HLA-B27在疑似強直性脊柱炎患者中的檢測與分析

王師，王楚，車艷紅，張琦，張火兵，童能勝

（1.北京中同藍(lán)博臨床檢驗所，北京100076；2.中國康復(fù)研究中心北京博愛醫(yī)院脊柱脊髓神經(jīng)功能重建科，北京100068）

HLA-B27在疑似強直性脊柱炎患者中的檢測與分析

王師1，王楚2，車艷紅1，張琦1，張火兵1，童能勝1

（1.北京中同藍(lán)博臨床檢驗所，北京100076；2.中國康復(fù)研究中心北京博愛醫(yī)院脊柱脊髓神經(jīng)功能重建科，北京100068）

目的通過檢測疑似強直性脊柱炎患者HLA-B27（human leucocyte antigen-B27，人類白細(xì)胞抗原-B27）的表達(dá)情況，探討HLAB27在疑似強直性脊柱炎患者中的分布及相關(guān)的臨床意義。方法選取1 009例疑似強直性脊柱炎患者為研究對象，通過流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測外周血中HLA-B27的表達(dá)情況。結(jié)果在1 009例疑似患者中，男497例，其中HLA-B27陽性患者為102例，占20.5%；女512例，其中HLAB27陽性患者為63例，占12.3%，男性明顯高于女性（P＜0.05）。20～40歲年齡階段的HLA-B27陽性患者占63.3%，高于其他年齡階段（P＜0.05）。結(jié)論在疑似強直性脊柱炎患者中，男性青壯年HLA-B27陽性率較高，HLA-B27的檢測有助于強直性脊柱炎的早期診斷。

HLA-B27；強直性脊柱炎；流式細(xì)胞術(shù)

HLA(human leucocyte antigen)-B27屬于主要組織相容性復(fù)合（major histocompatibility complex，MHC）I型分子,它是由重鏈和微球蛋白以及組裝在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的抗原肽組成，表達(dá)于所有的真核細(xì)胞表面，研究表明：淋巴細(xì)胞中高表達(dá)的HLA-B27參與多種疾病的發(fā)生過程[1]。強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種以胸、頸、腰段的脊柱韌帶和關(guān)節(jié)以及骶髂關(guān)節(jié)等部位炎癥引起的疼痛為特征的炎癥性的自身免疫性疾病，它多發(fā)生于青年和中年人群中的一種疾病，起病隱襲，病程較長，容易造成患者不可逆的脊柱關(guān)節(jié)受損，在發(fā)病的早期難以精準(zhǔn)的診斷[2-3]。目前臨床上對強直性脊柱炎的診斷主要是通過計算機斷層掃描（computer tomography，CT），但是這種診斷具有滯后性，即患者從發(fā)生癥狀到臨床確診往往會滯后三到五年，延誤了疾病的治療。研究發(fā)現(xiàn)，強直性脊柱炎的發(fā)生與HLA-B27的異常表達(dá)有著密切的關(guān)系，因此，HLA-B27的檢測在強直性脊柱炎的早期診斷中具有重要的意義，是臨床診斷和鑒別診斷強直性脊柱炎的重要參考指標(biāo)[4-6]。本文采用流式細(xì)胞術(shù)對本檢驗所收到的1 009例疑似強直性脊柱炎患者的血液樣本進(jìn)行的HLA-B27表面抗原的檢測，以了解京津冀地區(qū)不同性別和年齡階段疑似強直性脊柱炎患者中HLA-B27的表達(dá)情況，并對強直性脊柱炎患者的早期診斷提供重要的臨床參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇1 009例2016年1月～2016年11月京津冀地區(qū)醫(yī)院送檢到本檢驗所疑似強直性脊柱炎患者的外周血樣本，其中男497例，女512例；年齡1～80歲，平均年齡（35.4±13.8）歲。

