余 婭，王虹又，易宗平，陳 萍

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科，重慶 400016)

帕瑞昔布對(duì)大鼠心梗后心室重構(gòu)的改善作用及對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的影響

余 婭，王虹又，易宗平，陳 萍

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院麻醉科，重慶 400016)

目的 探討不同劑量的帕瑞昔布對(duì)大鼠心梗后心室重構(gòu)的改善作用及對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的影響。方法 40只♂ SD大鼠隨機(jī)分為5組(n=8)：假手術(shù)組(S組)、心室重構(gòu)模型組(R組)、帕瑞昔布低劑量組(P1組)、中劑量組(P2組)、高劑量組(P3組)。R組、P1組、P2組、P3組大鼠采用開胸結(jié)扎心臟左冠狀動(dòng)脈前降支的方法制備急性心肌梗死模型。建模24 h后連續(xù)2周每天分別給予P1組、P2組、P3組大鼠腹腔注射4、8、12 mg·kg-1的帕瑞昔布，余2組給予等量的生理鹽水。于建模處置4周時(shí)右側(cè)頸動(dòng)脈插管的方法測(cè)定大鼠血流動(dòng)力學(xué)變化；處死大鼠，取心臟測(cè)定左室肥厚指數(shù)；HE染色、Masson染色觀察梗死周邊區(qū)心肌組織病理變化及間質(zhì)膠原纖維增生情況；TUNEL染色光鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡情況；RT-PCR法檢測(cè)心肌梗死周邊區(qū)ANP mRNA、BNP mRNA含量的變化； Western blot法測(cè)定心肌PI3K、Akt、p-Akt及caspase-3的蛋白表達(dá)。結(jié)果 與S組比較，心室重構(gòu)模型組血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)明顯變化，左室肥厚指數(shù)、ANP mRNA、BNP mRNA及caspase-3的蛋白表達(dá)明顯升高，PI3K、p-Akt的蛋白表達(dá)明顯降低(P<0.05)。與R組比較，中、高劑量帕瑞昔布可改善大鼠血流動(dòng)力學(xué)，降低左室肥厚指數(shù)(P<0.05)。低、中、高劑量帕瑞昔布組均可降低ANP mRNA、BNP mRNA及caspase-3的蛋白表達(dá)，提高PI3K、p-Akt的蛋白表達(dá)(P<0.05)。結(jié)論 中、高劑量帕瑞昔布能延緩心肌梗死大鼠的左心室重構(gòu)過程，改善心臟功能，這種保護(hù)作用可能與PI3K/Akt信號(hào)通路的激活有關(guān)。

心肌梗死；心室重構(gòu)；環(huán)氧化酶2抑制劑；帕瑞昔布；凋亡；PI3K/Akt信號(hào)通路

心肌梗死(myocardial infarction，MI)后心室重構(gòu)是MI后心肌實(shí)質(zhì)和間質(zhì)發(fā)生的一系列病理變化，引起心肌肥厚、擴(kuò)張，心功能進(jìn)行性惡化，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。交感神經(jīng)的過度激活以及前列腺素(prostaglandin，PG)為主的炎癥介質(zhì)釋放在心室重構(gòu)中發(fā)揮著舉足輕重的作用[1-2]。環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)是合成前列腺素的關(guān)鍵酶。既往部分研究[3-5]認(rèn)為抑制COX-2的活性，降低前列腺素的表達(dá)，可延緩心室重構(gòu)，對(duì)心臟具有保護(hù)作用。然而，也有觀點(diǎn)[6-7]認(rèn)為抑制COX-2的活性，降低前列腺素的合成，可加重心臟重構(gòu)，對(duì)心臟功能有一定的損害作用。Timmers等[8]報(bào)道了長(zhǎng)期使用塞來昔布可增加豬心肌梗死后的死亡率，降低心臟功能，加重心室重構(gòu)。以上這些相互矛盾的研究結(jié)果使COX-2抑制劑對(duì)心臟的作用難以被明確解釋，增加了臨床使用COX-2抑制劑治療心臟疾病的難度。因此，本實(shí)驗(yàn)探索不同劑量的COX-2高選擇性抑制劑帕瑞昔布對(duì)心肌梗死后心室重構(gòu)的影響。磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/Akt信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)最重要的生存通路，可調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡過程，能夠明顯抑制細(xì)胞凋亡[9]。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)途徑對(duì)缺血缺氧誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡可產(chǎn)生心肌保護(hù)作用[10-11]。因此，本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立急性心肌梗死模型，觀察不同劑量的帕瑞昔布對(duì)心梗后心室重構(gòu)的影響及PI3K/Akt信號(hào)通路在其中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 健康SPF級(jí)成年♂ SD大鼠40只，體質(zhì)量230～250 g,由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證: SCXK(渝2012-0001)。采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為5組(n=8)：假手術(shù)組(S組)、心室重構(gòu)模型組(R組)、帕瑞昔布低劑量組(P1組)、中劑量組(P2組)、高劑量組(P3組)。

