周光中 杜榮增 廖德寧

(江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，鎮(zhèn)江212000)

CD64的表達(dá)水平在川崎病診療中的作用①

周光中 杜榮增②廖德寧③

(江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，鎮(zhèn)江212000)

川崎病( Kawasaki disease， KD)又稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種原因不明的急性發(fā)熱出疹性疾病，其主要危害為其心血管并發(fā)癥，特別是冠狀動(dòng)脈損害[1]。川崎病如果不能及時(shí)治療，20%～25%的患兒會(huì)發(fā)生心血管損害，導(dǎo)致冠脈擴(kuò)張、冠脈瘤、冠狀動(dòng)脈狹窄甚至閉塞(心肌梗死)。 如果及時(shí)確診，并使用靜脈注射免疫球蛋白(Intravenous immune globulin,IVIG)治療后，可以有效降低動(dòng)脈異常的風(fēng)險(xiǎn)[2]。當(dāng)前川崎病的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)，沒有一個(gè)明確的生物標(biāo)志物可以明確標(biāo)識(shí)川崎病的發(fā)生，而且由于川崎病早期的臨床癥狀不典型，尤其是在出現(xiàn)指(趾)端脫皮之前，給早期治療帶來困難。本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞儀定量分析了川崎病患兒和其他非川崎病發(fā)熱患兒發(fā)熱階段以及正常兒童的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中CD64的表達(dá)水平差異，并記錄在使用IVIG治療實(shí)施前后該指標(biāo)的變化情況，目的是探討CD64能否作為川崎病的診斷指標(biāo)，是否可以作為一個(gè)衡量川崎病治療效果的一個(gè)生物標(biāo)識(shí)物。

1 資料與方法

本實(shí)驗(yàn)選取了2013年9月至2016年8月在我院兒科收治的31名具有發(fā)熱癥狀并具有某些川崎病臨床表現(xiàn)的患兒，其中16名最終被診斷為川崎病，命名為川崎病組，未被診斷為川崎病的命名為發(fā)熱對(duì)照組(15例)，同時(shí)選取健康兒童10名，作為健康對(duì)照組。

抽取了所有兒童送診時(shí)的血液樣本，對(duì)川崎病患兒進(jìn)行IVIG治療，治療1～2 d后以及治療20 d后，抽取其血液用以分析。

所有的血液樣品均使用流式細(xì)胞儀定量分析其中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞中CD64的表達(dá)水平，所用的流式細(xì)胞儀(FASCalibur)及試劑(熒光抗體及標(biāo)準(zhǔn)熒光微球)均來自于BD Biosciences 公司，方法參考文獻(xiàn)[3]。

對(duì)于川崎病確診患兒，我們測(cè)量其送診時(shí)及治療之后血液血清中G-CSF的表達(dá)，G-CSF的測(cè)量使用的是武漢華美的ELISA試劑盒，酶標(biāo)儀采用美國(guó)biotek ELx800。

2 結(jié)果

2.1 CD64在各組樣本的中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞中的表達(dá) 我們首先檢測(cè)了CD64在各組兒童在送診時(shí)血液中的中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，在中性粒細(xì)胞中，川崎病患者的CD64的表達(dá)水平為(13 276±6 531)個(gè)/中性粒細(xì)胞，在單核細(xì)胞中，川崎病患者CD64的表達(dá)水平為(46 358±14 589)個(gè)/單核細(xì)胞， 而在正常對(duì)照組中，其表達(dá)水平分別為(1 197±392)個(gè)/中性粒細(xì)胞和(15 072±6 035)個(gè)/單核細(xì)胞。在發(fā)熱對(duì)照組(非川崎病發(fā)熱組)中，CD64的表達(dá)水平為(3 029±1 080)個(gè)/中性粒細(xì)胞和(22 035±9 960)個(gè)/單核細(xì)胞。這表明川崎病患者在發(fā)熱階段，在中性粒細(xì)胞以及單核細(xì)胞中CD64的表達(dá)水平相對(duì)于非川崎病發(fā)熱組以及正常對(duì)照組明顯上升，并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 CD64在川崎病患兒IVIG治療前后的表達(dá) 在IVIG治療1～2 d后，川崎病患兒的CD64表達(dá)水平下降為(6 214±2 073)個(gè)/中性粒細(xì)胞和(39 629±8 814)個(gè)/單核細(xì)胞；在治療20 d后，川崎病患兒的CD64表達(dá)水平下降為(1 884±472)個(gè)/中性粒細(xì)胞和(18 216±5 083)個(gè)/單核細(xì)胞，相比于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這表明IVIG治療會(huì)迅速降低患兒CD64在中性粒細(xì)胞中的表達(dá)水平，但對(duì)于單核細(xì)胞，CD64降低的速度相對(duì)緩慢， 需要較長(zhǎng)時(shí)間才有顯著的下降。

