余思菲 吳長(zhǎng)有

(中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院免疫研究所，廣東省器官捐獻(xiàn)和移植免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510080)

·專題綜述·

組織定居記憶性T細(xì)胞的免疫學(xué)特征研究進(jìn)展①

余思菲 吳長(zhǎng)有

(中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院免疫研究所，廣東省器官捐獻(xiàn)和移植免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510080)

記憶性T細(xì)胞通過(guò)表達(dá)或不表達(dá)趨化因子受體CCR7和血管L-選擇素CD62(CD62L)來(lái)實(shí)現(xiàn)在機(jī)體外周血和淋巴組織間的循環(huán)，分為中央型記憶性T細(xì)胞(Central memory T cells,TCM)和效應(yīng)型記憶性T細(xì)胞(Effector memory T cells,TEM)[1,2]。一般情況下TCM細(xì)胞表達(dá)CCR7和CD62L，主要分布于外周組織免疫器官和淋巴結(jié)，當(dāng)再次受抗原刺激時(shí)可迅速分裂增殖和分化；TEM細(xì)胞低水平表達(dá)或不表達(dá)CCR7和CD62L，主要存在于非淋巴組織和器官，參與周身循環(huán)，可遷移至外周炎癥組織發(fā)生速發(fā)性效應(yīng)功能。組織定居記憶性T細(xì)胞(Tissue-resident memory T cells,TRM)則不表達(dá)CCR7和CD62L，高表達(dá)CD69和/或CD103且不參與體循環(huán)[1,3,4](圖1)。早在2001年，就有文獻(xiàn)報(bào)道小鼠流感病毒感染后，肺中定居著一群長(zhǎng)壽命的CD8+T細(xì)胞。李斯特菌和水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)感染后，抗原特異性CD8+T細(xì)胞可遷移至非淋巴結(jié)組織并長(zhǎng)期存活[5,6]。Gebhardt[7]和Walkim[8]等團(tuán)隊(duì)先后在LCMV感染的小腸黏膜和HSV感染的背根神經(jīng)節(jié)及皮膚中發(fā)現(xiàn)，記憶性CD8+T細(xì)胞在感染后可停留于此而不參與血液循環(huán)。此后，人們?cè)谄つw、腸黏膜、肺組織、陰道黏膜G[7]和W[8]甚至大腦等組織中先后鑒定出具有同樣特征和功能的記憶性T細(xì)胞亞群，即TRM細(xì)胞。在過(guò)去十幾年中，我們實(shí)驗(yàn)室對(duì)人呼吸系統(tǒng)中多種淋巴細(xì)胞亞群的記憶性細(xì)胞的免疫學(xué)功能進(jìn)行了全面的研究，包括正常人外周血、鼻黏膜、結(jié)核性胸水等[9-12]。本文將結(jié)合國(guó)際上最新的研究成果和本實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)研究結(jié)果，從表型、網(wǎng)絡(luò)分化調(diào)控機(jī)制、功能等方面討論TRM細(xì)胞的免疫學(xué)特征。

1 TRM細(xì)胞的表型特征及組織定居

TCM和TEM細(xì)胞參與體循環(huán)，是機(jī)體監(jiān)視、預(yù)防和及時(shí)清除病原微生物再感染的關(guān)鍵[13,14]。然而，不同于TCM和TEM細(xì)胞，TRM細(xì)胞不表達(dá)趨化因子受體CCR7和歸巢分子CD62L，不參與體循環(huán)，而是長(zhǎng)期定居于某特定組織中，在局部組織中發(fā)揮快速而關(guān)鍵的保護(hù)性免疫應(yīng)答。

除了不表達(dá)CCR7和CD62L外，不同組織中TRM細(xì)胞的表型特征具有明顯的異質(zhì)性[15]。我們?nèi)”窍⑷?Nasal polyps,NPs)、肺正常組織(lung normal tissue)、腸道淋巴結(jié)(lymph nodes)、扁桃體(tonsil)和外周血等樣本，分離其中的單個(gè)核細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)分析記憶性(CD45RO+)T細(xì)胞的表型(圖2)。與國(guó)際報(bào)道一致，結(jié)果顯示鼻息肉、肺組織和淋巴結(jié)等低表達(dá)或不表達(dá)CD62L和CCR7，外周血中CD69和CD103的表達(dá)水平較低；鼻息肉、肺組織、扁桃體和淋巴結(jié)中的T細(xì)胞高表達(dá)CD69，鼻息肉、肺組織和扁桃體部分CD69+細(xì)胞表達(dá)CD103，其中以CD8+T細(xì)胞表達(dá)較高；淋巴結(jié)僅CD8+T細(xì)胞表達(dá)低水平的CD103。由此可見(jiàn)，特定組織定居的TRM細(xì)胞均高表達(dá)CD69分子，部分表達(dá)整合素E鏈(CD103)[15-17]。