1.2 藥物與儀器 注射用帕瑞昔布鈉(輝瑞制藥有限公司,批號(hào)：L61449)；TUNEL試劑盒(瑞士Roche公司)；Masson試劑盒(北京雷根生物技術(shù)有限公司)；β-actin抗體(美國(guó)Proteintech公司)；PI3K、Akt、p-Akt、caspase-3抗體(沈陽萬類生物科技有限公司)；小動(dòng)物呼吸機(jī)(浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠)；RT-PCR反應(yīng)儀(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)中國(guó)分公司)；電泳儀、凝膠成像儀(美國(guó)BIO-RAD公司)。

1.3 動(dòng)物模型制備及分組處理 參照文獻(xiàn)[12]的方法，建立急性心肌梗死模型。大鼠禁食12 h后，質(zhì)量濃度為35 g·L-1的水合氯醛(10 mL·kg-1)腹腔注射麻醉。氣管插管后連接小動(dòng)物呼吸機(jī)行正壓通氣，監(jiān)測(cè)ECG。常規(guī)備皮消毒后，左外側(cè)切口經(jīng)第3肋間隙進(jìn)入胸腔，暴露心臟，在左心耳下緣與肺動(dòng)脈圓錐交界下方3～4 mm處結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支。觀察到左室前壁顏色變白且心電圖ST-T弓背向上抬，心肌梗死模型建立成功。嚴(yán)格止血后，逐層關(guān)閉胸腔并保持負(fù)壓，待大鼠自主呼吸恢復(fù)后拔出氣管導(dǎo)管。S組前降支只穿縫線，不結(jié)扎。P1組、P2組、P3組大鼠于手術(shù)后24 h開始分別給予4、8、12 mg·kg-1的帕瑞昔布腹腔注射，余2組給予等量的生理鹽水，共2周。

1.4 觀測(cè)指標(biāo)

1.4.1 血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè) 建模4周后，大鼠稱重并麻醉，仰臥固定，暴露右頸總動(dòng)脈，將充滿濃度為50 kU·L-1肝素生理鹽水的心導(dǎo)管經(jīng)右頸總動(dòng)脈插入左心室，連接壓力換能器及BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，待穩(wěn)定后監(jiān)測(cè)左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左心室收縮壓最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室收縮壓最大下降速率(-dp/dtmax)，重復(fù)3次，記錄平均值。

1.4.2 左心室肥厚指數(shù)測(cè)定 血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)束后，處死大鼠，取心臟，減去左右心耳及大血管，用4℃ PBS磷酸緩沖液沖洗干凈，濾紙吸干后置于電子天平上稱重并記錄。再沿室間隔邊沿剪去左右心房及右心室。將取下的左心室及室間隔置于電子天平上稱重并記錄。分別計(jì)算心臟重量/體質(zhì)量(HW/BW)、(左心室+室間隔質(zhì)量)/體質(zhì)量(LV+S)/BW、(左心室+室間隔質(zhì)量)/心臟重量(LV+S)/HW。

1.4.3 大鼠心肌組織HE染色、Masson染色、TUNEL染色 心臟左室常規(guī)清洗后，經(jīng)甲醛固定制成石蠟切片(4 μm)。HE染色，高倍鏡下觀察心肌梗死周邊區(qū)心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。Masson染色，高倍鏡下觀察心肌梗死周邊區(qū)纖維增生情況，每張玻片隨機(jī)取4個(gè)視野，應(yīng)用IPP6.0圖像分析軟件，心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)=心肌膠原面積/所測(cè)視野面積×100%。TUNEL染色，高倍顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞凋亡情況，每張玻片任選4個(gè)視野，應(yīng)用IPP6.0圖像分析軟件，計(jì)算心肌細(xì)胞凋亡率/%=TUNEL陽性細(xì)胞核數(shù)/細(xì)胞核總數(shù)×100%。

