陳云政, 保廣財, 張生祥, 韓 梅

(1.青海省門源縣農(nóng)牧和科技局, 青海門源 810300; 2.青海省門源縣東川鎮(zhèn)克圖畜牧獸醫(yī)站,青海門源 810300)

青海省海北州藏羊群中牛病毒性腹瀉病毒和羊邊界病毒的流行病學(xué)調(diào)查

陳云政1, 保廣財1, 張生祥2, 韓 梅1

(1.青海省門源縣農(nóng)牧和科技局, 青海門源 810300; 2.青海省門源縣東川鎮(zhèn)克圖畜牧獸醫(yī)站,青海門源 810300)

為掌握青海省海北州藏羊群中牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和羊邊界病毒(BDV)的感染情況，采用RT-PCR方法分別對青海省海北州的161份健康藏羊血清樣品和34份腹瀉藏羊組織樣品進(jìn)行了BVDV和BDV的抗原核酸檢測。結(jié)果顯示：195份樣品中BVDV和BDV總陽性率分別為29.74%和14.36%；161份健康藏羊血清樣品中BVDV和BDV平均陽性率分別為26.71%和11.80%，BVDV/BDV混合感染率為4.35%；34份腹瀉藏羊組織樣品中BVDV和BDV平均陽性率分別為44.12%和26.47%，BVDV/BDV混合感染率為17.65%。本研究表明青海省海北州健康藏羊群和腹瀉藏羊群中均存在BVDV、BDV的單獨(dú)感染以及混合感染，且感染情況在個別養(yǎng)殖場(戶)較為嚴(yán)重。

藏羊；牛病毒性腹瀉病毒；羊邊界病毒；流行病學(xué)調(diào)查

Abstract: To master the situation of bovine viral diarrhea virus and sheep border virus infection in Tibetan sheep in Haibei area of Qinghai province, this research uses the RT-PCR method to detect 161 healthy Tibetan sheep serum samples and 34 diarrhea Tibetan sheep tissue samples for antigen nucleic acid detection of BVDV and BDV in Haibei area of Qinghai province. The results showed that 195 copies of BVDV and BDV in the sample of total positive rates were 29.74% and 14.36%; 161 healthy Tibetan sheep serum samples BVDV and BDV average positive rates were 26.71% and 11.80%, BVDV/BDV mixed infection rate was 4.35%; 34 diarrhea Tibet sheep BVDV and BDV tissue samples average positive rate was 44.12% and 26.47%, BVDV/BDV mixed infection rate was 17.65%. This study shows that BVDV and BDV infection alone or mixed infection in health area and Tibetan diarrhea sheep in Haibei area of Qinghai province is in existence, and infection in individual farms (households) is more serious, the study provides guidance for comprehensive prevention and control measures in Qinghai Tibetan sheep, which enrich the epidemiologic information of BVDV and BDV in China sheep.

Keywords: Tibetan sheep;bovine viral diarrhea virus;sheep border virus;epidemiological survey

牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)和羊邊界病毒(Border disease virus，BDV)同屬于黃病毒科(Flaviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)，分別是牛病毒性腹瀉病(Bovine viral diarrhea，BVD)和羊邊界病(Border disease，BD)的致病原[1]。BVDV除感染牛外，還可感染羊、豬以及野生動物，羊感染BVDV后可引起腹瀉、母畜流產(chǎn)、死胎和畸胎等[2-3]。BDV主要感染綿羊和山羊，偶有牛、豬和野生反芻動物的感染，羊感染BDV后可引起母羊不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和畸形胎等繁殖障礙和羔羊畸形發(fā)育、頑固性腹瀉等[4-5]。BVDV和BDV感染均可造成持續(xù)性感染和免疫抑制，持續(xù)性感染使病畜常年帶毒、排毒，成為畜群中的傳染源，并可降低機(jī)體的免疫力，導(dǎo)致其他病原體的混合和繼發(fā)感染。藏羊?yàn)槲覈嗖馗咴赜行蠓N，是我國三大原始綿羊品種之一[6]。為調(diào)查研究藏羊群中BVDV與BDV的感染現(xiàn)狀，豐富我國羊群中BVDV與BDV感染的流行病學(xué)資料，為藏羊群中BVDV和BDV綜合防控措施的制定提供指導(dǎo)依據(jù)，有效保護(hù)青海藏羊及藏羊養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，本研究首次對采集自青海省海北州健康藏羊和腹瀉藏羊共計195份樣品進(jìn)行了BVDV和BDV的流行病學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣品來源 2014年10月至2016年6月，采自青海省海北州6個規(guī)模養(yǎng)殖場和8個散養(yǎng)戶的健康藏羊血清樣品161份，腹瀉藏羊組織樣品34份，檢測樣品共計195份。

