李運(yùn)華，劉紹華，歐陽(yáng)堅(jiān)，胡兆鵬，梁卉

(1 萍鄉(xiāng)市衛(wèi)生學(xué)校，江西萍鄉(xiāng)337000；2 萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院)

乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)變化及其與臨床分期的關(guān)系

李運(yùn)華1，劉紹華1，歐陽(yáng)堅(jiān)1，胡兆鵬2，梁卉1

(1 萍鄉(xiāng)市衛(wèi)生學(xué)校，江西萍鄉(xiāng)337000；2 萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院)

目的 探討乳腺癌組織Ezrin、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)變化及其與腫瘤臨床分期的關(guān)系。方法 選擇乳腺癌患者107例，手術(shù)切除乳腺癌組織標(biāo)本為乳腺癌組、距腫瘤邊緣>5 cm的癌旁正常乳腺組織標(biāo)本作為癌旁正常組。采用Maxvision TM快捷免疫組化法檢測(cè)兩組Ezrin、VEGF表達(dá)(以條帶光密度值表示)，分析二者表達(dá)與乳腺癌臨床分期的關(guān)系，以及二者的相關(guān)性。結(jié)果 乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)均較癌旁正常組織升高(P均<0.05)。隨著臨床分期增加，乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)均逐漸升高(P均<0.05)。乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.024，P<0.05)。結(jié)論 乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)均上調(diào)，二者均參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。

乳腺癌；Ezrin蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

近年來乳腺癌的發(fā)病率和病死率逐年增加[1,2]。手術(shù)切除腫瘤結(jié)合術(shù)后放化療是乳腺癌的主要治療方法，但多數(shù)患者確診時(shí)已處于臨床中晚期，治療效果及預(yù)后均不佳；腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)仍較高[3]。目前，臨床仍缺乏特異性診斷和判斷乳腺癌病情的標(biāo)志物。Ezrin蛋白是細(xì)胞骨架與細(xì)胞膜之間的連接蛋白，主要表達(dá)于富含肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞表面，是連接膜蛋白和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)鍵蛋白[4]。已有證據(jù)顯示，Ezrin蛋白參與了部分腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移及凋亡過程[5]，但其與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系報(bào)道較少。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)參與細(xì)胞的多種生理及病理過程，在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常，參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[6]。本研究探討乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)變化及其與乳腺癌臨床分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2011年1月～2015年11月萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院收治的乳腺癌患者107例，年齡57～75(64.7±7.6)歲；依據(jù)WHO乳腺癌腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期23例、Ⅱ期26例、Ⅲ期31例、Ⅳ期27例。107例患者均行手術(shù)切除腫瘤組織(乳腺癌組)，并留取距腫瘤邊緣>5 cm的正常乳腺組織標(biāo)本作為對(duì)照(正常組)。

1.2 Ezrin、VEGF表達(dá)檢測(cè) 采用Maxvision TM快捷免疫組化法。取兩組乳腺組織標(biāo)本，石蠟包埋后4 μm厚連續(xù)切片。將切片平鋪于用黏片劑處理過的載玻片上，60 ℃條件下烘干100 min；將烘干的切片放入二甲苯中脫蠟，采用57%、75%、95%及無水乙醇進(jìn)行梯度脫水處理；將載玻片放入檸檬酸緩沖液中加熱15 min；每張切片上滴一滴3%雙氧水，室溫孵育10 min；在載玻片上分別滴加一抗(兔抗Ezrin工作液濃度為1∶200，兔抗VEGF工作液濃度為1∶250)，室溫孵育1 h，4 ℃孵育過夜；PBS沖洗3次，滴加二抗，室溫孵育1 h；PBS沖洗3次，DAB試劑盒進(jìn)行顯色。具體步驟參照試劑盒說明書(Ezrin試劑盒購(gòu)自Santa Cruz公司，VEGF檢測(cè)試劑盒購(gòu)自IBL公司)。選取7個(gè)典型視野，采用Pro-Plus6.0圖像分析軟件測(cè)量Ezrin、VEGF表達(dá)的光密度值(OD值)。分析Ezrin、VEGF表達(dá)與乳腺癌臨床分期的關(guān)系。

2 結(jié)果

乳腺癌組Ezrin、VEGF表達(dá)均明顯高于正常組(P均<0.05)，見表1；隨著臨床分期增加，乳腺癌組織Ezrin、VEGFF表達(dá)灰度值均逐漸升高(P均<0.05)，見表2。乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.024，P<0.05)。

表1 兩組VEGF、Ezrin表達(dá)灰度值比較

注：與正常組比較，*P<0.05。

表2 不同臨床分期乳腺癌組織VEGF、Ezrin表達(dá)(OD值

3 討論

Ezrin蛋白是細(xì)胞內(nèi)維系膜蛋白及細(xì)胞骨架蛋白的關(guān)鍵分子，參與腫瘤細(xì)胞的大部分病理學(xué)過程[7,8]。研究發(fā)現(xiàn)，Ezrin蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)亦明顯增強(qiáng)，其表達(dá)水平越高、患者預(yù)后越差[9]；宮頸癌組織中Ezrin和E-cadherin蛋白均表達(dá)增強(qiáng)，且二者均與腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移過程相關(guān)[10]；Ezrin和MMP-9在食管鱗癌組織中均表達(dá)增強(qiáng)，二者是腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生重構(gòu)和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的主要參與蛋白[11]；Ezrin蛋白是結(jié)腸癌和胃癌等消化道惡性腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及凋亡的關(guān)鍵參與分子[12，13]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織Ezrin表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，且隨著臨床分期增加，乳腺癌組織Ezrin表達(dá)均逐漸升高，說明Ezrin高表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展，檢測(cè)乳腺癌組織Ezrin表達(dá)有助于乳腺癌的早期診斷和病情評(píng)估。