1.4.4 RT-PCR法測(cè)定心肌ANP mRNA及BNP mRNA的表達(dá) 將左室梗死與非梗死交界區(qū)的心肌組織取下，置于液氮中保存。取適量組織用TRIzol法提取總RNA，參照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以β-actin為內(nèi)參。β-actin上游引物：5′-TTGGCATAGAGGTCTTTA-3′，下游引物：5′-AGATGACCCAGATCATGTTTGA-3′；ANP上游引物：5′-GCTCCTTCTCCATCACCAAG-3′，下游引物：5′-AGCCCTCAGTTTGCTTTTCA-3′；BNP上游引物：5′-TTCTGCTCCTGCTTTTCCTT-3′，下游引物: 5′-CGATCCGGTCTATCTTCTGC-3′。擴(kuò)增條件為94℃ 5 min、94℃ 15 s、58℃ 30 s、72℃ 45 s，循環(huán)35次，72℃ 7 min,4℃ 5 min。將擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，Quantity one軟件分析目的基因與內(nèi)參基因吸光度。

1.4.5 Western blot法測(cè)定心肌PI3K、Akt、p-Akt及caspase-3蛋白表達(dá) 全蛋白提取法提取心肌組織蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，各組蛋白質(zhì)均50 μg上樣，行SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，電轉(zhuǎn)膜后分別加入稀釋的PI3K抗體(1 ∶800)、Akt抗體(1 ∶700)、p-Akt抗體(1 ∶600)、caspase-3抗體(1 ∶600)、β-actin抗體(1 ∶4 000),4℃過夜，d 2用TBST液漂洗膜，并用1 ∶4 000的熒光二抗37℃孵育1h，結(jié)果應(yīng)用Fusion生物凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描定量，計(jì)算各樣品的相對(duì)密度值作為各蛋白質(zhì)的相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠血流動(dòng)力學(xué)的改善作用如Tab1所示，帕瑞昔布劑量在8～12 mg·kg-1范圍內(nèi)能明顯提高LVSP、+dp/dtmax，降低LVEDP、-dp/dtmax，且隨著劑量的增加，改善作用越明顯(P<0.05)。帕瑞昔布劑量低于8 mg·kg-1時(shí)對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠的血流動(dòng)力學(xué)無明顯改善作用(P>0.05)。

2.2 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠左心室肥厚指數(shù)的影響 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠左心室肥厚指數(shù)的改善作用如Tab 2所示，帕瑞昔布劑量在8～12 mg·kg-1范圍內(nèi)能明顯增加體重，降低HW/BW、(LV+S)/BW、(LV+S)/HW，且隨著劑量的增加，改善作用越明顯(P<0.05)。帕瑞昔布劑量低于8 mg·kg-1時(shí)對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠的左心室肥厚指數(shù)無明顯改善作用(P>0.05)。

Tab 1 Hemodynamic parameters in five ±s,n=8)

*P<0.05vsgroup S;#P<0.05vsgroup R;ΔP<0.05vsgroup P2

Tab 2 Left ventricular mass index in five ±s,n=8)

*P<0.05vsgroup S;#P<0.05vsgroup R;ΔP<0.05vsgroup P2

Fig 1 Pathomorphological variance of myocardial tissues(HE staining,×400)

A:Group S; B:Group R; C:Group P1; D:Group P2; E:Group P3

Fig 2 Interstitial fibrosis of myocardial tissues(Masson staining,×400)

A:Group S;B:Group R;C:Group P1;D:Group P2;E:Group P3

Fig 3 Cardiac myocyte apoptosis of myocardial tissues(TUNEL staining,×400)

A:Group S;B:Group R;C:Group P1;D:Group P2; E:Group P3

2.3 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠心肌組織的形態(tài)學(xué)、纖維化及細(xì)胞凋亡的影響 光鏡下觀察Masson染色顯示心肌細(xì)胞呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色。假手術(shù)組心肌細(xì)胞排列較均勻，無斷裂，示正常心肌細(xì)胞形態(tài)，可見少量膠原纖維及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；心室重構(gòu)模型組心肌細(xì)胞腫脹增粗最明顯，形態(tài)極不規(guī)則，排列紊亂，細(xì)胞間隙可見大量膠原纖維增生，呈網(wǎng)狀分布，并且炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，與假手術(shù)組比較，膠原容積分?jǐn)?shù)CVF明顯升高(P<0.05)。經(jīng)帕瑞昔布治療后細(xì)胞肥大、排列紊亂及心肌間質(zhì)纖維化程度有明顯減輕，膠原容積分?jǐn)?shù)CVF較心室重構(gòu)組明顯降低，且隨著劑量的增加，改善效果越明顯(P<0.05，F(xiàn)ig 1、2，Tab 3)。