圖1 記憶性T細(xì)胞的形成和體內(nèi)循環(huán)Fig.1 Development and recirculation of memory T cellsNote: Naive T cells (TN cells) are activated by antigen presented by antigen presenting cells (APCs),and develop into effector T cells (TEff cells) to play immunological effects.More than 90% of TEff cells enter programmed apoptosis,only 5 to 10% cells develop into long-lived memory cells.Effector memory T cells do not express CCR7 and CD62L in nonlymphoid tissues;central memory T cells express CCR7 and CD62L,mostly in peripheral lymphoid tissues and lymph nodes;both of TCM and TEM cells can recirculate from peripheral blood to second lymphoid organs or nonlymphoid tissues.In local tissues,such as skin,intestines,lungs,brain,female reproductive tract,and so on,KLRG1-CD127hi precursor cells differentiate into TRM cells under the induction of inflammatory molecules,the expression of CD69 or CD103 on nonrecirculating TRM cells are up-regulated,and KLF2 and S1PR1 are down-regulated.

CD69是存在于許多不同組織部位TRM細(xì)胞的共同標(biāo)志，如皮膚、肺、胃腸道的TRM細(xì)胞都表達(dá)CD69。最初，人們認(rèn)為CD69是淋巴細(xì)胞早期活化的一個(gè)重要標(biāo)志，與TCR信號(hào)的啟動(dòng)有密切關(guān)系[18]。但是，越來(lái)越多的研究證實(shí)TRM細(xì)胞上高表達(dá)的CD69不依賴于TCR的啟動(dòng)，與TRM細(xì)胞的組織定居密切相關(guān)[19]。有實(shí)驗(yàn)證明，T細(xì)胞上表達(dá)的CD69抑制1-磷酸鞘氨酸受體1(Sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1PR1)的活性[20-22]。在人類和小鼠體內(nèi)1-磷酸鞘氨醇(S1P)的分布水平是梯度分布的，由低到高依次為周圍組織、淋巴結(jié)和血液。一方面，TRM細(xì)胞表面的CD69可結(jié)合到S1PR1的跨膜區(qū)域并促進(jìn)其降解，從而阻止了這些T細(xì)胞識(shí)別S1P梯度的變化使得TRM細(xì)胞能夠長(zhǎng)期定居在組織當(dāng)中。另一方面，組織中低水平的S1P亦影響了外周循環(huán)記憶性T細(xì)胞的進(jìn)入。轉(zhuǎn)錄因子KLF2是調(diào)控S1PR1的上游關(guān)鍵因子，TRM細(xì)胞中觀察到KLF2的表達(dá)水平明顯降低[20]。CD103是TRM細(xì)胞另外一個(gè)重要的標(biāo)志，在CD8+TRM細(xì)胞上的表達(dá)水平明顯高于CD4+T細(xì)胞(圖2)。CD103是與β7結(jié)合的整合素鏈，是屏障組織上皮細(xì)胞上表達(dá)的E鈣黏蛋白的配體[23]。值得注意的是，并不是所有的TRM細(xì)胞均表達(dá)CD103，在腸道黏膜、次級(jí)淋巴結(jié)(脾臟)和肝臟等組織中均發(fā)現(xiàn)CD103-的TRM細(xì)胞[15,24-26]。小鼠病毒感染模型發(fā)現(xiàn)，小鼠近氣道部位定居的TRM細(xì)胞不表達(dá)CD103，而高水平表達(dá)CD69和CD11a[27,28]。在某些組織中，除了定居的TRM細(xì)胞表達(dá)CD103外，組織中定居的固有淋巴樣細(xì)胞(Innate lymphoid cells,ILCs)等其他細(xì)胞亞群也部分表達(dá)CD103[15,29]。我們分離鼻息肉組織中浸潤(rùn)的單個(gè)核細(xì)胞，用多色流式細(xì)胞術(shù)分析淋巴細(xì)胞中CD103+細(xì)胞的亞群(圖 3)。結(jié)果顯示，CD103主要表達(dá)于CD3+的T細(xì)胞中；進(jìn)一步分析CD103+T細(xì)胞中CD4+、CD8+、NKT和γδ T細(xì)胞的百分比，結(jié)果顯示以CD8+T細(xì)胞為主；非T細(xì)胞中，CD103+細(xì)胞以NK和單核細(xì)胞為主要。當(dāng)首先設(shè)門于NK、B、單核細(xì)胞、CD4+、CD8+、NKT和γδ T細(xì)胞中，分析各細(xì)胞亞群中CD103的百分比，結(jié)果顯示各細(xì)胞亞群中均部分表達(dá)CD103，其中以CD8+T細(xì)胞和γδ T細(xì)胞表達(dá)CD103的百分比最高。其他組織是否也存在類似的結(jié)果，還需要進(jìn)一步的研究。

