王衍洪莫炫永肖俏霞孫凌瑜黎秀平曾麗萍何珊娜

馬來酸依那普利葉酸片與馬來酸依那普利片和葉酸片聯(lián)用的相對生物利用度評價(jià)※

王衍洪1莫炫永2肖俏霞1孫凌瑜1黎秀平1曾麗萍1何珊娜1

目的探討馬來酸依那普利葉酸片與不同廠家馬來酸依那普利片聯(lián)用葉酸片的相對生物利用度。方法20名健康人群按照以下三個(gè)組別：對照組口服馬來酸依那普利葉酸片（含依那普利10 mg/葉酸0.8 mg)、試驗(yàn)1組口服馬來酸依那普利片（悅寧定）10 mg和葉酸片0.8 mg、試驗(yàn)2組口服馬來酸依那普利片（依蘇）10 mg和葉酸片0.8 mg，單劑量口服，經(jīng)過清洗期后交換組別，保證每名受試者都能經(jīng)歷三組試驗(yàn)，對三種用藥方案進(jìn)行生物等效性評價(jià)。結(jié)果20名健康人群經(jīng)三種用藥方案治療后，試驗(yàn)組與對照組的血藥濃度及血藥濃度-時(shí)間曲線相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論馬來酸依那普利葉酸片和馬來酸依那普利片加葉酸片具有相同的血藥濃度及藥時(shí)曲線，具有生物等效性。

馬來酸依那普利葉酸片；馬來酸依那普利片加葉酸片；藥時(shí)曲線

馬來酸依那普利葉酸片是第一個(gè)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于治療伴同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）升高的原發(fā)性高血壓的復(fù)合制劑，用于治療伴有血漿Hcy水平升高的原發(fā)性高血壓，依那普利為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，是前體藥物，口服后其乙酯部分在肝內(nèi)迅速水解，轉(zhuǎn)化成其他的有效代謝物——依那普利拉，能強(qiáng)烈抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，降低血管緊張素Ⅱ含量，造成全身血管舒張，引起降壓；對Ⅱ腎型高血壓、Ⅰ腎型高血壓及自發(fā)性高血壓大鼠模型均有明顯的降壓作用，在臨床中應(yīng)用非常廣泛。口服依那普利約 68%被吸收，食物不影響其生物利用度，服藥后1 h，血漿濃度依那普利可達(dá)峰值；服藥后3.5～4.5 h，依那普利拉血漿濃度可達(dá)峰值，半衰期為11 h，腎功能正常者口服4 d后達(dá)血清穩(wěn)態(tài)血藥濃度，肝功能異常者依那普利代謝成依那普利拉的速度延緩。依那普利給藥20 min后可廣泛分布于全身各臟器，肝、腎、胃和小腸藥物濃度最高，大腦中濃度最低，依那普利拉主要由腎臟排泄。葉酸為機(jī)體細(xì)胞生長和繁殖的必需物質(zhì)，葉酸經(jīng)二氫葉酸還原酶及維生素B12的作用，形成四氫葉酸（THFA），后者與多種一碳單位結(jié)合成四氫葉酸類輔酶，傳遞一碳單位，參與體內(nèi)很多重要反應(yīng)及核酸和氨基酸的合成。葉酸可作用于蛋氨酸循環(huán)，其一碳單位轉(zhuǎn)化為甲基可使Hcy重甲基化，生成蛋氨酸用于細(xì)胞甲基化反應(yīng)及蛋白質(zhì)合成，葉酸還可以通過一碳單位供體的作用來促進(jìn)核酸合成。因此，外源性補(bǔ)充葉酸能夠促進(jìn)Hcy甲基化過程，降低血漿Hcy。

國內(nèi)對于依那普利生物利用度的研究分別有體外實(shí)驗(yàn)[1-5]或者是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[6]以及健康人體試驗(yàn)[7-15]，相對比較全面和深入，但是對于馬來酸依那普利葉酸片只有含量測定的報(bào)道[16]，對于其血藥濃度檢測、相對生物利用度的分析和人體生物等效性的評價(jià)，則未見有報(bào)道。而且，馬來酸依那普利葉酸片的研究側(cè)重于研究其療效[18-20]，而對于馬來酸依那普利葉酸片與馬來酸依那普利片和葉酸片聯(lián)用，只有降低血漿Hcy的對比分析[21]，未進(jìn)行兩者的人體生物等效性評價(jià)。另外，馬來酸依那普利葉酸片作為近年來的國家一類新藥，價(jià)格昂貴，遠(yuǎn)高于馬來酸依那普利片和葉酸片聯(lián)合用藥的價(jià)格，因此，評價(jià)兩種不同給藥方案的人體生物等效性，對于減少藥品費(fèi)用具有現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器