TUNEL法檢測(cè)5組梗死周邊區(qū)心肌細(xì)胞凋亡情況。細(xì)胞核中有棕黃色顆粒者為凋亡陽性細(xì)胞。與假手術(shù)組比較，心室重構(gòu)模型組在梗死周邊區(qū)有大量的心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡，凋亡指數(shù)AI明顯增加(P<0.05)；與心室重構(gòu)模型組比較，經(jīng)帕瑞昔布治療后梗死周邊區(qū)心肌細(xì)胞凋亡發(fā)生明顯減少，凋亡指數(shù)AI降低(P<0.05)，且隨著劑量的增加，下降程度越明顯(P<0.05，F(xiàn)ig 3，Tab 3)。

Tab 3 Comparison of myocardial collagen volume fraction(CVF) and myocardial apoptosis index(AI) in five ±s, n=8)

*P<0.05vsgroup S;#P<0.05vsgroup R;▲P<0.05vsgroup P1;ΔP<0.05vsgroup P2

2.4 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠心肌梗死周邊區(qū)ANP mRNA、BNP mRNA表達(dá)的影響 與假手術(shù)組比較，心室重構(gòu)模型組的心肌肥厚標(biāo)志基因ANP mRNA、BNP mRNA表達(dá)增加(P<0.05)。與心室重構(gòu)組比較，帕瑞昔布各劑量組心肌肥厚標(biāo)志基因ANP mRNA、BNP mRNA的表達(dá)降低，且隨著劑量的增加，下降程度越明顯(P<0.05，F(xiàn)ig 4，Tab 4)。

Fig 4 Expressions of ANP mRNA and BNP mRNA in five groups Tab 4 Expressions of ANP mRNA and BNP

GroupANPmRNABNPmRNAGroupS1.59±0.062.27±0.03GroupR3.04±0.10*3.81±0.11*GroupP12.16±0.67#2.88±0.07#GroupP21.72±0.12#▲2.59±0.02#▲GroupP31.57±0.07#▲△2.48±0.05#▲△

*P<0.05vsgroup S;#P<0.05vsgroup R;▲P<0.05vsgroup P1;△P<0.05vsgroup P2

2.5 帕瑞昔布對(duì)心室重構(gòu)模型大鼠心肌梗死周邊區(qū)PI3K、Akt、p-Akt及caspase-3蛋白表達(dá)的影響 各組Akt蛋白表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。與假手術(shù)組比較，心室重構(gòu)模型組的PI3K、p-Akt的蛋白表達(dá)降低，caspase-3的蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；與心室重構(gòu)組比較，帕瑞昔布各劑量組PI3K、p-Akt的蛋白表達(dá)升高，caspase-3的蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，其中以高劑量帕瑞昔布組蛋白表達(dá)改變最明顯，中劑量帕瑞昔布組次之(P<0.05，F(xiàn)ig 5，Tab 5)。

Fig 5 Expressions of PI3K, Akt, p-Akt and caspase-3 in five groups Tab 5 Expressions of PI3K, Akt, p-Akt and

GroupPI3K/β-actinp-Akt/Aktcaspase-3/β-actinGroupS4.22±0.060.77±0.011.88±0.02GroupR2.23±0.07*0.62±0.01*2.90±0.04*GroupP13.03±0.09#0.65±0.01#1.93±0.01#GroupP23.26±0.09#▲0.71±0.01#▲1.12±0.03#▲GroupP33.61±0.08#▲△0.77±0.03#▲△0.79±0.04#▲△