2 TRM細(xì)胞形成的調(diào)控機(jī)制

當(dāng)病原微生物初次入侵機(jī)體，在淋巴結(jié)活化成熟的效應(yīng)性T細(xì)胞游走至炎癥部位，大部分效應(yīng)性T細(xì)胞發(fā)揮作用后會(huì)進(jìn)入一個(gè)程序性的凋亡過(guò)程，僅不到10%的細(xì)胞存活下來(lái)分化成為具有長(zhǎng)壽命的記憶性T細(xì)胞(圖1)。效應(yīng)性T細(xì)胞分化為記憶性T細(xì)胞，與周圍微環(huán)境及其自身轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控、歸巢分子、細(xì)胞因子受體和其他表面分子的表達(dá)密切相關(guān)。已知，細(xì)胞接受TCR信號(hào)的刺激強(qiáng)度越大、炎癥性細(xì)胞因子分泌越多，則分化為記憶性細(xì)胞的能力越低[30-33]。與外周循環(huán)記憶性CD8+T細(xì)胞不同，CD8+TRM細(xì)胞中EOMES和TCF1的表達(dá)降低，同時(shí)T-bet的表達(dá)也降低[19,34]。亦有研究發(fā)現(xiàn)，在肺組織CD103+TRM細(xì)胞的分化與T-bet密切相關(guān)[35]。皮膚中，T-bet的缺失將誘導(dǎo)KLRG-1低表達(dá)的TRM前體細(xì)胞的產(chǎn)生，并促進(jìn)CD103的表達(dá)[19,36]。轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的高低，進(jìn)一步調(diào)控細(xì)胞中其他分子的表達(dá)。klf2GFP轉(zhuǎn)基因熒光示蹤小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，參與調(diào)控S1P1表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子KLF表達(dá)降低后，T細(xì)胞表面S1PR1的表達(dá)明顯降低，使得T細(xì)胞定居于組織部位而無(wú)法游走至外周[20]。細(xì)胞因子TGF-β、IL-33和TNF-α通過(guò)磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)和激酶Akt抑制KLF2的表達(dá)。此外，微環(huán)境中TGF-β與皮膚、腸道和肺組織中CD69+CD103+TRM細(xì)胞的分化密切相關(guān)[19,35,37-39]，而CD103-TRM細(xì)胞的生成不依賴于TGF-β[40]。TGF-β亦可降低T-box轉(zhuǎn)錄因子T-bet和EOMES的表達(dá)，對(duì)皮膚表皮TRM細(xì)胞的形成至關(guān)重要[36]。然而，關(guān)于TGF-β調(diào)控CD69和CD103表達(dá)的分子機(jī)制還不明確。