乳腺癌是血管依賴性腫瘤。在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中，新生血管生成發(fā)揮重要作用。在氧和營(yíng)養(yǎng)充足的情況下，VEGF可以通過Wnt等信號(hào)途徑促進(jìn)正常非增殖期血管內(nèi)皮細(xì)胞增生和血管網(wǎng)絡(luò)形成[14]；但腫瘤局部一般為缺氧環(huán)境，缺氧導(dǎo)致腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞通過旁分泌或自分泌方式產(chǎn)生VEGF，以保證腫瘤組織血管生成和氧供，促進(jìn)腫瘤組織發(fā)展[15]。VEGF還可通過調(diào)控一系列癌基因和抑癌基因的表達(dá)參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程[16]。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織VEGF表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，且隨著臨床分期增加，乳腺癌組織VEGF表達(dá)均逐漸升高，與上述文獻(xiàn)報(bào)道相符，說明VEGF高表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織Ezrin、VEGF表達(dá)變化趨勢(shì)相同，不同臨床分期乳腺癌組織中Ezrin、VEGF表達(dá)變化趨勢(shì)亦相同，二者表達(dá)呈正相關(guān)。推測(cè)乳腺癌組織中Ezrin、VEGF表達(dá)可能存在某種關(guān)聯(lián)，但二者之間的具體聯(lián)系方式及作用機(jī)制需今后研究證實(shí)。

綜上所述，Ezrin、VEGF在乳腺癌組織中表達(dá)均上調(diào)，二者均參與了乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。

[1] 袁杰,涂剛,陳茂山,等.整合素β1基因shRNA慢病毒載體構(gòu)建及其對(duì)乳腺癌他莫昔芬耐藥細(xì)胞的遷移和侵襲能力的影響[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,7(2):223-225.

[2] 王勇,王曉東,陳文捷,等.散發(fā)性乳腺癌中 DNMT3a、DNMT3b表達(dá)與 ERα基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及蛋白表達(dá)的關(guān)系[J].天津醫(yī)藥,2015,7(5):34-37.

[3] 蘭柯,李文翰,徐子森,等.卡培他濱在治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌中作用的Meta分析[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2015,11(4):425-429.

[4] 安錦丹,魏寶霞,王佳奇,等.卵巢惡性上皮性腫瘤組織中Fascin、Ezrin的陽(yáng)性表達(dá)及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(13):19-21.

[5] 劉洋,王軍,李愛東,等.Ezrin蛋白的生物學(xué)作用及其與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,43(13):2551-2553.

[6] 羅忠民,路太英,路彥娟,等.卡培他濱對(duì)晚期胃癌患者血清TNF-α、IL-6、VEGF及腫瘤標(biāo)志物水平的影響及其療效[J].中國(guó)生化藥物雜志,2015,7(9):149-151.

[7] 于興燕,于東紅. Ezrin蛋白在腫瘤中的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述,2015,36(23):4278-4280.

[8] 孔界男,周憲春,韓龍哲,等.甲胎蛋白陰性肝細(xì)胞癌中埃茲蛋白(ezrin)和SIX1蛋白表達(dá)水平的臨床病理意義[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2016,14(2):236-239.

[9] 劉星言,徐曉龍,陳征,等.Ezrin在前列腺癌中的功能研究及臨床意義[J]. 中華腔鏡泌尿外科雜志(電子版),2015,32(6):451-457.

[10] 呂紅梅,魏雙梅.Ezrin和E-cadherin在宮頸癌中的表達(dá)及其相關(guān)性探討[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2015,13(6):937-939.

[11] 陸向東,張汀榮,張瑤,等.Ezrin和MMP-9在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J].江蘇醫(yī)藥,2015,16(13):1514-1516.

[12] 劉艷,林建姣,朱繼輝,等.結(jié)腸癌組織中Cofilin-1、Ezrin蛋白的表達(dá)及臨床病理意義[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2015,8(7):795-798.

[13] 單漢國(guó),黃昌浩,黃笛鳴.Ezrin蛋白通過上調(diào)YAP的表達(dá)促進(jìn)胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移[J].世界華人消化雜志,2015,31(23):3683-3690.

[14] 查翔遠(yuǎn),翟群超,吳建成,等.肝細(xì)胞癌組織中IL-18BPc和VEGF的表達(dá)及與腫瘤血管形成的關(guān)系[J].安徽醫(yī)藥,2016,7(1):82-85.

[15] 王劍雅,寇天雷.VEGF在前列腺癌中的表達(dá)及與腫瘤MVD的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,11(9):1414-1417.

[16] 李玉靈,趙華,魏楓,等.VEGF-C/VEGFR3通路對(duì)腫瘤患者外周血來源DC的影響[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志,2016,8(3):392-396.

江西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科技計(jì)劃(20177212)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.20.018

R737.9

B

1002-266X(2017)20-0058-02

2016-12-08)