞總數下降，用一般形態(tài)學方法難以檢出，成為AML復發(fā)的根源。用現(xiàn)有技術檢測MRD相關標志物有助于監(jiān)測AML患者化療后完全緩解或造血干細胞移植的預后效果，提高生存率。MFC成本低，但LAIPs易變，檢出率不理想，而PCR與FISH雖不存在免疫表型改變等問題，但其敏感性和特異性有待提高，且成本較大難以普及。綜上所述，目前檢測MRD的方法各有利弊，可個體化要求監(jiān)測，多種方法聯(lián)合從而實現(xiàn)急性白血病患者的預后效果和復發(fā)的早期診斷。

參考文獻

[1] Jie Jin，et al.Homoharringtonine-based induction regimens for patients with de-novo acute myeloid leukaemia：a multicentre，open-label，randomised，controlled phase 3 trial.Lancet Oncol，2013，14：599-608.

[2] 黃正剛，等.熒光原位雜交技術檢測PML/RARa融合基因在兒童APL微小殘留病中的應用[J].實用臨床醫(yī)學，2015，16（11）：65-68.

[3] 張 濟，等.應用RT-PCR和熒光原位雜交監(jiān)測急性早幼粒細胞白血病微小殘留白血病[J].中國實驗診斷學，2012，16（3）：423-425.

[4] 高海濤，等.微小殘留病監(jiān)測在急性髓系白血病中的預后意義[J].醫(yī)藥論壇雜志，2016，（8）：1-3.

本文編輯：王 琦