2.3 G-CSF在川崎病患兒中的表達(dá)以及治療前后的表達(dá)差異 有研究表明， G-CSF可以提高CD64的表達(dá)水平，并且G-CSF與冠狀動(dòng)脈損傷有關(guān)聯(lián)。 檢測(cè)了患兒在發(fā)熱送診時(shí)血清中G-CSF的表達(dá)，結(jié)果表明，G-GSF在確診為川崎病患兒中的表達(dá)要高于對(duì)照組并且在IVIG治療后，該水平會(huì)隨著治療時(shí)間從(38.0±25.1)pg/ml下降到(10.2±6.1)pg/ml(治療2 d后)，再下降至(3.3±1.0)pg/ml(治療20 d 后)，與CD64在中性粒細(xì)胞中的表現(xiàn)情況類似。

3 討論

川崎病是一種常見的兒童心血管炎癥性疾病，目前還沒有一個(gè)可靠的病理學(xué)生化指標(biāo)來診斷川崎病的發(fā)生及跟蹤治療效果。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了川崎病患者中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中CD64水平的表達(dá)，來探討CD64在川崎病診斷和治療中的表達(dá)水平是否有顯著的變化。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，川崎病患兒中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中CD64表達(dá)水平在川崎病早期發(fā)熱階段，會(huì)有顯著的上升，并且在使用IVIG治療后，CD64的水平會(huì)逐漸下降，這表明，CD64在中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中的表達(dá)水平可以作為川崎病診斷以及評(píng)價(jià)治療效果的一個(gè)標(biāo)記物。數(shù)據(jù)還表明，在所有發(fā)熱送診兒童中，CD64的表達(dá)水平相對(duì)于正常兒童均有上升，但是川崎病患兒的中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞中，CD64的表達(dá)水平上升程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非川崎病發(fā)熱患兒中CD64的表達(dá)升高水平，這種升高水平的差異可能以作為川崎病診斷的一個(gè)參考指標(biāo)。

大劑量的IVIG聯(lián)合使用阿司匹林是一個(gè)常用的川崎病標(biāo)準(zhǔn)治療方案，能夠極大降低冠狀動(dòng)脈病變的發(fā)生，并降低全身的炎癥程度。本研究結(jié)果表明， 使用IVIG治療處理后，川崎病患兒的CD64水平會(huì)有顯著的下降，這與Abe等[4]的研究之相一致。有研究表明，CD64下降原因可能是IVIG抑制了免疫細(xì)胞的活化相關(guān)[5]。中性粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞可以通過其表面的FcgR與含有IgG的免疫復(fù)合物接合后被激活，從而使其對(duì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生損傷[6]。綜上所述，CD64可能參與了這些炎癥反應(yīng)，并且在KD的發(fā)病過程中發(fā)揮一定作用。粒細(xì)胞集落刺激因子G-CSF是由免疫細(xì)胞產(chǎn)生的，引導(dǎo)細(xì)胞增殖分化為成熟的粒細(xì)胞。川崎病患者血清中G-CSF水平會(huì)升高，與冠狀動(dòng)脈病變相關(guān)[7，8]。在川崎病患者中，有冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張的患者血清中G-CSF的水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于沒有冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張癥狀的患者血清中G-CSF的表達(dá)水平。在惡性腫瘤患者中，使用G-CSF治療后，中性粒細(xì)胞會(huì)大量表達(dá)與IgG(CD64)具有高度親和力的受體[9]。本研究表明，在川崎病患兒中，G-CSF水平會(huì)上升，在免疫球蛋白治療后，G-CSF水平會(huì)下降，這與CD64在這些患兒中的表現(xiàn)類似。這個(gè)結(jié)果表明，在川崎病患兒中，CD64表達(dá)水平的上升與血清中G-CSF濃度的升高具有很強(qiáng)的相關(guān)性，CD64水平的上升可能受到G-CSF因子的調(diào)控。

綜上所述，CD64的表達(dá)水平可以作為一個(gè)川崎病診斷及治療效果的參考指標(biāo)， CD64水平的變化可能與G-CSF因子有一定的相關(guān)性。

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[收稿2016-09-07 修回2016-11-18]

(編輯 張曉舟)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.07.026

周光中(1974年-)，男，醫(yī)學(xué)碩士，副主任醫(yī)師，主要從事兒童川崎病、性早熟及矮小癥的診斷和治療方面的研究，現(xiàn)工作于揚(yáng)州市江都人民醫(yī)院兒科。

及指導(dǎo)教師：杜榮增(1962年-)，男，醫(yī)學(xué)博士，主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事兒童先心病的介入治療、心律失常的射頻消融、心臟病的起搏治療、心臟電生理檢查等方面的研究。

R725.4

A

1000-484X(2017)07-1082-02

①本文為鎮(zhèn)江市科技計(jì)劃(社會(huì)發(fā)展)項(xiàng)目(SH2015036)。

②江蘇大學(xué)附屬江濱醫(yī)院心內(nèi)科，鎮(zhèn)江212000。

③上海第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院心內(nèi)科,上海200001。