李向梅，劉瓊波，白宏芬，劉增軍，楊彝華

（楚雄州林業(yè)科學(xué)研究所，云南 楚雄 675005）

塊菌與板栗培育菌根苗技術(shù)探討*

李向梅，劉瓊波，白宏芬，劉增軍，楊彝華**

（楚雄州林業(yè)科學(xué)研究所，云南 楚雄 675005）

印度塊菌（Tuber indicum Vittadini）、夏塊菌（Tuber aestivum Vittadini） 和白塊菌（Tuber panzhihuanense Deng&Wang）是經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的菌根食用菌。通過(guò)對(duì)印度塊菌、夏塊菌和白塊菌與板栗（Castanea mollissima Blume）合成菌根苗的技術(shù)進(jìn)行探討，結(jié)果表明使用印度塊菌、夏塊菌和白塊菌孢子液接種板栗樹(shù)苗，10個(gè)月后均能形成大量外生菌根。菌根苗移栽后，接種夏塊菌的板栗苗苗高最高，與接種白塊菌和印度塊菌的板栗苗相比高差異顯著，但接種白塊菌的板栗苗與接種印度塊菌的板栗苗相比苗高差異不顯著。接種夏塊菌的板栗苗與接種白塊菌板栗苗間地徑差異不顯著，二者與接種印度塊菌的板栗苗間地徑差異均顯著。

印度塊菌；夏塊菌；白塊菌；板栗樹(shù)；無(wú)菌苗；共生真菌

印度塊菌 （Tuber indicum Vittadini）、夏塊菌（T.aestivum Vittadini） 和白塊菌 （T.panzhihuanense） 均屬于子囊菌綱 （Ascomycets） 塊菌目（Tubrales） 塊菌科（Tuberaceae） 塊菌屬（Tuber），是一類(lèi)經(jīng)濟(jì)價(jià)值和食用價(jià)值都較高的菌根食用菌，成熟時(shí)香味很濃，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景[1]。塊菌能與多種樹(shù)木共生，在森林生態(tài)系統(tǒng)中占據(jù)重要地位，因其生長(zhǎng)的特殊性，以及采挖時(shí)對(duì)菌塘及生態(tài)環(huán)境的嚴(yán)重破壞，造成產(chǎn)量急劇下降，僅靠野生生產(chǎn)，產(chǎn)量已不能滿(mǎn)足市場(chǎng)需求[2]。通過(guò)合成菌根苗造林來(lái)實(shí)現(xiàn)塊菌半人工栽培，是塊菌培育的有效措施。目前已有一些研究報(bào)道[3-7]，蘇開(kāi)美等[5]報(bào)道使用印度塊菌、夏塊菌孢子液接種化香樹(shù)苗（Platycarya strobilacea Sieb．et Zucc．），第3個(gè)月發(fā)現(xiàn)已形成根尖淡乳色，基部淡黃色、黃褐色的外生菌根。張小雷等[6]報(bào)道使用印度塊菌孢子液接種園葉楊樹(shù)苗（Populus bonatii Levl） 后，第1個(gè)月至第2個(gè)月可形成淡黃色、黃褐色外生菌根。

楚雄州是野生塊菌主產(chǎn)區(qū)之一，為保護(hù)塊菌資源，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，我們借鑒國(guó)內(nèi)外人工培育塊菌技術(shù)的成功經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)行塊菌的仿生態(tài)栽培研究，探討印度塊菌、夏塊菌、白塊菌與板栗的共生關(guān)系，培育塊菌菌根苗，以期為塊菌菌根苗的培育技術(shù)提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 半無(wú)菌苗的培育

1．1．1 共生樹(shù)種選擇

選擇與塊菌具有共生關(guān)系的板栗（Castanea mollissima Blume）進(jìn)行接種試驗(yàn)。

1．1．2 基質(zhì)準(zhǔn)備

將蛭石、草炭以體積比為1:1混合拌勻，加入適量水拌潮濕，含水量約28%，即基質(zhì)捏起成團(tuán)，松手后散開(kāi)為宜，高溫高壓（121℃、110 kPa）滅菌2 h，冷卻備用。

1．1．3 育苗盤(pán)和盆缽消毒

育苗盤(pán)和盆缽均用5‰高錳酸鉀溶液浸泡40 min，取出后用無(wú)菌水沖洗3次。

1．1．4 育苗

2010年9月至10月，板栗種子采用水選法除去空癟種子后放入30%雙氧水中滅菌30 min，撈起用無(wú)菌水沖洗后播入盛有滅菌基質(zhì)的盆缽或育苗盤(pán)中，使用冷卻后的開(kāi)水或蒸餾水澆灌，置于溫室中培育。2011年開(kāi)春，當(dāng)幼苗主根系長(zhǎng)5 cm～10 cm，側(cè)根發(fā)達(dá)后開(kāi)始接種。

