曹敏 黃林

磷霉素對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的抗菌作用研究

曹敏 黃林

目的 評(píng)價(jià)磷霉素對(duì)腸桿菌科細(xì)菌的抗菌作用。方法 收集3家醫(yī)院2012年1月到2014年6月非重復(fù)分離的150株腸桿菌科細(xì)菌，包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和粘質(zhì)沙雷菌各50株，其中大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和粘質(zhì)沙雷菌各包括25株碳青霉烯敏感株和25株碳青霉烯耐藥株，用瓊脂稀釋法測(cè)定磷霉素藥敏。結(jié)果 150株腸桿菌科細(xì)菌對(duì)磷霉素的耐藥率為25.3%，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘質(zhì)沙雷菌對(duì)磷霉素的耐藥率分別為2.0%、48.0%、26.0%；大腸埃希菌中碳青霉烯敏感株與碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率分別為4.0%和0%，肺炎克雷伯菌中碳青霉烯敏感株與碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率分別為0%和56.0%，粘質(zhì)沙雷菌中碳青霉烯敏感株與碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率分別為20.0%和24.0%。 結(jié)論 磷霉素對(duì)腸桿菌科細(xì)菌體外有較好的抗菌活性。

磷霉素 腸桿菌科細(xì)菌 抗菌作用

腸桿菌科細(xì)菌是臨床常見(jiàn)條件致病菌，近年來(lái)隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，多重耐藥菌已經(jīng)越來(lái)越常見(jiàn)并成為關(guān)注的焦點(diǎn)。針對(duì)多重耐藥菌，能夠應(yīng)用的抗生素已經(jīng)越來(lái)越少，但新藥從開(kāi)發(fā)到用于臨床需要經(jīng)歷一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程。磷霉素通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成的早期階段，對(duì)革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌均有活性，是一種廣譜抗生素。磷霉素主要用于非復(fù)雜性尿路感染[1]，作為一種老抗生素，磷霉素的耐藥率并不高。筆者對(duì)臨床分離的腸桿菌科細(xì)菌檢測(cè)磷霉素的體外抗菌作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 菌株來(lái)源 150株腸桿菌科細(xì)菌分別來(lái)自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院（105株）、杭州市中醫(yī)院（19株）、浙江省人民醫(yī)院（26株）2012年1月至2014年6月的門(mén)診和住院患者，均為非重復(fù)分離株。

1.2 儀器與試劑 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（MALDI-TOF MS）（德國(guó)Bruker公司）；VITEK 2 COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏系統(tǒng)（法國(guó)生物梅里埃公司）；多點(diǎn)接種儀（日本ORIENTAL MOTOR公司）；亞胺培南、美羅培南、磷霉素（200μg）藥敏紙片（英國(guó)OXOID公司）；磷霉素干粉（哈藥集團(tuán)三精制藥股份有限公司）；6-磷酸葡萄糖（美國(guó)Sigma公司）。

1.3 細(xì)菌鑒定和藥敏 全部菌株經(jīng)VITEK 2 COMPACT鑒定到種，再經(jīng)MALDI-TOF MS進(jìn)行菌種確認(rèn)，質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922。紙片法（亞胺培南和美羅培南）測(cè)定所有菌株碳青霉烯敏感性，同時(shí)采用CLSI推薦的瓊脂稀釋法測(cè)定磷霉素對(duì)所有菌株的MIC[2]。按照CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行MIC測(cè)定時(shí)培養(yǎng)基中加入25mg/L的6-磷酸葡萄糖。

1.4 結(jié)果判讀 參照CLSI M100-S24[2]標(biāo)準(zhǔn)判讀，磷霉素對(duì)肺炎克雷伯菌和粘質(zhì)沙雷菌的折點(diǎn)參照大腸埃希菌[2]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 磷霉素的抗菌活性 150株腸桿菌科細(xì)菌對(duì)磷霉素耐藥率的95%CI是18.6%~33.1%，詳見(jiàn)表1。大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌耐藥率、大腸埃希菌與粘質(zhì)沙雷菌耐藥率、肺炎克雷伯菌與粘質(zhì)沙雷菌耐藥率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=28.213、11.960、5.191，均P＜0.05）；磷霉素對(duì)大腸埃希菌、粘質(zhì)沙雷菌、肺炎克雷伯菌的敏感性依次遞減。

表1 磷霉素對(duì)所有菌株的抗菌活性

2.2 磷霉素MIC分布情況 磷霉素對(duì)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘質(zhì)沙雷菌的MIC分布見(jiàn)圖1，大腸埃希菌的磷霉素MIC分布較肺炎克雷伯菌和粘質(zhì)沙雷菌集中且主要集中在1μg/ml以下的低濃度區(qū)域。