1.2 主要儀器與試劑儀器為BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國BD Biosciense Becton,Dickinson and Company）。主要試劑：BD Calibrte 3-color kit；HLA-B27檢測試劑盒（流式細(xì)胞法），試劑盒內(nèi)的試劑主要為HLA-B27-FITC(luoresceinisothiocyanate)/CD3-PE(phycoerythrin)流式抗體，HLA-B27 Calibrte beads，10×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution；鞘液；FACS Clean液。以上試劑均購于美國BD Biosciense Becton,Dickinson and Company。

1.3 方法根據(jù)試劑盒提供的檢測方法進(jìn)行操作，將30 μLHLA-B27-FIT/CD3-PE抗體與50μL外周血共孵育15 min，加入2 mL稀釋好的1×HLA-B27 BD FACS Lysing Solution溶血素，10 min后300 g離心5 min去上清，加入2 mL流式清洗液300 g離心5 min去上清，加入300μL 1%多聚甲醛溶液混勻后按儀器操作規(guī)程進(jìn)行上機檢測。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 20.0進(jìn)行對獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析與處理，計數(shù)資料采用率（%）來表示，計數(shù)資料間的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HLA-B27在疑似強直性脊柱炎患者不同性別之間表達(dá)情況在1 009例疑似強直性脊柱炎患者的標(biāo)本中，HLA-B27陽性患者為165例（16.4%），HLA-B27陰性患者為844例（83.6%）。男性疑似患者為497例，其中HLA-B27陽性患者為102例（20.5%）；女性疑似患者為512例，其中HLA-B27陽性患者為63例（12.3%）。在HLA-B27陽性疑似強直性脊柱炎患者中，男性明顯多于女性（P＜0.05）。見表1。

表1 不同性別患者HLA-B27表達(dá)情況Table 1Expression of HLA-B27 in patients with different gender

2.2 HLA-B27在疑似強直性脊柱炎患者不同年齡階段之間表達(dá)情況在不同年齡階段統(tǒng)計分析中，疑似強直性脊柱炎陽性患者HLA-B27陽性主要集中在20～40歲年齡階段（P＜0.05）。男性患者20～40歲年齡階段HLA-B27陽性占到66.7%，明顯高于其他年齡階段（P＜0.05）；同樣在女性患者20～40歲年齡階段HLA-B27陽性占到57.7%，明顯高于其他年齡階段（P＜0.05）。其次，40～60歲年齡階段的患者HLAB27陽性也高于其他兩個年齡階段（P＜0.05）。見表2。

表2 不同年齡階段患者HLA-B27表達(dá)情況[n（%）]Table 2Expression of HLA-B27 in different age groups of patients [n（%）]

3 討論

強直性脊柱炎作為一種慢性自身免疫學(xué)疾病，發(fā)病初期比較隱蔽，病程較長，一旦確診即為中后期，對脊柱和關(guān)節(jié)造成不可逆轉(zhuǎn)的損害。強直性脊柱炎會造成椎間盤的鈣化和骨化，患者中后期會出現(xiàn)嚴(yán)重的關(guān)節(jié)強直以及脊柱畸形，發(fā)病十年內(nèi)就可以造成患者嚴(yán)重的不可逆轉(zhuǎn)的關(guān)節(jié)功能障礙，致殘率較高[7]。這種疾病常發(fā)生于青壯年人群中，發(fā)病初期表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)處的疼痛，與很多炎癥性疾病相似，無明顯的骨骼炎癥性變化，致使其早期很難通過計算機斷層掃描確診，也容易被誤診為其他關(guān)節(jié)疾病。因此，強直性脊柱炎的早期診斷尤為重要[8-10]。

目前強直性脊柱炎的發(fā)病機制尚不清楚，研究發(fā)現(xiàn)，HLA-B27的表達(dá)與強直性脊柱炎有著密切的關(guān)系。HLA-B27是一類表達(dá)于所有有核細(xì)胞上的MHC I類分子，參與多種細(xì)胞信號傳遞與免疫調(diào)控，與強直性脊柱炎有著明顯的相關(guān)性[11]。在強直性脊柱炎患者中，約90%的患者表現(xiàn)為HLAB27陽性，而在正常人群中，HLA-B27陽性只占5%左右，但在我國，強直性脊柱炎的發(fā)病率約為0.3%，即約6%HLA-B27陽性人群會患有強直性脊柱炎[12]。