*P<0.05vsgroup S;#P<0.05vsgroup R;▲P<0.05vsgroup P1;△P<0.05vsgroup P2

3 討論

隨著人們生活方式的改變及人口老齡化,心肌梗死的發(fā)病率逐年提高[13]。心室重構(gòu)是心肌梗死發(fā)展為心衰過程中最重要的病理過程，嚴(yán)重影響心肌梗死患者近晚期預(yù)后，因此如何及時(shí)有效的預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)過程是改善心肌梗死轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵所在。本實(shí)驗(yàn)采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支后飼養(yǎng)28 d的方法建立心室重構(gòu)模型，于結(jié)扎成功后24 h開始腹腔注射低(4 mg·kg-1)、中(8 mg·kg-1)、高(12 mg·kg-1)劑量的帕瑞昔布(相當(dāng)于正常成人用藥 40～80 mg，即臨床等效劑量)，觀察帕瑞昔布能否改善心肌梗死后心室重構(gòu)，以及是否具有劑量依賴關(guān)系。結(jié)果顯示，低劑量帕瑞昔布(4 mg·kg-1)對(duì)心肌梗死后心臟的改善作用僅限于微觀病理形態(tài)學(xué)的改變，可抑制心肌細(xì)胞肥大及間質(zhì)膠原纖維的增生，對(duì)心臟功能及左室肥厚的改善沒有明顯作用。當(dāng)帕瑞昔布達(dá)到中劑量(8 mg·kg-1)時(shí)對(duì)心室舒縮功能(LVSP、+dp/dtmax、LVEDP、-dp/dtmax)及左室肥厚均有不同程度的改善，并隨著藥物劑量的增大，對(duì)心室舒縮功能及左室肥厚的改善效果更明顯。而Straino等[14]的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)短期(5 d)應(yīng)用超低劑量的帕瑞昔布(0.7 mg·kg-1)可提高大鼠心臟功能。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與此具有明顯差異，可能與其研究中只探討了帕瑞昔布的短期效用，未探究長(zhǎng)期作用有關(guān)。

心鈉肽(atrial natriuretic peptide, ANP)、腦鈉肽(brain natriuretic peptide，BNP)是一類重要的心臟內(nèi)分泌激素，正常生理狀態(tài)下少量分泌。急性心肌梗死后由于心室的收縮和舒張功能急劇減退，容量和壓力負(fù)荷相對(duì)過重，導(dǎo)致心肌細(xì)胞尤其是梗死區(qū)與非梗死區(qū)交界處受到的牽拉刺激最大，產(chǎn)生并釋放的ANP、BNP增多。因此，梗死交界區(qū)ANP、BNP的含量可反映梗死局部張力的變化，是心肌細(xì)胞病理性肥大的可靠指標(biāo)，對(duì)評(píng)價(jià)心室重構(gòu)有重要指導(dǎo)意義[15]。本研究結(jié)果顯示，心室重構(gòu)組ANP mRNA、BNP mRNA的含量明顯增高，帕瑞昔布可明顯降低ANP mRNA、BNP mRNA的表達(dá)，且隨著劑量的增加，降低程度越明顯，這在我們前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步表明，帕瑞昔布可抑制心肌梗死后心肌細(xì)胞肥大，延緩心室重構(gòu)，且具有劑量依賴關(guān)系。

心肌梗死后由于缺血缺氧，心肌細(xì)胞首先啟動(dòng)凋亡相關(guān)機(jī)制，形成凋亡復(fù)合體，通過多種蛋白酶的活化誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。由于心肌細(xì)胞再生能力有限，加之平滑肌細(xì)胞異常增生，極大的損害了心臟正常結(jié)構(gòu)及功能。探究啟動(dòng)細(xì)胞抗凋亡作用的機(jī)制，可為減少缺血缺氧引起的心臟損傷提供有效的途徑。PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑是促使抗細(xì)胞凋亡發(fā)生的重要調(diào)控因子[16]，PI3K可直接激活A(yù)kt發(fā)生磷酸化，p-Akt能夠進(jìn)一步通過抑制促凋亡蛋白caspase-3、Bax等的形成發(fā)揮保護(hù)心肌的作用[17]。研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)途徑對(duì)缺血缺氧誘發(fā)的心肌細(xì)胞凋亡，可產(chǎn)生心肌保護(hù)作用[11,18]。本研究采用帕瑞昔布長(zhǎng)期治療后發(fā)現(xiàn)，梗死周邊區(qū)心肌細(xì)胞的凋亡及caspase-3蛋白表達(dá)降低，PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)增加，且以高劑量的帕瑞昔布降低細(xì)胞凋亡、改善蛋白表達(dá)最明顯。因此，上述研究結(jié)果表明，帕瑞昔布可能通過上調(diào)磷酸化Akt的表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞凋亡，發(fā)揮延緩心室重構(gòu)的保護(hù)作用，但其下游的具體機(jī)制還需要深入研究。