細(xì)胞因子IL-15被認(rèn)為在維持記憶性T細(xì)胞的穩(wěn)定中發(fā)揮重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)IL-15亦與TRM細(xì)胞的生成和維持有關(guān)。在HSV感染的皮膚中，IL-15的缺失將影響TRM細(xì)胞的生成[36]。在HSV感染前(7～14 d注射IL-15和/或IL-15R的中和抗體，TRM細(xì)胞的生成均將受到抑制。也有研究證實(shí)，IL-15只影響TRM細(xì)胞的分裂增殖而不參與調(diào)控TRM細(xì)胞的存活和維持[41]。除上述提到的細(xì)胞因子TGF-β、IL-33、TNF-α和IL-15參與TRM細(xì)胞的分化和組織定居以外，CD4+T細(xì)胞在組織中對(duì)CD8+TRM細(xì)胞的生成和定居至關(guān)重要[42,43]。Laidlaw等證實(shí)在TRM細(xì)胞形成的早期，未被CD4+T細(xì)胞輔助的CD8+T細(xì)胞無(wú)法正常的定居至氣道上皮，且由于細(xì)胞表面與TGF-β作用的信號(hào)太弱導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞表面CD103的表達(dá)降低。研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子IFN-γ促進(jìn)肺CD103+CD8+TRM細(xì)胞的產(chǎn)生，并降低轉(zhuǎn)錄因子T-bet的表達(dá)而促進(jìn)趨化因子受體CXCR3的表達(dá)。

圖2 不同組織中CD4+和CD8+記憶性T細(xì)胞的表型Fig.2 Phenotypical characteristics of memory CD4+ and CD8+ T cells from different tissuesNote: Mononuclear cells were isolated from nasal polyps, lung tissue,tonsil,lymph node,peripheral blood,and then flow cytometry was used to analyze the co-expression of CD103,CD69,CD62L and CCR7 on CD4+CD45RO+ (A) and CD8+CD45RO+ (B) T cells.

圖3 鼻息肉組織中CD103+細(xì)胞的亞群分析Fig.3 Sub-population analysis of CD103+ T cells in nasal polypsNote: Mononuclear cells were isolated from nasal polyps，and then flow cytometry was used to analyze the sub-populations of CD103+ lymphocytes (A)，and the frequencies of CD103+ on distinct sub-populations were also detected (B).

3 不同組織中的TRM細(xì)胞及其功能特性

在功能方面與TEM和TCM細(xì)胞相比較，TRM細(xì)胞能在病原微生物入侵機(jī)體的早期快速感應(yīng)和識(shí)別抗原物質(zhì)，不需要特異性增殖即可產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫效應(yīng)[15,16]。一方面是TRM細(xì)胞定居位置更接近抗原，大部分抗原通過(guò)皮膚、黏膜等與外界接觸的部位進(jìn)入體內(nèi)后，TRM細(xì)胞能快速感應(yīng)并識(shí)別抗原，不需增殖即可發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，而循環(huán)的記憶性T細(xì)胞則需要經(jīng)過(guò)定位、黏附、滲出的全過(guò)程才能到達(dá)感染部位。此外，TRM細(xì)胞可啟動(dòng)天然免疫而發(fā)揮廣泛的組織抗病毒功能[44]。另一方面TRM細(xì)胞還可通過(guò)產(chǎn)生IFN-γ等細(xì)胞因子來(lái)募集循環(huán)的記憶性T細(xì)胞到達(dá)感染部位[28]。以下，我們將逐一分析皮膚、肺、腸道黏膜和陰道等不同組織中TRM細(xì)胞的基本特征和功能。

3.1 皮膚 正常成年人皮膚表面存在約20億的T細(xì)胞，是整個(gè)血管系統(tǒng)細(xì)胞數(shù)量的2倍之多[45]。人皮膚中定居的T細(xì)胞全部表達(dá)CD45RO，同時(shí)表達(dá)皮膚相關(guān)的歸巢分子CLA和CCR4，而生長(zhǎng)于完全無(wú)菌環(huán)境的小鼠皮膚中T細(xì)胞的數(shù)量則極少[46,47]。TRM細(xì)胞而非其他的循環(huán)記憶性T細(xì)胞在皮膚局部發(fā)揮更為重要和快速的保護(hù)免疫效應(yīng)[7]。同時(shí)，皮膚中的TRM細(xì)胞雖不參與體循環(huán)，卻可以在皮膚局部不斷地游走，快速識(shí)別再次入侵的病原微生物，對(duì)整個(gè)皮膚系統(tǒng)發(fā)揮重要的保護(hù)性作用[48]。在人皮膚組織中，表皮層和真皮層的TRM細(xì)胞在表型上略有差異[37]。表皮中以CD103+CD69+TRM細(xì)胞為主，真皮中以CD103-CD69+TRM細(xì)胞為主要，其中CD103+CD69+TRM細(xì)胞產(chǎn)生更高水平的效應(yīng)性細(xì)胞因子，可快速啟動(dòng)天然免疫細(xì)胞，發(fā)揮廣泛的抗病毒功能。除TRM細(xì)胞外，人和鼠皮膚中部分記憶性T細(xì)胞表達(dá)CCR7和CD62L，為中央型記憶性T細(xì)胞，依賴CCR7的表達(dá)可進(jìn)出皮膚組織參與外周循環(huán)[37,49-51]。