本研究結(jié)果顯示，在京津冀地區(qū)的疑似患強直性脊柱炎患者中，男女比例約為1：1，HLA-B27陽性患者為占16.4%；在HLA-B27陽性患者中，HLA-B27陽性男性患者在男性患者中所占的比例為20.5%，HLA-B27陽性女性患者在女性患者中所占的比例僅為12.3%，男性明顯多于女性，具有顯著差異，表明京津冀地區(qū)疑似會強直性脊柱炎患者中強直性脊柱炎的患者男性可能會多于女性。在疑似會強直性脊柱炎患者中，20～40歲年齡階段的HLA-B27陽性患者（63.3%）高于其他年齡階段，預(yù)示著強直性脊柱炎在青壯年人群中的發(fā)病率會明顯高于其他階段。在臨床診斷中，利用流式細(xì)胞術(shù)方便、快速、準(zhǔn)確等特點對疑似會強直性脊柱炎患者檢測HLAB27，從而能實現(xiàn)對強直性脊柱炎的早期診斷。對于強直性脊柱炎患者，在發(fā)病早期，骶髂關(guān)節(jié)出現(xiàn)炎癥之前，X光片或者計算機斷層掃描都難以確診強直性脊柱炎，因此，對于疑似強直性脊柱炎患者進(jìn)行HLA-B27檢測為強直性脊柱炎的早期診斷提供了新的思路并具有重要的臨床參考價值，對于HLA-B27陽性患者給予相應(yīng)的治療，就能夠預(yù)防髖關(guān)節(jié)和強直脊柱強直等強直性脊柱炎并發(fā)癥，從而避免對造成脊柱不可逆的損傷[13-14]。由于本研究缺少進(jìn)一步的臨床癥狀表現(xiàn)和最終的確診結(jié)果，HLA-B27陽性在男女間以及不同年齡階段間的分布雖有統(tǒng)計學(xué)差異，但并不能直接表明疑似強直性脊柱炎患者HLA-B27陽性與患有強直性脊柱炎具有一一相對應(yīng)的關(guān)系，HLA-B27陽性與強直性脊柱炎的確切的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。

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Detection and analysis of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis

Wang Shi1，Wang Chu2，Che Yan-hong1，Zhang Qi1，Zhang Huo-bing1,Tong Neng-sheng1
(1.Beijing CIC Clinical Laboratory,Beijing，100076,China；2.Department of Spinal and Neural Function Reconstruction,China Rehabilitation Research Center,Beijing Boai Hospital,Beijing，100068,China)

ObjectiveTo detect the expression of HLA-B27 in patients with suspected ankylosing spondylitis,and then to explore the distribution and clinical value of HLA-B27.MethodsA total of 1 009 patients with suspected ankylosing spondylitis were enrolled in this study,flow cytometry was performed to detect the positive expression of HLA-B27 in peripheral blood.ReslutsAmong all patients,the rate of positive HLAB27 in male patients(n=497)was 20.5%(102cases),while the rate of positive HLA-B27 in female patients(n=512)was 12.3%(63cases).The rate of positive HLA-B27 in male patients was significantly higher than females patients.The rate of positive HLA-B27 patients at the age of 20-40 was higher than the patients with other age stages(P＜0.05).ConclusionIn patients with suspected ankylosing spondylitis,the highest rate of positive HLA-B27 was found in young adults,this study was essential for the early diagnosis of ankylosing spondylitis.

HLA-B27;Ankylosing Spondylitis;Flow Cytometry

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.18.013

共同第一作者：王師，王楚

張火兵，E-mail：zhanghuobing2010@163.com；童能勝，E-mail：tnsh8656@163.com