許春燕，劉希望，孔曉軍，楊亞軍，秦 哲，李世宏，李劍勇

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室/甘肅省新獸藥工程重點實驗室，甘肅蘭州 730050)

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銀翹藍(lán)芩口服液對雞的安全性試驗

許春燕，劉希望，孔曉軍，楊亞軍，秦 哲，李世宏，李劍勇*

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室/甘肅省新獸藥工程重點實驗室，甘肅蘭州 730050)

依據(jù)獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則，開展銀翹藍(lán)芩口服液對靶動物雞的安全性研究，為其臨床應(yīng)用的安全性提供數(shù)據(jù)資料。按銀翹藍(lán)芩口服液臨床推薦劑量的1、3、5倍連續(xù)飲水給藥7 d，給藥前后，逐只稱重。試驗結(jié)束后采集血液和組織器官，進(jìn)行血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、臟器指數(shù)及病理組織學(xué)觀察。結(jié)果表明，與對照組相比，各給藥組雞只的體重、血常規(guī)、血液生化及臟器指數(shù)等指標(biāo)差異均不顯著(P>0.05)，各組織器官未見明顯的病理組織學(xué)變化。說明銀翹藍(lán)芩口服液飲水給藥對靶動物雞是安全的。

銀翹藍(lán)芩口服液；安全性；雞

銀翹藍(lán)芩口服液是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所多年來對雞傳染性支氣管炎發(fā)病機(jī)制、病程發(fā)展、診斷、治療等方面潛心研究的基礎(chǔ)上，在傳統(tǒng)中獸醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理藥性分析和科學(xué)提取手段，選擇金銀花、連翹、黃芩等多味中藥經(jīng)水煮醇沉制備的一種純中藥復(fù)方制劑。該復(fù)方具有清熱解毒、涼血燥濕、消腫散結(jié)、止咳平喘等功效[1-3]，主要用于治療雞傳染性支氣管炎。

靶動物安全性試驗是觀察不同劑量受試藥物作用于靶動物后從有效作用到毒性作用，甚至到致死作用的動態(tài)變化的過程。該試驗旨在考察受試藥物使用于靶動物的安全性及安全劑量范圍，為進(jìn)一步臨床試驗給藥方案的制定提供依據(jù)。根據(jù)《獸藥研究指導(dǎo)原則匯編(2006年—2011年)》和農(nóng)業(yè)部1596號公告《獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》等5個技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行靶動物雞的安全性評價試驗。本試驗以銀翹藍(lán)芩口服液臨床推薦劑量的1、3、5倍連續(xù)飲水給藥7 d后，觀察給藥雞只的死亡情況和精神狀況，以及血常規(guī)、血液生化、臟器指數(shù)及病理組織學(xué)等方面的變化，以評價銀翹藍(lán)芩口服液對靶動物雞臨床應(yīng)用的安全性和安全劑量[4]，為其臨床安全用藥提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)[5]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥品 銀翹藍(lán)芩口服液，生產(chǎn)批號：20141201，規(guī)格100 mL/瓶，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所委托河南牧翔動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的中試產(chǎn)品。