1.1.1 試驗(yàn)藥物試驗(yàn)藥物 1：馬來酸依那普利片（悅寧定），規(guī)格：每片5 mg，生產(chǎn)廠家：MERCK SHARP ＆DOHME（Australia）Pty.Ltd，批號：M025472；葉酸片，規(guī)格：每片0.4 mg，生產(chǎn)廠家：江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，批號：20140507。試驗(yàn)藥物 2：馬來酸依那普利片（依蘇），規(guī)格：每片10 mg，生產(chǎn)廠家：揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇制藥股份有限公司，批號：16072411；葉酸片，規(guī)格：每片0.4 mg，生產(chǎn)廠家：江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，批號：20140507。對照藥物：馬來酸依那普利葉酸片（含依那普利10 mg/葉酸0.8 mg)，生產(chǎn)廠家：深圳奧薩制藥有限公司，批號：20160708。

1.1.2 試驗(yàn)儀器Agilent 1200RRLC型高效液相色譜儀及 OPANLAB EZChrom工作站（美國 Agilent公司）；CPA225D十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 受試者選擇在2016年7月至2017年3月期間，招募試驗(yàn)對象男性健康受試者 20名，年齡（40.2±2.6）歲，體重（66±9）kg，血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、血壓、心電圖及胸透等檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試前兩周及試驗(yàn)期間不服用任何其他藥物。項(xiàng)目試驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，試驗(yàn)前本課題負(fù)責(zé)人向受試者說明試驗(yàn)?zāi)康?、藥物特性、臨床應(yīng)用及主要不良反應(yīng)等，由本人簽署了知情同意書。

1.3 分組給藥與血樣本采集本試驗(yàn)采用雙周期自身隨機(jī)交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，20名受試者試驗(yàn)前后24 h內(nèi)不得飲酒，按照以下三個(gè)組別：對照組口服馬來酸依那普利葉酸片（含依那普利10 mg/葉酸0.8 mg)、試驗(yàn)1組口服馬來酸依那普利片（悅寧定）10 mg和葉酸片0.8 mg、試驗(yàn)2組口服馬來酸依那普利片（依蘇）10 mg和葉酸片0.8 mg，單劑量口服給藥，三次用藥間清洗期為7 d，保證每名受試者都能經(jīng)歷三組試驗(yàn)，對三種用藥方案進(jìn)行生物等效性評價(jià)。受試者給藥前禁食不禁水10 h，次日清晨8:00以200 ml溫開水服藥，服藥2 h后可自由飲水，4 h后進(jìn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐。受試者須嚴(yán)格按試驗(yàn)方案參加本試驗(yàn)，并分別于給藥前及給藥后0.5、0.75、l、2、3、4、6、8、l2、18、24 h采靜脈血5 ml，經(jīng)過離心處理，再經(jīng)甲醇沉淀蛋白質(zhì)，再離心，取上清液。進(jìn)行高效液相色譜-紫外檢測法（HPLC-UV）測定依那普利和葉酸的血藥濃度，確定三組受試者的血藥濃度及繪制血藥濃度曲線，測定數(shù)據(jù)以±s表示。

1.4 血藥濃度測定

1.4.1 色譜條件色譜柱：C18色譜柱（Xbridge 3.0 mm×100 mm，3.5 μm，美國Waters公司）；以乙腈-0.5%甲酸（25:75）為流動(dòng)相，流速為0.4 ml/min；檢測波長為215 nm；柱溫為50℃。

1.4.2 血樣本處理靜脈血5 ml離心（4000 rpn，10 min），取血清1 ml，加入3 ml甲醇，混勻，離心（10 000 rpn，5 min），取上清液2 ml，氮吹至干，加流動(dòng)相1 ml溶解，用微孔濾膜（0.22 μm）濾過，取續(xù)濾液5 μl同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。根據(jù)方法測定人體血漿中依那普利、依那普利拉和葉酸聯(lián)用的濃度。見圖1。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)算不同組別依那普利和葉酸血藥濃度曲線的血藥濃度-時(shí)間曲線下面積（AUC）、達(dá)峰時(shí)間（tmax）、血藥峰濃度（Cmax）和相對生物利用度，所得Cmax和AUC進(jìn)行自然對數(shù)轉(zhuǎn)換后先用雙交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方差分析，再用雙單側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行人體生物等效性評價(jià)，tmax經(jīng)Wilcoxon法非參數(shù)檢驗(yàn)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 血藥濃度-時(shí)間曲線20名健康受試者按照不同組別單劑量口服試驗(yàn)藥物和對照藥物的平均血藥濃度-時(shí)間曲線，見圖 2。研究顯示，經(jīng)三種用藥方案治療后，試驗(yàn)組與對照組的血藥濃度-時(shí)間曲線相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)20名健康受試者口服試驗(yàn)藥物和對照藥物，其主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，見表 1。

