羅慧玉，閆偉偉，曾春萍，徐 鵬，査建蓬

HPLC法同時(shí)測(cè)定杏花中阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷

羅慧玉1,2，閆偉偉1,2，曾春萍1，徐 鵬1，査建蓬2

目的 建立HPLC法同時(shí)測(cè)定杏花中阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷。方法 色譜柱為YMC-Pack ODS-A C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)；體積流量1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為343 nm；柱溫為30 ℃。結(jié)果 阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷分別在0.029 08～0.290 8 μg (r=0.999 9)、0.548 4～5.484 2 μg (r=0.999 9)、0.033 07～0.330 7 μg (r=0.999 9)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；平均回收率分別為98.31%、98.93%、100.25%，RSD分別為1.0%、0.9%、1.1%。10批杏花樣品中阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷含量測(cè)定結(jié)果分別為0.105～0.554、3.080～6.933、0.258～0.974 mg/g。結(jié)論 該方法多種成分同時(shí)測(cè)定，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于杏花藥材的質(zhì)量控制。

杏花；阿魏酸；蘆?。划愰纹ぼ?；HPLC

0 引言

杏花為薔薇科植物杏PrunusarmeniacaL.或山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥花。杏花除頗具觀賞性外，還具有豐富的藥用價(jià)值，其性溫、味苦[1]，具有活血補(bǔ)虛的功能，主治婦女不孕，肢體痹痛，手足逆冷[2]。杏花具有補(bǔ)中益氣、祛風(fēng)的作用，可用于營(yíng)養(yǎng)肌膚，祛除面上粉滓[3-4]。近年研究表明，杏花中含杏花精油[5]及總黃酮類物質(zhì)[6-7]。杏花雖然藥用歷史悠久，療效確切，但在中國(guó)藥典及各地方標(biāo)準(zhǔn)中均未對(duì)其進(jìn)行收載，難以控制質(zhì)量。為進(jìn)一步研究其有效成分，筆者在初步試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)杏花中含有阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷等成分。本文建立了同時(shí)測(cè)定杏花中阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷含量的HPLC法，并用于測(cè)定10個(gè)不同產(chǎn)地杏花藥材中的3種成分，為進(jìn)一步評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地杏花藥材的質(zhì)量和完善杏花的質(zhì)量控制提供參考。

1 藥材

杏花來源于江蘇、陜西藍(lán)田、浙江、陜西旬邑、山西、河南和安徽7個(gè)產(chǎn)地，采購于亳州藥材市場(chǎng)，由河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平主任藥師鑒定為薔薇科植物杏PrunusarmeniacaL.的干燥花，山杏花采摘于北京房山、張家口市區(qū)、張家口沽源，均由河北省藥品檢驗(yàn)研究院段吉平主任藥師鑒定為薔薇科植物山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥花。

2 儀器與試藥

2.1 儀器 島津 LC 2010A HT 高效液相色譜儀，SPD-M10A VP二極管陣列檢測(cè)器，LC solution色譜管理系統(tǒng)(島津公司)，粉碎機(jī)，C9860A型超聲波清洗儀(天津科貝爾光電技術(shù)有限公司，250 W，50 KHz)，Sartorius CPA225D分析天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán))，Milli-Q Integral 純水/超純水機(jī)(美國(guó)Millipore公司)。

2.2 試藥 阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)：110773-201012，含量：99.6%)，蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100080-201408，含量：90.2%)，異槲皮苷對(duì)照品(批號(hào)：111809-201403，含量：92.9%)，購自中國(guó)食品藥品檢定研究院；磷酸、乙腈為色譜純，乙醇為分析純。

3 方法與結(jié)果

3.1 溶液的制備

3.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品14.60 mg，蘆丁對(duì)照品30.40 mg，異槲皮苷對(duì)照品17.80 mg，分別置于100、10、100 mL 量瓶中，加70%乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，制成阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取各儲(chǔ)備液5 mL，置同一50 mL量瓶中，加70%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含阿魏酸14.541 6 μg、蘆丁0.274 2 mg、異槲皮苷16.536 2 μg的混合對(duì)照品溶液。

3.1.2 供試品溶液的制備 取杏花粉末(過四號(hào)篩)約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 本研究采用YMC-Pack ODS-A C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(15∶85)；檢測(cè)波長(zhǎng)：343 nm；體積流量：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷均與樣品中其他組分色譜峰基線分離?；旌蠈?duì)照品(A)和樣品(B)的色譜圖見圖1。

3.3 線性關(guān)系的考察 分別精密量取混合對(duì)照品溶液2、5、10、15、20 μL，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品的峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見表1。

圖1 混合對(duì)照品(A)和供試品溶液(B)的HPLC圖

3.4 定量限和檢測(cè)限 按“3.2”項(xiàng)下色譜條件，用對(duì)照品溶液稀釋的方法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果當(dāng)S/N=10時(shí)，阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷的定量限分別為0.01、0.01、0.01 μg；當(dāng)S/N=3時(shí)，阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷的檢測(cè)限分別為0.003、0.003、0.003 μg。

