朱丹 楊菁 李林龍 楊航 黎燕
摘要[目的]建立紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定龍膽中總黃酮含量的方法。[方法]通過(guò)微波輔助雙水相提取龍膽中總黃酮類(lèi)化合物,采用紫外可見(jiàn)分光光度法,以蘆丁作為對(duì)照品,測(cè)定其含量。[結(jié)果]黃酮類(lèi)化合物濃度在10.4~73.0 μg/mL,其吸光度與濃度有良好的線(xiàn)性關(guān)系;該方法的精密度、重復(fù)性和加樣回收率的RSD值分別為0.30%、1.31%、2.27%。[結(jié)論]該方法準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好,可以用于測(cè)定龍膽中總黃酮類(lèi)化合物。
關(guān)鍵詞龍膽;黃酮化合物;紫外可見(jiàn)分光光度法;含量測(cè)定;方法學(xué)
中圖分類(lèi)號(hào)S567.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611(2017)14-0113-02
Abstract[Objective] The research aimed to establish a method for determination of the total flavonoids from Radix Gentianae.[Method]The total flavonoids in Radix Gentianae were extracted by microwaveassisted aqueous twophase. The contents of total flavonoids were determined by UV-visible spectrophotometry with rutin as the reference substance. [Result]The method was a good linear at the range of 10.4-73.0 μg/mL of the total flavonoids. The RSD values of the precision test, reproducibility experiment and the recovery rate test were 0.30%,1.31%,2.27%,respectively.[Conclusion]The method is accurate, rapid and reproducible,and can be used to determine the total flavonoids from Radix Gentianae.
Key wordsRadix Gentianae;Flavonoids;UVvisible spectrophotometry;Determination of content;Methodology
龍膽(Radix Gentianae)為龍膽科植物條葉龍膽(Gentiana manshurica Kitag.)、龍膽(G.scabra Bge.)、三花龍膽(G. triflora Pall.)、堅(jiān)龍膽(G.rigescens Franch)的干燥根及根莖,味苦、寒,具有清熱燥濕、瀉肝膽火的功效[1]。近年來(lái)研究表明,龍膽的地上部分含有黃酮類(lèi)化合物[2-3],具有抗炎、抗菌、降血糖等藥理活性[4]。該試驗(yàn)采用紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)龍膽中的總黃酮進(jìn)行含量測(cè)定,并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行考察[5-6]。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
1.1.1試驗(yàn)儀器。UV-500紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司),M1-211A微波爐(美的公司),AR2140電子分析天平(上海奧豪斯有限公司),DRHH數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。
1.1.2試驗(yàn)試劑。龍膽藥材(產(chǎn)地:廣西);蘆丁對(duì)照品(上海永恒生物科技有限公司,純度>98%);無(wú)水乙醇、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉、硫酸銨等試劑均為分析純。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1供試品溶液的制備。準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥至恒重的藥材0.25 g 于圓底燒瓶中,加入20 mL 35%乙醇-20%硫酸銨雙水相提取劑,搖勻,置于微波爐中。在功率420 W下萃取25 min。靜置,待溶液分相后,取出上相在60 ℃下水浴揮干,殘?jiān)眉状既芙?,定容?0 mL,作為供試品溶液。
1.2.2蘆丁對(duì)照品溶液的制備。精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品20.85 mg置于100 mL容量瓶中,加入無(wú)水乙醇溶液、搖勻,稀釋至刻度,配制成0.208 5 mg/mL對(duì)照品溶液。
1.2.3測(cè)定波長(zhǎng)的選擇。精密吸取一定量的蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液于2個(gè)10 mL的容量瓶中,分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL,搖勻,放置6 min,再加10%硝酸鋁溶液0.3 mL,搖勻,放置6 min,再加入4%氫氧化鈉溶液4 mL,后用無(wú)水乙醇定容至刻度,搖勻,以相應(yīng)試劑作為空白對(duì)照,在200~800 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描,選擇最佳測(cè)定波長(zhǎng)。
1.2.4方法學(xué)考察。
1.2.4.1線(xiàn)性關(guān)系考察。精密吸取“1.2.2”的蘆丁對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL,置于10 mL容量瓶中,按照“1.2.3”方法,自“分別加入5%亞硝酸鈉溶液”起依法測(cè)定其吸光度,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)、吸光度(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
1.2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取“1.2.2”的蘆丁對(duì)照品溶液和“1.2.1”的供試品溶液各1.0 mL,按照“1.2.3”方法,自“分別加入5%亞硝酸鈉溶液”起,分別在0、5、10、15、20、25、30 min測(cè)定其吸光度,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值。
1.2.4.3精密度試驗(yàn)。精密吸取“1.2.1”的供試品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中,按照“1.2.3”方法,自“分別加入5%亞硝酸鈉溶液”起依法測(cè)定吸光度,連續(xù)測(cè)定6次,計(jì)算RSD值。
1.2.4.4重復(fù)性試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥的龍膽藥材0.25 g各6份,按“1.2.1”方法進(jìn)行提取制備。精密吸取1.0 mL提取液,按“1.2.3”方法進(jìn)行測(cè)定,并計(jì)算RSD值。
1.2.4.5加樣回收率試驗(yàn)。準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥的龍膽藥材0.25 g各6份,分別加入一定量的蘆丁對(duì)照品,按“1.2.1”方法進(jìn)行提取,精密吸取1.0 mL提取液,按“1.2.3”方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算總黃酮的回收率。
2結(jié)果與分析
2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇按照“1.2.3”操作,結(jié)果表明,對(duì)照品與樣品溶液在505 nm處有最大吸收,故選擇505 nm為最佳測(cè)定波長(zhǎng)。
2.2線(xiàn)性關(guān)系考察按照“1.2.4.1”操作,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)、吸光度(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為A=10.68C-0.002(R2=0.999),表明蘆丁對(duì)照品在10.4~73.0 μg/mL其吸光度與濃度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
2.3穩(wěn)定性按照“1.2.4.2”操作,發(fā)現(xiàn)蘆丁對(duì)照品和藥材提取液顯色后在30 min內(nèi)穩(wěn)定,其RSD值分別為0.22%和0.30%,表明蘆丁對(duì)照品和提取液中的黃酮類(lèi)化合物在30 min內(nèi)保持穩(wěn)定。
2.4精密度按照“1.2.4.3”操作,計(jì)算得RSD值為0.30%,表明儀器精密度良好。
2.5重復(fù)性按照“1.2.4.4”操作,計(jì)算RSD值為1.31%,表明該方法的重復(fù)性好。
2.6加樣回收率由表1可知,平均回收率為99.6%,RSD值為2.27%,說(shuō)明該方法回收率高,滿(mǎn)足分析測(cè)定的要求。
3結(jié)論與討論
紫外可見(jiàn)分光光度法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單、應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。該試驗(yàn)采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色劑與龍膽中總黃酮發(fā)生絡(luò)合反應(yīng),生成穩(wěn)定的吸光物質(zhì),通過(guò)紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)龍膽中的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,考察了方法的精密度、重現(xiàn)性及加樣回收率,測(cè)定結(jié)果的RSD值均在要求的范圍之內(nèi),表明該方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便,可以用于龍膽中總黃酮含量的測(cè)定。
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