圖1 所有菌株磷霉素M I C分布情況

2.3 碳青霉烯耐藥株與碳青霉烯敏感株磷霉素耐藥率比較 150株腸桿菌科細(xì)菌紙片法測(cè)得大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘質(zhì)沙雷菌各50株分別各自包括25株碳青霉烯耐藥株（CRE）和25株碳青霉烯敏感株（CSE）。其中肺炎克雷伯菌碳青霉烯敏感株與碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率為0%和56%，差異最大。詳見(jiàn)表2。

表2 碳青霉烯耐藥株與碳青霉烯敏感株磷霉素耐藥率比較

3 討論

磷霉素通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成的起始階段，屬于殺菌劑，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌均有作用[3]。由于其抗菌作用部位的特殊性，很少與其他抗生素產(chǎn)生交叉耐藥[1]。在CLSI規(guī)則里，磷霉素屬于O組藥物，并且只有大腸埃希菌和糞腸球菌（尿路感染）折點(diǎn)，導(dǎo)致其在美國(guó)使用率較低。但是在澳大利亞、德國(guó)、法國(guó)、西班牙等國(guó)家，磷霉素還被用于組織感染、血流感染，并取得不錯(cuò)的效果[4]。

本文研究磷霉素對(duì)150株腸桿菌科細(xì)菌的抗菌活性，測(cè)得磷霉素的耐藥率（95%CI）是25.3%（18.6%~33.1%），與文獻(xiàn)報(bào)道相似[5]。其中，大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘質(zhì)沙雷菌對(duì)磷霉素的耐藥率分別為2%、48%、26%，與文獻(xiàn)[6]報(bào)道相似。大腸埃希菌磷霉素MIC90只有2μg/ml，敏感性非常好。肺炎克雷伯菌中碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于碳青霉烯敏感株，其機(jī)制是由于肺炎克雷伯菌碳青霉烯類耐藥菌株常常同時(shí)攜帶有blaKPC和fos A基因質(zhì)粒[7]，所以常常表現(xiàn)為碳青霉烯類與磷霉素的同時(shí)耐藥，而大腸埃希菌和粘質(zhì)沙雷菌中碳青霉烯敏感株與碳青霉烯耐藥株磷霉素耐藥率差異較小。

碳青霉烯類藥物耐藥腸桿菌科細(xì)菌已經(jīng)越來(lái)越常見(jiàn)[8]，對(duì)于這類多重耐藥菌，磷霉素是少見(jiàn)的還保持著較高敏感性的抗生素[9]。本研究結(jié)果顯示磷霉素對(duì)腸桿菌科細(xì)菌體外有較好的抗菌活性，對(duì)于臨床上由腸桿菌科細(xì)菌引起的感染，可以考慮應(yīng)用磷霉素。

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Antimicrobial susceptibility of Enterobacteriaceae to fosfomycin

CAO Min，HUANG Lin.Department of Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310009，China

Objective To investigate the antimicrobialsusceptibility ofEnterobacteriaceae to fosfomycin.Methods A total of 150 non-repetitive Enterobacteriaceae isolates were collected from the Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou Traditional Chinese Medicine Hospital and Zhejiang Provincial People's Hospital between January 2012 and June 2014,including 50 strains of Escherichia coli,50 strains of Klebsiella pneumoniae and 50 strains of Serratia marcescens.Among all these isolates,there were 25 carbapenem-sensitive strains and 25 carbapenem-resistant strains for each bacteria,respectively.Susceptibility of fosfomycin was determined by agar dilution method. Results Overall 25.3%of 150 Enterobacteriaceae isolates were resistant to fosfomycin.The resistance rate of Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Serratia marcescens was 2.0%,48.0% and 26.0%,and the resistance rate of carbapenem-sensitive strains vs. carbapenem-resistant strains was 4.0%vs.0%,0%vs.56.0%and 20.0%vs.24.0%for Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae and Serratia marcescens,respectively. Conclusion Fosfomycin demonstrates certain activity against Enterobacteriaceae in vitro.

Fosfomycin Enterobacteriaceae Antibacterial activity

2 0 1 6-0 5-3 1）

（本文編輯：嚴(yán)瑋雯）

d o i:1 0.1 2 0 5 6/j.i s s n.1 0 0 6-2 7 8 5.2 0 1 7.3 9.1 5.2 0 1 6-8 0 5

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2 0 1 6 K Y B 1 1 4）

3 1 0 0 0 9杭州，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科

曹敏，E-m a i l：c a o m i n 0 6 0 7@1 6 3.c o m