綜上所述，帕瑞昔布可提高大鼠心肌梗死后心臟功能，延緩心室重構(gòu)，該心肌保護(hù)作用的產(chǎn)生可能與PI3K/Akt信號(hào)通路的激活有關(guān)。但本實(shí)驗(yàn)僅研究了帕瑞昔布對(duì)大鼠心梗后心臟功能和左室肥厚的改善作用，未明確功能的改善能否轉(zhuǎn)化為整體預(yù)后的提高，因此其臨床實(shí)用性有待進(jìn)一步研究。

(致謝:本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)、建模、血流動(dòng)力學(xué)的監(jiān)測(cè)以及左室肥厚指數(shù)的測(cè)定主要在重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心完成，病理切片、RT-PCR以及Western blot主要在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室完成，感謝各位老師和同學(xué)對(duì)本實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)和幫助！)

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Improvement effects of parecoxib on ventricular remodeling after acute myocardial infarction in rats and its influence in PI3K/Akt signaling pathway

YU Ya, WANG Hong-you, YI Zong-ping, CHEN Ping

(DeptofAnesthesiology,theFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

Aim To observe the improvement effects of parecoxib on ventricular remodeling after acute myocardial infarction in rats and its influence on PI3K/Akt signaling pathway.Methods Forty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups(n=8):sham operation group (group S), ventricular remodeling model group(group R), low dose of parecoxib group(group P1), middle dose of parecoxib group(group P2), and high dose of parecoxib group(group P3). A myocardial infarction model was established by ligating the left anterior descending branch(LAD) of coronary artery in group R, group P1, group P2 and group P3.One day after the operation,the rats were given intraperitoneal injection of 4，8，12 mg·kg-1parecoxibin Group P1, group P2 and group P3,respectively, for two weeks. The same volume saline was given in group S and group R. Four weeks later, LVSP, LVEDP,+dp/dtmax, -dp/dtmaxwere monitored.The hearts were harvested to calculate left ventricular hypertrophy index.The pathological change of heart was examined with an optical microscope. The expressions of atrial natriuretic peptide(ANP) mRNA and brain natriuretic peptide(BNP) mRNA were detected by RT-PCR. The expression of PI3K,Akt,P-Akt and caspase-3 was detected by Western blot.Results Compared with group S, the cardiac function was decreased, the left ventricular hypertrophy index, the expression levels of ANP,BNP mRNA, caspase-3 were increased, and the expression levels of PI3K, P-Akt were reduced in group R(allP<0.05).Compared with group R, the cardiac function was ameliorated, the left ventricular hypertrophy index were reduced in group P2 and group P3(allP<0.05).The expression levels of ANP,BNP mRNA, Caspase-3 were decreased, and the expression levels of PI3K and P-Akt were increased in group P1,group P2 and group P3(allP<0.05).Conclusions Middle and high doses of parecoxib can mitigate the process of ventricular remodeling after myocardial infarctionand improve the myocardial function, and its underlying mechanism may be related to activating PI3K/Akt signaling pathway.

myocardial infarction; ventricular remodeling; cyclooxygenase 2 inhibitors; parecoxib; apoptosis;PI3K/Akt signaling pathway

時(shí)間：2017-5-25 17:44 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170525.1744.046.html

2017-02-13，

2017-04-15

衛(wèi)生部國(guó)家臨床重點(diǎn)專科建設(shè)項(xiàng)目[財(cái)社(2011)170號(hào)]；重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科學(xué)重點(diǎn)項(xiàng)目(2012-018)；重慶市醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科[渝衛(wèi)科教(2007)2號(hào)]；重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學(xué)科研計(jì)劃項(xiàng)目(No 2012-1-018)

余 婭(1990-)，女，碩士生，研究方向：麻醉與心臟的保護(hù)，E-mail:18580020379@163.com； 陳 萍(1962-)，女，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：麻醉與臟器的保護(hù)，通訊作者，E-mail: mazuichen@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.06.023

A

1001-1978(2017)06-0863-06

R-332；R322.11；R329.25；R331.31；R542.22；R977.3