1.1.2 試驗用動物 3周齡健康海蘭褐蛋用型雞64只。試驗期間使用不含任何藥物的全價顆粒飼料飼喂，自由飲水。

1.1.3 儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C2800 V型血細(xì)胞分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司產(chǎn)品；XL-640型全自動生化分析儀，德國歐霸公司產(chǎn)品；LEICA RM2025型組織切片機(jī)、LEICA TP1020型組織脫水機(jī)，德國Leica公司產(chǎn)品；CK-2型倒置顯微鏡，日本Olympus公司產(chǎn)品；總膽紅素(T-BIL)試劑盒、直接膽紅素(DBIL)試劑盒、總蛋白(TP)試劑盒、白蛋白(ALB)試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒、堿性磷酸酶(ALP)試劑盒、谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶(GGT)試劑盒、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒、肌酸激酶(CK)試劑盒、尿素(BUN)試劑盒、肌酐(CR)試劑盒、葡萄糖(GLU)試劑盒、血清鈣(Ca)試劑盒和血清磷(P)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒及總膽固醇(TCH)等18種試劑盒，寧波美康生物科技股份有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物分組與給藥 64只3周齡海蘭褐蛋用型雞，隨機(jī)分為4組，每組16只，分別為空白對照組及1組、2組、3組，1組、2組、3組即受試藥物推薦劑量1、3、5倍劑量組[6-7]，逐只稱重并記錄，給藥劑量分別為0.5、1.5、2.5 mL。將不同劑量的銀翹藍(lán)芩口服液分別兌入600 mL水中，集中飲用，每天1次，連續(xù)給藥7 d。試驗期間，按常規(guī)飼養(yǎng)條件進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.2.2 臨床觀察 試驗期間，每天觀察受試雞給藥后的臨床癥狀變化，包括采食、飲水、糞便、精神狀態(tài)及死亡情況等。

1.2.3 血常規(guī)和血液生化指標(biāo)檢測 試驗結(jié)束時，所有雞均采集全血適量，肝素鈉抗凝，進(jìn)行血液常規(guī)檢查[8]；同時采集全血適量，4 000 r/min離心10 min分離血清，進(jìn)行血液生化指標(biāo)檢查。

1.2.4 臟器指數(shù)變化和病理組織學(xué)觀察 試驗前后對各組試驗雞逐只稱重，統(tǒng)計體重。試驗結(jié)束后，在空白對照組和各劑量組隨機(jī)挑選5只剖檢，精確稱量心、肝、脾、肺及腎，計算其臟器指數(shù)，并進(jìn)行病理組織學(xué)觀察[9]。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床觀察

連續(xù)給藥7 d后，各受試藥物組與空白對照組相比，雞只精神狀態(tài)良好，糞便無異常，各組均無死亡現(xiàn)象。

2.2 體重及臟器指數(shù)

比較試驗前后各受試藥物組雞和空白對照組雞體重差異性，結(jié)果見表1。與對照組相比，各給藥組的體重差異均不顯著(P>0.05)。臟器指數(shù)結(jié)果見表2，各給藥組雞的臟器指數(shù)與對照組差異不顯著(P>0.05)，表明銀翹藍(lán)芩口服液對雞臟器指數(shù)沒有影響。

表1 銀翹藍(lán)芩口服液對雞體重的影響

2.3 血液常規(guī)檢測結(jié)果

銀翹藍(lán)芩口服液對靶動物雞連續(xù)飲水給藥7 d后，對試驗雞進(jìn)行血常規(guī)檢測，結(jié)果見表3。與空白對照組比較，銀翹藍(lán)芩口服液各劑量組對雞的血液學(xué)指標(biāo)無顯著差異(P>0.05)，表明銀翹藍(lán)芩口服液對靶動物雞的血液常規(guī)指標(biāo)無不良影響。

表2 銀翹藍(lán)芩口服液對雞臟器系數(shù)的影響

表3 銀翹藍(lán)芩口服液對雞血液學(xué)指標(biāo)的影響

2.4 血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果

銀翹藍(lán)芩口服液對靶動物雞連續(xù)飲水給藥7 d后，對試驗雞血液生化指標(biāo)進(jìn)行檢測，結(jié)果見表4。

與空白對照組比較，銀翹藍(lán)芩口服液各劑量組雞只的ALT、AST、BUN、CR、GLU、ALB、TP、T-CH、TG等血液生化指標(biāo)均無顯著差異(P>0.05)。

