五倍子軟膏的質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察

鄭雪花，楊祎蓂，楊 君，楊躍輝

五倍子軟膏的質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察

鄭雪花，楊祎蓂，楊 君，楊躍輝*

目的 建立五倍子軟膏質(zhì)量控制方法并考察其在常溫和加速條件下的穩(wěn)定性。方法 采用薄層色譜(TLC)法和高效液相色譜(HPLC)法鑒別五倍子軟膏中的沒食子酸；采用顯微鏡法檢查五倍子軟膏的粒度；采用HPLC法測定五倍子軟膏中沒食子酸的含量。結(jié)果 TLC法及HPLC法鑒別沒食子酸專屬性強(qiáng)且重復(fù)性好。HPLC法測定沒食子酸在0.153 2～0.612 8 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.999 7)，平均回收率為100.23%，RSD=1.85%。三批中試樣品在加速試驗(yàn)條件下第6個月性狀發(fā)生變化；在常溫下放置6個月各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。結(jié)論 五倍子軟膏在常溫下貯藏6個月質(zhì)量穩(wěn)定，建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于五倍子軟膏的質(zhì)量控制。

五倍子軟膏；質(zhì)量控制；穩(wěn)定性

0 引言

五倍子始載于唐代《本草拾遺》，為漆樹科植物上的蟲癭，由五倍子蚜寄生而形成[1]。五倍子的主要成分有鞣質(zhì)、沒食子酸、五倍子油、礦物質(zhì)微量元素等，其中鞣質(zhì)含量高達(dá)50%～70%[2]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，五倍子具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗腫瘤等藥理作用[3-7]。五倍子軟膏系將五倍子粉與白凡士林、甘油等基質(zhì)混合制備的混懸型軟膏劑，主要用于我院嬰幼兒尿布皮炎的預(yù)防和治療，臨床應(yīng)用歷史悠久且效果顯著。為保證該制劑的產(chǎn)品質(zhì)量及臨床療效，本研究參照2015年《中華人民共和國藥典》對五倍子和軟膏劑的質(zhì)量要求，建立了該制劑的質(zhì)量控制方法，并考察了制劑在常溫和加速條件下的穩(wěn)定性[8]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；Sartorius CPA225D型電子天平(德國Sartorius公司)；AS10200B超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；恒溫水浴鍋(北京永光明儀器廠)；生物顯微鏡(重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 試劑與藥材 沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110831-201204)、五倍子軟膏(中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院，批號：20160524、20160525、20160526)、鹽酸(沈陽化學(xué)試劑廠)、甲醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，色譜純)、三氯甲烷、甲酸乙酯、甲酸、重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別 取五倍子軟膏約5 g，溫水融化，加甲醇5 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取五倍子對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取沒食子酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法2015年版《中國藥典》第4部通則0502試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視[8]。供試品溶液色譜中，在與對照藥材和對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)(結(jié)果見圖1)。在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致。

圖1 五倍子軟膏的薄層色譜鑒別

2.2 粒度檢查 取五倍子軟膏適量，于載玻片上涂成薄層，薄層面積相當(dāng)于蓋玻片面積，共涂3片，顯微鏡下隨機(jī)取5個視野觀察，平均每張載玻片上檢出超過180 μm的粒子不得多于10粒。見表1。

表1 五倍子軟膏超過180 μm的粒子數(shù)(粒)

2.3 沒食子酸含量測定[8]

2.3.1 樣品制備 ①對照品溶液的配制：精密稱取沒食子酸對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含40 μg沒食子酸的對照品溶液，即得。②供試品溶液的配制：取五倍子軟膏約5 g(含五倍子生藥量約0.5 g)，精密稱定，加入4 mol/L鹽酸溶液50 mL，沸水浴中加熱水解3.5 h，放冷，濾過，定容至50 mL量瓶中，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。③陰性對照溶液的制備：按處方工藝制備不含五倍子粉的空白軟膏基質(zhì)，再按供試品溶液配制方法制備陰性對照溶液，即得。

2.3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：甲醇-0.1%磷酸水溶液(15∶85)；檢測波長：273 nm；柱溫：25 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.3.3 方法學(xué)考察 ①線性關(guān)系考察：取沒食子酸對照品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、12、14、16 μL，以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=3 298.1 X+19.493，R2=0.999 7。結(jié)果表明，沒食子酸在0.153 2～0.612 8 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

②專屬性試驗(yàn)：取五倍子軟膏、沒食子酸對照品及不含五倍子粉的空白軟膏基質(zhì)分別制備供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)按沒食子酸峰面積計(jì)算不低于2 000；陰性對照品對沒食子酸的測定無干擾；供試品溶液與沒食子酸對照品溶液相應(yīng)色譜峰的色譜一致。表明該色譜條件符合專屬性要求。見圖2。

圖2 沒食子酸對照品HPLC色譜圖

③精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，并計(jì)算出沒食子酸峰面積RSD為1.71%，表明該方法的精密度良好。

④重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號樣品6份，按上述供試品溶液配制方法制備6份供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL進(jìn)樣，測定沒食子酸的峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果表明，五倍子軟膏中沒食子酸含量的RSD為1.21%。表明方法的重復(fù)性較好。