3.2 肺 流感病毒感染小鼠是國(guó)內(nèi)外研究TRM細(xì)胞的形成機(jī)制、表型特征和抗感染作用最早和最常用的模型之一，許多研究發(fā)現(xiàn)鼻滴感染比皮下感染病原體后更容易誘導(dǎo)肺組織產(chǎn)生免疫應(yīng)答和肺TRM細(xì)胞[52,53]。在肺部流感病毒感染中，記憶性CD8+TRM的數(shù)量與抗流感的免疫保護(hù)作用成一定的正相關(guān)性[5,28,54]；同時(shí)，肺部的CD4+TRM細(xì)胞比循環(huán)系統(tǒng)的CD4+記憶性T細(xì)胞在抗流感的免疫保護(hù)作用方面發(fā)揮更重要的作用[42,43]。TGF-β被證實(shí)促進(jìn)CD103的表達(dá)，但是并不依賴于TGF-β活化的下游信號(hào)Smad4，雖然Smad4促進(jìn)效應(yīng)性和循環(huán)記憶性CD8+T細(xì)胞的分化[55]。肺CD4+TRM細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的肺組織趨化性，過(guò)繼轉(zhuǎn)輸給小鼠過(guò)后，肺組織來(lái)源的CD4+TRM細(xì)胞游走并定居于肺組織，比脾臟來(lái)源的記憶性CD4+T細(xì)胞提供更好的保護(hù)作用。選擇性過(guò)表達(dá)IFN誘導(dǎo)轉(zhuǎn)膜蛋白3(IFN-induced transmembrane protein,IFITM3)能夠明顯增強(qiáng)肺組織定居TRM細(xì)胞的抗流感病毒能力[56]。結(jié)核性胸膜炎胸液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞中CD4+和CD8+T細(xì)胞均高表達(dá)CD69分子，與CD69-T細(xì)胞相比較，CD69+T細(xì)胞經(jīng)結(jié)核特異性抗原肽刺激后，產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞因子和顆粒性分子，并表現(xiàn)出功能的多樣性[57,58]。肺纖維化的小鼠模型中，鼻腔內(nèi)疫苗接種，可以恢復(fù)原有的病理特征，疫苗誘導(dǎo)的肺TRM細(xì)胞發(fā)揮了至關(guān)重要的作用[59]。肺部過(guò)敏性疾病中，TRM細(xì)胞在過(guò)敏性哮喘中發(fā)揮的是一個(gè)調(diào)節(jié)作用，與其他的天然免疫細(xì)胞構(gòu)成一個(gè)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)，從而調(diào)控疾病的發(fā)生與發(fā)展[60]。肺部腫瘤中，CD8+CD103+淋巴細(xì)胞是一群腫瘤特異的TRM細(xì)胞，是肺部腫瘤生存和預(yù)后的一個(gè)重要調(diào)控因子[61]。