1.2 接種前準(zhǔn)備

1．2．1 材料準(zhǔn)備

印度塊菌 （Tuber indicum）、夏塊菌 （Tuber aestivum）和白塊菌（Tuber panzhihuanense） 成熟子實(shí)體，酒精燈1盞，小刀2把，剪刀2把，塑膠片，乳膠手套10雙，30倍放大鏡1個(gè)。

1．2．2 接種液的配制

果汁機(jī)用75%酒精擦拭后，無(wú)菌水沖洗，反復(fù)3次。成熟塊菌用自來(lái)水洗凈后，再用75%酒精擦拭干凈，無(wú)菌解剖刀切成小塊，放入準(zhǔn)備好的果汁機(jī)中，加入適量無(wú)菌水，開(kāi)啟果汁機(jī)攪碎，加無(wú)菌水稀釋成10%懸浮液，倒入已滅菌的瓶中，密封，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．3 接種基質(zhì)配制

經(jīng)過(guò)滅菌的基質(zhì)中加入適量水拌潮濕，加石灰調(diào)pH7～7．5，使基質(zhì)捏起成團(tuán)，松手后散開(kāi)為好。

1．2．4 膠片和育苗盤(pán)準(zhǔn)備

根據(jù)育苗盤(pán)穴的大小，將透明膠片剪成適合的大小，置入雙氧水中滅菌40 min，取出，滅菌水沖洗干凈備用。育苗盤(pán)消毒同1．1．3。

1.3 接種

將配制好的基質(zhì)平鋪于經(jīng)過(guò)滅菌的膠片上，取出半無(wú)菌苗，根部置于基質(zhì)中部，使根充分伸展開(kāi)。

用吸管吸取10 mL的孢子懸浮液，淋于根上包好膠片，膠片松緊適合，使基質(zhì)不會(huì)散落。

依次放入準(zhǔn)備好的育苗盤(pán)內(nèi)，澆適量的蒸餾水，置于溫室內(nèi)培養(yǎng)。注意水不能澆太多，否則會(huì)沖走塊菌孢子。

1.4 接種后管理

接種后的管理主要是控制基質(zhì)濕度，適當(dāng)通風(fēng)、透氣，保持一定的溫度和空氣濕度。

1．4．1 澆水

培養(yǎng)期間使用冷開(kāi)水或蒸餾水澆灌，保持基質(zhì)濕潤(rùn)。

1．4．2 溫度

夏季需遮陰處理，溫室內(nèi)保持平均溫度18℃，最高溫度不超過(guò)32℃，最低不低于1℃。

1．4．3 濕度

溫室內(nèi)平均濕度64%，最大濕度不超過(guò)96%，最小濕度不低于34%。

1.5 菌根檢驗(yàn)

1．5．1 菌根檢驗(yàn)時(shí)間

苗木接種后1個(gè)月～2個(gè)月開(kāi)始進(jìn)行檢查，每隔1個(gè)月檢查1次。

1．5．2 菌根檢驗(yàn)步驟

75%酒精擦拭雙手3次，一手捂緊包裹苗的膠片輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，取出膠片包裹的菌根苗置于另一手內(nèi)，膠片松開(kāi)，用30倍放大鏡觀察外露根系的菌根發(fā)育和形態(tài)，感染其他雜菌的菌根苗需立即移除，以免擴(kuò)大污染。

1．5．3 菌根苗出栽

菌根苗于2013年7月種植于昆明小哨，栽植密度4 m×4 m。

1.6 菌根拍照和數(shù)據(jù)分析

將典型的外生菌根用無(wú)菌小鑷子取下，在顯微鏡下用毛刷刷掉泥土，蒸餾水清洗干凈，將根系直接放在體式顯微鏡下觀察菌根形態(tài)，在80倍下觀察外延菌絲，記錄其特征并照相。菌根苗數(shù)據(jù)采用SPSS 17．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌根特征

2011年4月接種白塊菌190株，接種夏塊菌94株，接種印度塊菌1 400株。于當(dāng)年7月白塊菌檢測(cè)到菌根，印度塊菌檢測(cè)到少量菌根，夏塊菌未檢測(cè)到。2012年2月，印度塊菌、夏塊菌、白塊菌均檢測(cè)到大量菌根。解剖鏡下拍攝的菌根形態(tài)，印度塊菌與板栗形成具剛毛的菌根（圖1A），夏塊菌與板栗形成梳子狀的菌根（圖1B），白塊菌與板栗形成頂端膨大如蝴蝶觸角狀的菌根（圖1C）。

2.2 菌根苗出栽

2015年11月，分別觀測(cè)3種塊菌各48株菌根苗苗高（cm）、地徑（mm），觀測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 3種塊菌與板栗形成的菌根形態(tài)Fig．1 Mophology of mycorrizal seeding of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

表1 3種塊菌與板栗合成菌根苗參數(shù)Tab．1 Parameters of mycorrizal seedling of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