⑤穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批號的供試品溶液，在0、2、4、6、8、12 h分別進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，計(jì)算沒食子酸峰面積的RSD為1.06%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

⑥回收率試驗(yàn)：精密稱取6份已知含量的五倍子軟膏(含量：5.38%)約0.5 g，分別精密加入定量的沒食子酸對照品，制備供試品溶液，測定沒食子酸的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果表明，平均回收率為100.23%，RSD為1.85%。見表2。

2.3.4 樣品含量測定 取3批五倍子軟膏，按“2.3.1”項(xiàng)制備成供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，五倍子軟膏中沒食子酸的含量分別為5.42 %、5.31 %、5.34 %，平均含量為5.36%。

2.4 穩(wěn)定性考察[8]取擬上市包裝樣品中試規(guī)模3批，進(jìn)行加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)。加速試驗(yàn)條件為溫度(30±2)℃、相對濕度65%±5%的條件下放置6個月，分別于第0、1、2、3、6個月取樣測定，測定結(jié)果見表3。長期試驗(yàn)條件為常溫、相對濕度60%±10%的條件下放置6個月，分別在0、3、6個月取樣檢測，結(jié)果如表4。五倍子軟膏在加速試驗(yàn)條件下，第6個月觀察到軟膏性狀發(fā)生輕微改變，有部分液體析出現(xiàn)象，但鑒別、粒度及含量測定項(xiàng)均符合規(guī)定；在長期試驗(yàn)條件下6個月內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量要求。

表2 五倍子軟膏加樣回收率(n=6)

表3 五倍子軟膏加速試驗(yàn)結(jié)果

表4 五倍子軟膏長期試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

五倍子軟膏的主要藥效成分為五倍子，因此，可以參考《中國藥典》對五倍子的質(zhì)量要求制定五倍子軟膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用TLC對五倍子軟膏中五倍子進(jìn)行定性鑒別，沒食子酸特征斑點(diǎn)清洗且專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好；HPLC檢測沒食子酸的保留時間一致，因此可作為五倍子軟膏的鑒別方法。

五倍子的主要有效成分為鞣質(zhì)，又稱單寧酸，是葡萄糖羥基與7～9個沒食子酸所形成的酯類化合物的混合物，為可水解鞣質(zhì)[9]。因此，酸水解后的沒食子酸含量可以作為五倍子的質(zhì)量控制依據(jù)。本研究采用HPLC法測定沒食子酸含量，方法學(xué)穩(wěn)定，易操作，專屬性強(qiáng)，為五倍子軟膏的質(zhì)量控制奠定了研究基礎(chǔ)。

加速試驗(yàn)第6個月觀察到軟膏性狀發(fā)生輕微改變，有部分液體析出現(xiàn)象，但鑒別、檢查及含量測定項(xiàng)均符合規(guī)定，可見五倍子軟膏易受溫度影響，因此建議陰涼處貯藏。長期試驗(yàn)條件下放置6個月，五倍子軟膏的外觀性狀良好，沒食子酸含量未出現(xiàn)明顯變化，鑒別及粒度檢查項(xiàng)均符合要求。表明五倍子軟膏在常溫下6個月穩(wěn)定性良好，且與直接接觸制劑的包裝相容性良好。

[1] 楊雅西,平靜,于鷹,等.五倍子古今應(yīng)用探要[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,13(3):11-14.

[2] 馮淑萍.五倍子藥材及制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].陜西:陜西中醫(yī)學(xué)院,2009

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[4] Theisen LL,Erdelmeier CA,Spoden GA,et al.Tannins from Hamamelis virginiana bark extract:characterization and improvement of the antiviral efficacy against influenza A virus and human papillomavirus[J].PLoS One,2014,9(1):e88062.

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[7] 王艷,唐榮銀,楊聚才.中藥五倍子對變形鏈球菌及遠(yuǎn)緣鏈球菌抑制作用的體外研究[J].牙體牙髓牙周病學(xué)雜志,2002,12(9):490-492.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[9] 周勁光.五倍子的藥理作用與臨床研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2010,22(4):30-32.

Quality control and stability study of Chinese Gall Ointment

ZHENG Xue-hua,YANG Yi-ming,YANG Jun,YANG Yue-hui*

(Department of Pharmacy,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To establish the quality standard of Chinese Gall Ointment,and to investigate its stability under room temperature and accelerated condition.Methods Gallic acid in Chinese Gall Ointment was qualitatively identified by TLC and HPLC;the granularity of Chinese Gall Ointment was observed by microscope and content of gallic acid was measured by HPLC.Results The identification of gallic acid showed a strong specificity and good reproducibility.The gallic acid in the range of 0.153 2～0.612 8 μg showed good linear relation with the peak area (r=0.999 7),and the average recovery rate was 100.23% (RSD=1.85%).The appearance of Chinese Gall Ointment was changed after 6 months with accelerated condition,and the various index of pilot test samples met the quality standard under room temperature for 6 months.Conclusion Chinese Gall Ointment is stable at room temperature for 6 months and the established quality standard can be used for quality control.

Chinese Gall Ointment;Quality standard;Stability

2016-09-22

中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院藥學(xué)部，沈陽 110004

*通信作者

10.14053/j.cnki.ppcr.201706023