3.3 腸道黏膜 腸道黏膜組織是許多細(xì)菌和病毒易侵襲的部位，口腔單核細(xì)胞增多性李斯特菌感染機(jī)體后，效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞表達(dá)整合素α4β7和趨化因子受體CCR9并遷移至黏膜組織中，包括腸道黏膜[62,63]。遷移至腸道組織的CD8+T細(xì)胞表達(dá)CD127而不表達(dá)KLRG1，成為記憶性前體效應(yīng)性T細(xì)胞(Memory precursor effector cells,MPECs)。CD127+KLRG1-CD8+T細(xì)胞在內(nèi)源性TGF-β信號(hào)的作用下可快速表達(dá)CD69和CD103分子，其中CD103分子誘導(dǎo)細(xì)胞定居于腸道組織中，但是與TRM細(xì)胞在腸道組織中的長(zhǎng)期定居無(wú)關(guān)[38]。此外，TGF-β信號(hào)也可以誘導(dǎo)α4β7的表達(dá)。與皮膚TRM細(xì)胞類似，腸道上皮層和固有層中TRM細(xì)胞的表型有一定的差異性。上皮層中主要以CD103+CD69+TRM細(xì)胞為主，而固有層中則包含CD103+和CD103-兩群TRM細(xì)胞，在分化調(diào)控機(jī)制上兩群細(xì)胞間也存在一定的差異性[40]。不同于CD103+TRM細(xì)胞的表型和分化條件，固有層中CD103-RM細(xì)胞高表達(dá)Klf2 mRNA、CD69分子、顆粒性殺傷分子Granzyme B和抗凋亡分子Bcl-2，其生成不依賴于TGF-β-TGF-βR信號(hào)及抗原刺激，而與局部炎癥微環(huán)境相關(guān)。CXCR3-CXCL-10信號(hào)誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞遷移至炎癥部位，影響CD103-TRM細(xì)胞的分化和病原體的清除。

3.4 陰道 女性陰道是生殖系統(tǒng)性疾病傳染的主要通道，陰道作為一個(gè)限制性的免疫組織，在沒(méi)有炎癥和感染的情況下阻止活化的T細(xì)胞進(jìn)入[64]。在改進(jìn)HSV-2疫苗的免疫效果研發(fā)中，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)皮下免疫疫苗合并陰道滴注趨化因子CXCR3單抗處理后，陰道黏膜中CD4+和CD8+T細(xì)胞明顯高于單純的皮下免疫組小鼠[65]。處理過(guò)后12周，定居于陰道黏膜中CD8+T細(xì)胞仍然明顯高于單純的皮下免疫組，而CD4+T細(xì)胞無(wú)長(zhǎng)期定居特性。功能研究證實(shí)，陰道黏膜中長(zhǎng)期定居的CD8+T細(xì)胞并不影響陰道中HSV-2的復(fù)制，而是通過(guò)抑制神經(jīng)系統(tǒng)中HSV-2的復(fù)制來(lái)控制感染。同樣，鼻滴免疫胸腺激酶缺陷的HSV-2后，亦可以誘導(dǎo)效應(yīng)性CD8+T細(xì)胞遷移并長(zhǎng)期定居于陰道黏膜，并在HSV-2感染早期發(fā)揮重要的免疫清除作用[66]。人乳頭狀瘤病毒載體經(jīng)陰道免疫2次后，將誘導(dǎo)陰道中聚集大量的抗原特異性CD8+T細(xì)胞[67]。CD8+T細(xì)胞主要分布于陰道黏膜的內(nèi)皮和上皮，高表達(dá)CD103而不表達(dá)CD62L，可在陰道組織中存活6個(gè)月之久，產(chǎn)生效應(yīng)性細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-α，在體內(nèi)表現(xiàn)出顯著的細(xì)胞毒性。誘導(dǎo)陰道內(nèi)CD8+TRM細(xì)胞的產(chǎn)生，成為越來(lái)越多預(yù)防宮頸癌疫苗研發(fā)的關(guān)鍵點(diǎn)，并取得重大的突破[68]。

3.5 其他組織 除上述皮膚、肺、腸道和陰道組織以外，胃內(nèi)皮及淋巴結(jié)、心臟、腎臟和前列腺甚至中樞神經(jīng)腦組織中亦發(fā)現(xiàn)了表達(dá)CD69和/或CD103的TRM細(xì)胞[69]。正常情況下，淋巴細(xì)胞無(wú)法通過(guò)腦屏障，大腦被認(rèn)為是免疫豁免區(qū)。然而，一旦發(fā)生感染，抗原特異性的CD8+T細(xì)胞將進(jìn)入并長(zhǎng)期定居于腦組織中，即腦TRM細(xì)胞[70]。滴鼻免疫水皰性口炎病毒VSV后，CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)至腦組織，在顱內(nèi)樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)的信號(hào)提呈作用下表達(dá)CD103。但是，值得一提的是CD103的表達(dá)不依賴于抗原物質(zhì)。CD103不僅對(duì)腦TRM細(xì)胞的表型特征有顯著的影響，同時(shí)將影響TRM細(xì)胞的功能。腦CD103+TRM細(xì)胞分裂增殖能力弱，不參與外周循環(huán)，組織特異性要求高，一旦從組織中分離后將快速死亡[34,70]?；蚪M學(xué)分析腦CD103+TRM細(xì)胞的調(diào)控分子，與腦CD103-TRM細(xì)胞和脾臟CD103-TRM細(xì)胞相比較，腦CD103+TRM細(xì)胞高表達(dá)效應(yīng)性分子Granzyme B、IL-2Ra和抑制性分子CTLA-4、PD-1，IFITM3的表達(dá)亦增加，轉(zhuǎn)錄因子EOSEM、T-bet和TCF-1表達(dá)下降[34]。此外趨化因子CCL3、CCL4和CXCL10在腦TRM細(xì)胞中的基因表達(dá)水平增加。

