張群+戚蘭君+徐凱

【摘要】本文建立用高效液相法（HPLC）對(duì)設(shè)備表面的枸櫞酸托法替布?xì)埩舻臋z測(cè)方法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1%醋酸銨溶液-乙腈75∶25為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm。結(jié)果：該方法線性范圍為7μg/ml到43μg/ml，R2=0.9997；回收率為99.5%，取樣回收率為91.0%；且該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、在24小時(shí)內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好，夠準(zhǔn)確的檢測(cè)出設(shè)備表面殘留的枸櫞酸托法替布含量。

【關(guān)鍵詞】高效液相法 HPLC；枸櫞酸托法替布；設(shè)備表面殘留

【中圖分類號(hào)】R971 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）07--02

1.前言

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎目前大多被認(rèn)為是人體自身免疫性疾病，亦是一種慢性的綜合征，表現(xiàn)為外周關(guān)節(jié)的非特異性炎癥。此時(shí)患病關(guān)節(jié)及其周圍組織呈現(xiàn)進(jìn)行性破壞，并致使受損關(guān)節(jié)發(fā)生功能障礙，影響全球0.8%的成人人口[1，2]。人們正越來(lái)越致力于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物的開(kāi)發(fā)。

枸櫞酸托法替布片是由美國(guó)輝瑞制藥公司開(kāi)發(fā)的一種新型的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）的藥物，用于對(duì)氨甲喋呤治療應(yīng)答不充分或不耐受的中至重度活動(dòng)性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎成人患者。[3]作為Janus激酶（JAK）抑制劑，托法替布通過(guò)作用于JAKs來(lái)預(yù)防STATs磷酸化和激活。2012年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)該藥品上市。本文對(duì)設(shè)備表面的枸櫞酸托法替布?xì)埩舻臋z測(cè)方法進(jìn)行了考察研究。

2.方法

2.1 儀器與試劑

儀器：Agilent1260液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；BT125D分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；KQ500E超聲清洗器（中國(guó)昆山市超聲儀器有限公司）。試劑：枸櫞酸托法替布對(duì)照品（自標(biāo)，批號(hào)LFQ170315，含量100%，水分0.13%）；醋酸銨（溫州市化學(xué)用料廠）；醋酸（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（J.TBaker）。

2.2 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Shim-packVP-ODS4.6×150mm5μm）；以0.1%醋酸銨溶液（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0）-乙腈75∶25為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm；進(jìn)樣量為20μl；理論板數(shù)按托法替布峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.3 溶液制備

對(duì)照溶液的制備：取枸櫞酸托法替布對(duì)照品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含枸櫞酸托法替布28.68?g的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

供試品溶液的制備（模擬生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行取樣）：取合適濃度的對(duì)照品溶液適量均勻滴加涂布在面積約為25cm2的不銹鋼板上，待溶液干后，用干凈的棉球（純化水浸潤(rùn)）上下左右方向各擦拭至少3次，然后將棉簽浸在10ml純化水中超聲10min后，取浸出液過(guò)濾，取續(xù)濾液即得。

枸櫞酸托法替布片溶液的制備：取枸櫞酸托法替布片適量，磨成細(xì)粉，精密稱定置量瓶中，加純化水適量，超聲10min，使枸櫞酸托法替布溶解，用純化水稀釋制成每1ml中含枸櫞酸托法替布約28.68μg的溶液。

3.結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性。精密取對(duì)照品溶液（濃度約為28.68μg/ml）20μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。6次對(duì)照品峰面積RSD為0.1%，該系統(tǒng)具有良好適用性。

3.2 專屬性。取空白溶劑、空白輔料溶液、對(duì)照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液進(jìn)行測(cè)定。空白溶劑和空白輔料溶液在托法替布峰位置均無(wú)出峰，對(duì)照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液主峰的保留時(shí)間一致。結(jié)果表明，空白溶劑和輔料空白對(duì)枸櫞酸托法替布主峰沒(méi)有干擾，該方法專屬性強(qiáng)。

3.3 準(zhǔn)確度。取處方量的空白輔料和對(duì)照品分別制成含枸櫞酸托法替布14.34μg/ml、28.68μg/ml和43.02μg/ml的溶液各3份，進(jìn)行測(cè)定。其中50%的回收率為98.4%，100%的回收率為98.6%，150%的回收率為99.5%，9份樣品RSD為0.65%。各濃度的回收率均大于98%，該方法回收率良好。

3.4 取樣回收率。吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液（286.8μg/ml）0.5ml滴加涂布在面積約為25cm2的不銹鋼板上，待溶液干后，用干凈的棉球（純化水溶液浸潤(rùn)，擠去多余水分）按要求的方法進(jìn)行擦拭，然后將棉簽浸在5ml純化水中超聲10min后，取浸出液進(jìn)行測(cè)定。其取樣回收率為91.0%，由此表明該方法能將設(shè)備表面的大部分殘留擦拭下來(lái)。

3.5 線性。取對(duì)照品適量，用純化水配制成濃度分別為7.17μg/ml、14.34μg/ml、21.51μg/ml、28.68μg/ml、35.85μg/ml和43.02μg/ml的溶液，精密吸取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程為y=43288x+2.9833，R=0.9997。在7μg/ml到43μg/ml的濃度范圍，方法線性良好。

3.6 檢測(cè)限。將對(duì)照品溶液進(jìn)行系列稀釋，將稀釋的對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，并將信號(hào)與空白溶劑的信號(hào)進(jìn)行比較，信噪比為3：1時(shí)的濃度即為檢測(cè)限。信噪比為3.6：1時(shí)，檢出限為0.288ng。

3.7 溶液穩(wěn)定性。分別在0h，4h，8h，12h，18h，24h取對(duì)照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液（28.68μg/ml）20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，并以其峰面積計(jì)算RSD%。對(duì)照品溶液和枸櫞酸托法替布片溶液的RSD均為0.1%，在24小時(shí)內(nèi)該兩種溶液均有良好的穩(wěn)定性。

4.結(jié)論

經(jīng)過(guò)上述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其結(jié)果證明該方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高、靈敏度高、線性及溶液穩(wěn)定性均良好，能夠準(zhǔn)確的檢測(cè)出設(shè)備表面殘留的枸櫞酸托法替布含量，能夠?qū)ιa(chǎn)中設(shè)備清潔方法提供真實(shí)可靠的評(píng)價(jià)及數(shù)據(jù)支持。

參考文獻(xiàn)

[1]馬培奇，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物發(fā)展現(xiàn)狀及市場(chǎng)趨勢(shì)[J]，上海醫(yī)藥，第6期，2010年

[2]李克江賈勛超朱同舜，近幾年開(kāi)發(fā)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療藥物[J]，國(guó)外醫(yī)藥（抗生素分冊(cè)），第1期，2003年

[3]陳嬌婷詹怡飛，HPLC法枸櫞酸托法替布的含量[J]，中國(guó)民族民間醫(yī)藥，第24卷，第17期，2015年