表1 20名健康受試者主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)

圖1 高效液相色譜（HPLC）圖（1葉酸，2依那普利拉，3依那普利）

圖2 三種用藥方案治療后20名健康受試者的平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖

2.3 生物等效性評價(jià)雙單側(cè) t檢驗(yàn)結(jié)果表明，AUC0-t90%置信區(qū)間為97.9%～118.3%，AUC0-∞90%置信區(qū)間為 99.5%～123.1%，Cmax90%置信區(qū)間為88.7%～131.2%，均落在規(guī)定范圍內(nèi)。tmax經(jīng)非參數(shù)檢驗(yàn)，表明差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。試驗(yàn)藥馬來酸依那普利片聯(lián)用葉酸片相對于對照藥的平均相對生物利用度F為（105.33±15.23～109.54±32.25）%，試驗(yàn)藥物和對照藥物具有生物等效性。

3 討論

HPLC方法從檢測波長的選擇、柱溫的選擇、流動(dòng)相中試劑的選擇、色譜柱的選擇、血液中目標(biāo)物的檢測來建立了 HPLC法同時(shí)檢測馬來酸依那普利和葉酸的血藥濃度。

鑒于試驗(yàn)結(jié)果顯示，馬來酸依那普利葉酸片與上述兩個(gè)廠家的馬來酸依那普利片聯(lián)用葉酸片具有生物等效性，由于在相同劑量下馬來酸依那普利葉酸片價(jià)格遠(yuǎn)高于聯(lián)合用藥的馬來酸依那普利片和葉酸片，提示臨床醫(yī)師可以根據(jù)患者的經(jīng)濟(jì)情況選擇用藥方案。但是，由于需要同時(shí)服用馬來酸依那普利片和葉酸片，患者的用藥依從性相對于馬來酸依那普利葉酸片較差，應(yīng)引起臨床注意。

本次實(shí)驗(yàn)有不足之處只是驗(yàn)證了健康人群中三種不同廠家藥品的單次藥時(shí)曲線，未有在患者中及長期使用中驗(yàn)證，需要在以后相關(guān)研究做更進(jìn)一步的確認(rèn)。

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Relative bioavailability of enalapril folic acid tablets in combination with enalapril tablets and folic acid tablets

Wang Yanhong Mo Xuanyong Xiao Qiaoxia Sun Lingyu Li Xiùpíng Ceng Liping He Shanna

ObjectiveTo investigate the plasma concentration of enalapril maleate tablets and different manufacturers of enalapril maleate plus folic acid tablets for H-type hypertension.MethodsThirty healthy people according to the following three groups.The control group was treated with enalapril follicles (YiYe) (containing enalapril 10 mg / folic acid 0.8 mg),the test group 1 oral administration of enalapril tablets (Yue Ning Ding) 10 mg and folic acid tablets 0.8mg,For the test group 2 oral administration of enalapril tablets (YiSu) 10 mg and folic acid tablets 0.8 mg,a single dose of oral,after cleaning the exchange group,to ensure that everyone has experienced three groups of experiments.Result There was no significant difference between the experimental group and the control group in the plasma concentration and the time curve of the three groups(P＞0.05).Conclusion The enalapril maleate and maleic acid Enalapril tablets plus folic acid tablets have the same drug profile,and bioequivalent.

Enalapril maleate tablets;Enalapril maleate plus folic acid tablets;Drug time curve

10.12010/j.issn.1673-5846.2017.08.013

1中山大學(xué)附屬東華醫(yī)院，廣東東莞 523110

2東莞市國藥質(zhì)量檢測中心，廣東東莞 523010

2014年廣東省東莞市醫(yī)療衛(wèi)生科技計(jì)劃一般項(xiàng)目（編號：2014105101009）

王衍洪（1973.2-），碩士學(xué)位，藥學(xué)部副主任，主任藥師。研究方向：藥事管理。E-mail：1594653364@qq.com