4 TRM細(xì)胞與疾病

TRM細(xì)胞對(duì)于局部組織中病原微生物的再感染具有強(qiáng)烈的保護(hù)性免疫應(yīng)答作用，亦參與調(diào)控腫瘤的保護(hù)性免疫應(yīng)答。同時(shí)，TRM細(xì)胞對(duì)變應(yīng)原、自身抗體等病原體具有同樣的免疫效應(yīng)功能，這些抗原特異性的TRM細(xì)胞在局部組織一旦被激活，將造成嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，對(duì)機(jī)體造成傷害[71,72]。由于其組織定居、不參與外周循環(huán)、無(wú)需抗原提成細(xì)胞激活即可發(fā)生快速的免疫效應(yīng)等特征，TRM細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥性疾病在臨床上具有明顯的特征，如病灶界限明顯、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)局部抗炎癥治療明顯有效等。牛皮癬個(gè)典型的皮膚TRM細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，其發(fā)現(xiàn)與臨床抗E-選擇素抗體藥物CDP850的臨床試驗(yàn)和皮膚移植實(shí)驗(yàn)有關(guān)[73,74]。CDP850已證實(shí)可以阻斷血液中的T細(xì)胞游走至皮膚組織中，盡管CDP850的應(yīng)用可以很好地清除體循環(huán)中的T細(xì)胞，但是并不能很好的改善牛皮癬炎癥性病灶。提示，皮膚局部長(zhǎng)久定居的TRM細(xì)胞而非循環(huán)系統(tǒng)來(lái)源的Tc17細(xì)胞(CD8+IL-17+TRM細(xì)胞)和Th22細(xì)胞(CD4+IL-22+TRM細(xì)胞)是頑固性牛皮癬的主要病因[75]。

5 結(jié)語(yǔ)

TRM細(xì)胞廣泛地在各種外周組織中被鑒定及其不同于TEM和TCM細(xì)胞的分子調(diào)控機(jī)制和表型特征，使得人們?cè)絹?lái)越關(guān)注TRM細(xì)胞在臨床的應(yīng)用價(jià)值。特別是抗原特異性TRM細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，對(duì)研發(fā)特異性疫苗的作用價(jià)值不可估量。傳統(tǒng)上，疫苗主要誘導(dǎo)機(jī)體體液免疫產(chǎn)生中和抗體發(fā)揮抗感染作用，但是對(duì)于很多病原體如真菌、胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)、人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)等，細(xì)胞免疫應(yīng)答才是控制感染的關(guān)鍵。如何提高疫苗誘導(dǎo)機(jī)體局部組織中產(chǎn)生穩(wěn)定而持久的抗原特異性TRM細(xì)胞的能力，將是科學(xué)家研發(fā)新型疫苗的重要突破口。目前，人們?cè)谛∈髮?shí)驗(yàn)中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)皮下注射和特異性趨化因子誘導(dǎo)可以促進(jìn)陰道HSV-2和HPV特異性TRM細(xì)胞的生成，該免疫方法同時(shí)不會(huì)引起陰道局部和全身性的炎癥反應(yīng)[65,67]。這些研究基礎(chǔ)，將是人們研發(fā)抗HIV-1疫苗的重要參考依據(jù)。

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[收稿2017-03-07]

(編輯 張曉舟)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.07.030

①本文為國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.31470888)。

余思菲(1987年-)，女，博士，副研究員，主要從事T細(xì)胞的記憶性、功能多樣性、分泌可塑性及臨床意義方面的研究，E-mail:sifei_yu@163.com。

R392.1 R392.2

A

1000-484X(2017)07-1093-08