3.5 精密度試驗(yàn) 精密稱取杏花粉末(產(chǎn)地：山西)1.0 g，按“3.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果顯示，阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷峰面積的RSD值分別為1.0%、0.3%和0.4%，表明儀器的精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取杏花粉末(產(chǎn)地：山西)6份，每份1.0 g，按“3.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算。結(jié)果顯示，阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷含量的RSD值分別為0.7%、0.3%、0.8%。表明該方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取杏花粉末(產(chǎn)地：山西)1.0 g，按“3.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別在制備后的0、2、4、8、12、24、48 h，按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示，阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷峰面積的RSD值分別為1.2%、0.4%、0.6%，表明供試品溶液在室溫下48 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 化合物的線性范圍、回歸方程和相關(guān)系數(shù)

3.8 加樣回收率 精密稱取已知含量(產(chǎn)地：山西，阿魏酸0.330 mg/g、蘆丁6.933 mg/g、異槲皮苷0.321 mg/g)的樣品6份，每份約0.5 g，分別精密加入阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷儲(chǔ)備液各1.0、1.2、1.0 mL，按“3.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，并按“3.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，用回歸方程計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷的平均回收率(n=6)分別為98.31%、98.93%、100.25%，RSD分別為1.0%、0.9%、1.1%。

表2 回收率考察結(jié)果

3.9 樣品測(cè)定 取10批次杏花藥材粉末各1.0 g，精密稱定，按“3.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“3.2”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算3種成分在10批次藥材中的含量。結(jié)果見表3。10批杏花樣品中阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷的含量測(cè)定結(jié)果分別為0.105～0.554、3.080～6.933、0.258～0.974 mg/g。

4 結(jié)果與討論

4.1 供試品溶液制備方法的選擇與優(yōu)化 考察了不同粒度藥材粉末(過三、四、五號(hào)篩)、不同溶劑(水[8]、稀乙醇[9]、70%乙醇[10]和90%甲醇[11])及不同提取方式(超聲處理、浸泡過夜和加熱回流)對(duì)各指標(biāo)成分提取效率的影響。結(jié)果顯示，過四號(hào)篩粉末的提取量最大；以70%乙醇對(duì)各指標(biāo)成分的提取效率最高；超聲30 min與加熱回流提取1 h及浸泡過夜(約18 h)對(duì)3個(gè)目標(biāo)化合物的提取率相當(dāng)，考慮到實(shí)際操作方便快捷，樣品處理選擇超聲處理30 min。

表3 不同產(chǎn)地杏花指標(biāo)成分測(cè)定結(jié)果(n=2)

4.2 色譜條件的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液流動(dòng)相系統(tǒng)及其不同比例配比等，結(jié)果顯示，甲醇-磷酸水溶液作為流動(dòng)相時(shí)阿魏酸與其他成分的分離度差，乙腈-0.1%磷酸水溶液(15∶85)作為流動(dòng)相時(shí)，可使3個(gè)成分與其他成分很好分離，且峰形好，出峰時(shí)間適中，可作為合理流動(dòng)相。分別對(duì)阿魏酸、蘆丁和異槲皮苷對(duì)照品溶液在190～400 nm范圍內(nèi)通過二極管陣列檢測(cè)器掃描，得阿魏酸在322 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，蘆丁、異槲皮苷在202、255、356 nm波長(zhǎng)處有3個(gè)最大吸收。兼顧3種物質(zhì)的最大吸收，考察了不同波長(zhǎng)下的出峰情況，發(fā)現(xiàn)在343 nm波長(zhǎng)處，37成分吸收較穩(wěn)定，基線平穩(wěn)，滿足定量測(cè)定的要求，故選擇343 nm波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。

4.3 10批樣品有效成分含量分析 由表3可見，杏花中阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷的含量范圍分別為0.251～0.393、5.907～6.933、0.258～0.332 mg/g，分別最大相差1.6倍、1.2倍、1.3倍，差異較小。山杏花中阿魏酸、蘆丁、異槲皮苷的含量范圍分別為0.105～0.554、3.080～5.782、0.376～0.974 mg/g，分別最大相差5.3、1.9、2.6倍，存在較明顯差異。

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Simultaneous determination of ferulic acid,rutin and lsoquercitrin in prunus armeniaca flos by HPLC

LUO Hui-yu1,2,YAN Wei-wei1,2,ZENG Chun-ping1,XU Peng1,ZHA Jian-peng2

(1.Zhangjiakou Food and Drug Inspection Center,Zhangjiakou 075000,China;2.Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of ferulic acid,rutin and lsoquercitrin in prunus armeniaca flos.Methods A YMC-Pack ODS-A C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) column was adopted.The mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution at a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 343 nm and the column temperature was 30 ℃.Results The standard curve of ferulic acid,rutin and lsoquercitrin showed a good linearity in the concentration range of 0.029 08～0.290 8 μg (r=0.999 9),0.548 4～5.484 2 μg (r=0.999 9),0.033 07～0.330 7 μg (r=0.999 9),and the average recoveries were 98.31%,98.93% and 100.25%,andRSDwere 1.0%,0.9% and 1.1%.The content of ferulic acid,rutin and lsoquercitrin were 0.105～0.554,3.080～6.933 and 0.258～0.974 mg/g,respectively,in 10 samples of prunus armeniaca flos.Conclusion This method is simple,accurate,reproducible and convenient for the quality control of prunus armeniaca flos.

Prunus armeniaca flos;Ferulic acid;Rutin;Lsoquercitrin;HPLC

2016-09-21

1.張家口市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 張家口 075000；2.河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊 050017

張家口市科學(xué)技術(shù)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(1521043D)

10.14053/j.cnki.ppcr.201706024