表4 銀翹藍(lán)芩口服液對雞血液生化指標(biāo)的影響

2.5 病理組織學(xué)觀察

試驗結(jié)束后，隨機(jī)挑選受試藥物劑量組和空白對照組各5只雞進(jìn)行了病理組織學(xué)觀察。剖檢受試動物的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胸腺、法氏囊、肌胃及腺胃等器官，經(jīng)肉眼觀察未發(fā)現(xiàn)明顯病變。取心、肝、腎進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，結(jié)果見圖1。5倍劑量組與空白對照組相比，心、肝、腎3種器官的結(jié)構(gòu)清晰，層次分明，發(fā)育狀況均正常，沒有發(fā)現(xiàn)與藥物作用有關(guān)的細(xì)胞變性、壞死及炎性細(xì)胞浸潤等病理組織學(xué)變化，說明連續(xù)7 d飲用5倍推薦劑量的銀翹藍(lán)芩口服液對雞的主要臟器不會產(chǎn)生毒性作用及病理性損傷。

A、C、E. 心、肝、腎空白對照組；B、D、F. 5倍劑量組心、肝、腎

A，C，E. Control of heart,liver and kidney;B,D,F. 5 times doses of heart,liver and kidney

圖1 心臟、肝臟、腎臟組織切片(HE)

Fig.1 Histological section for heart,liver and kidney(HE)

3 討論

藥物對靶動物安全性的試驗?zāi)康氖橇私馐茉囁幬镌诎袆游镏械膭┝?反應(yīng)曲線[13]，即從有效作用到毒性作用，或至致死作用的持續(xù)動態(tài)變化過程，觀測指標(biāo)包括靶動物對藥物中毒劑量的臨床反應(yīng)特征，受試藥物有效劑量、推薦劑量和中毒量對靶動物的病理組織學(xué)和生理生化指標(biāo)的影響，從而發(fā)現(xiàn)受試藥物的不良反應(yīng)、防治措施及臨床應(yīng)用時的注意事項。

本試驗從雞的采食、精神、體重增加情況、臟器指數(shù)、血液學(xué)指標(biāo)及血液生化指標(biāo)等[14-16]方面，對以銀翹藍(lán)芩口服液推薦劑量的1、3、5倍劑量投服的受試雞進(jìn)行了安全性研究和評估。從試驗結(jié)果可以看出，使用推薦劑量的1倍～5倍劑量銀翹藍(lán)芩口服液的受試雞均未出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，臟器指數(shù)、血液常規(guī)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)等參數(shù)與空白對照組相比也無顯著差異(P>0.05)。病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，心、肝、腎等實質(zhì)臟器均未出現(xiàn)明顯的病理組織學(xué)變化。由此可以說明，以銀翹藍(lán)芩口服液1、3、5倍推薦劑量應(yīng)用于靶動物雞是安全的。

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Safety Test on Yinqiaolanqin Oral Liquid in Chickens

XU Chun-yan,LIU Xi-wang,KONG Xiao-jun,YANG Ya-jun,QIN Zhe,LI Shi-hong,LI Jian-yong

(LanzhouInstituteofAnimalHusbandryandPharmaceuticalSciencesofCAAS,KeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceuticalDevelopment,MinistryofAgriculture,KeyLaboratoryofNewAnimalDrugProjectofGansuProvince,Lanzhou,Gansu,730050,China)

According to the requirement of veterinary research guidance,the safety studies on Yinqiaolanqin oral liquid in target animal (chickens) were carried out in the experiment.These studies could provide relevant materials for its safety in clinical application.In the experiment,1,3 and 5 times of clinical recommended doses were administrated to chickens in water for seven days.After administration, the data of body weight,clinical hematology,blood biochemistry,organ indices and histopathology were obtained.Compared with control group, the results showed that there were no significant difference of these indices among these groups (P>0.05).Meanwhile,no histopathological lesion was observed in all organs in treated groups.In conclusion,the administration of Yinqiaolanqin oral liquid by drinking water to chickens was safe.

Yinqiaolanqin oral liquid;safety;chicken

2016-09-12

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303040-12)

許春燕(1988-)，女，河南駐馬店人，碩士研究生，主要從事中獸藥研究。*通訊作者

S853.74

A

1007-5038(2017)07-0062-04