從表1中可看出，3種塊菌與板栗合成菌根苗單因素方差分析結(jié)果顯示，板栗苗苗高差異顯著（F= 5．14，df=2 138，P＜0．001），板栗地徑差異顯著（F= 4．56，df=2 138，P＜0．05）。接種夏塊菌的板栗苗苗高最高為117．50 cm，接種白塊菌的板栗苗居中為99．60 cm，接種印度塊菌的板栗苗最矮為94．04 cm；接種夏塊菌的板栗苗與接種白塊菌和印度塊菌的板栗苗苗高差異顯著（P＜0．05），但接種白塊菌的板栗苗與接種印度塊菌的板栗苗相比平均苗高差異不顯著（P＞0．05）。接種夏塊菌的板栗苗平均地徑最大為25．59 mm，接種白塊菌板栗苗平均地徑次之為25．57 mm，二者差異不顯著，接種夏塊菌和白塊菌的板栗苗平均地徑與接種印度塊菌的板栗苗平均地徑間差異均顯著（P＜0．05）。因此，3種塊菌均可用于與板栗苗合成外生菌根苗。

3 結(jié)論

據(jù)報(bào)道，塊菌可以與化香樹(shù)、圓葉楊樹(shù)等形成外生菌根[3-7]。本研究結(jié)果表明，塊菌可以與板栗形成較好的外生菌根。板栗屬殼斗科（Fagaceae）栗屬（Castanea Mill．）植物，作為印度塊菌、夏塊菌和白塊菌的寄主，在塊菌栽培研究中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

[1]胡弘道．塊菌（松露）之培育與食譜[M]．臺(tái)北：華香園出版社，2010．

[2]蘇開(kāi)美．云南永仁縣萬(wàn)馬鄉(xiāng)塊菌生態(tài)環(huán)境調(diào)查研究[J]．中國(guó)食用菌，2005，24（4）：12-13．

[3]胡弘道，蘇開(kāi)美，柴紅梅，等．夏塊菌與青剛櫟形成外生菌根形態(tài)的研究[J]．云南植物研究，2011，32（6）：489-494．

[4]胡弘道．塊菇與林木共生關(guān)系之研究(II)4號(hào)塊菇之特征及其與夏塊菇之菌根合成[J]．臺(tái)大實(shí)驗(yàn)林研究報(bào)告，1987，1（3）：17-26．

[5]蘇開(kāi)美，李樹(shù)紅，楊麗芬，等．印度塊菌、夏塊菌與化香樹(shù)合成菌根苗技術(shù)初探[J]．中國(guó)食用菌，2012，31（3）：10-12．

[6]張小雷，李樹(shù)紅，蘇開(kāi)美，等．印度塊菌與圓葉楊合成菌根苗技術(shù)初探[J]．中國(guó)食用菌，2011，30（6）：18-20．

[7]GENG Li-ying,WANG Xiang-Hua,YU Fu-Qiang,et al．Successful mycorrhizal synthesis of Tuber indicum with two indigenous hosts and their recognition[J]．Acta Botanica Yunnanica,2009,Suppl(XVI):29-36．

Techniques for the Synethesis of Mycorrizal Seeding of Castanea mollissima with Tuber

LI Xiang-mei,LIU Qiong-bo,BAI Hong-fen,LIU Zeng-jun,YANG Yi-hua
(Forest Institute of Chuxiong Prefecture,Chuxiong 675005,China)

Tuber indicum,T.aestivum and T．sp．a(chǎn)re mycorrizal mushrooms with high economic value．In this paper,the production technique for the mycorrhizal seedling of Castanea mollissima with T.indicum,T.aestivum and T．sp．was studied．The results showed that T.indicum,T.aestivum and T．sp．formed large number of mycorrizal seedlings on the chestnut seedlings after ten months inoculated．After transplanting seedlings,the seedling inculated with T.aestivum was the higest,there was significant difference with the seedlings inculated with T.indicum and T．sp．,but there was no significant difference with the seedlings inculated with T．sp．a(chǎn)nd T.indicum．It had no significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.aestivum and T．sp．,but they had significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.indicum．

Tuber indicum;Tuber aestivum;Tuber sp．;Castanea mollissima;semi-aseptic seedling;symbiotic fungi

S646.9

A

1003-8310（2017）04-0032-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．008

國(guó)家林業(yè)局科技推廣示范項(xiàng)目項(xiàng)目（2009TQYN004）。

李向梅（1974-），女，本科，林業(yè)工程師，主要從事野生食用菌保育及規(guī)范采收實(shí)用技術(shù)研究及推廣示范。E-mail: 1344421460＠qq．com

**通信作者：楊彝華（1969-），女，碩士，正高級(jí)工程師，主要從事野生食用菌為主的林下資源開(kāi)發(fā)利用研究及技術(shù)推廣示范。E-mail: yangyh_009＠163．com

2017-05-11