1.2 主要試劑 一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒、DL-2000 DNA Marker均購自寶生物工程(大連)有限公司；病毒基因組RNA提取試劑盒購自北京百泰克生物科技有限公司。

1.3 引物設(shè)計與合成 參照參考文獻(xiàn)[7-8]中的方法，分別設(shè)計BVDV和BDV的特異性檢測引物(表1)，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

表1 引物序列表Tab 1 Primer sequences

1.4 病毒基因組RNA的提取 按病毒基因組RNA提取試劑盒說明書分別提取195份檢測樣品的病毒基因組RNA。

1.5 RT-PCR擴(kuò)增與檢測 參照一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒使用說明書，以提取的病毒RNA為模板，參考文獻(xiàn)[7-8]中的方法進(jìn)行BVDV和BDV的RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)(表2)，RT-PCR擴(kuò)增結(jié)束后，取擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)15 g/L瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測。

表2 RT-PCR擴(kuò)增參數(shù)Tab 2 RT-PCR amplification parameters

2 結(jié)果與分析

2.1 全部樣品檢測結(jié)果 分別采用RT-PCR方法對2014～2016年采自青海省海北州的195份樣品進(jìn)行了BVDV和BDV的檢測，共檢出BVDV陽性樣品58份(部分樣品的電泳圖見圖1)，總陽性率為29.74%；共檢出BDV陽性樣品28份(部分樣品的電泳圖見圖2)，總陽性率為14.36%。

M為DL-2 000 Marker; 1.2.4.7.8為陽性樣品PCR產(chǎn)物;3.5.6.9.10為陰性樣品PCR產(chǎn)物M. DL-2 000 Marker; 1.2.4.7.8 Positive sample PCR product;3.5.6.9.10 Negative sample PCR product圖1 部分樣品BVDV RT-PCR檢測結(jié)果Fig 1 BVDV RT-PCR results of some samples

M為DL-2 000 Marker; 2.4.6.7為陽性樣品PCR產(chǎn)物;1.3.5.8為陰性樣品PCR產(chǎn)物M. DL-2 000 Marker; 2.4.6.7 Positive sample PCR product;1.3.5.8 Negative sample PCR product圖2 部分樣品BDV RT-PCR檢測結(jié)果Fig 2 BDV RT-PCR results of some samples

2.2 健康樣品檢測結(jié)果 采用RT-PCR方法分別對161份健康藏羊血清樣品進(jìn)行了BVDV和BDV抗原核酸的檢測，結(jié)果如表3所示，BVDV陽性率在0～66.67%之間，平均陽性率為26.71%；BDV陽性率在0～44.44%之間，平均陽性率為11.80%；其中BVDV/BDV混合感染樣品數(shù)為7份，混合感染率為4.35%。該結(jié)果表明青海省不同地區(qū)的健康藏羊群已經(jīng)存在BVDV、BDV感染，且感染在個別養(yǎng)殖場或散養(yǎng)戶較為嚴(yán)重，同時存在BVDV與BDV的混合感染。

2.3 腹瀉樣品檢測結(jié)果 如表4所示，采用RT-PCR方法檢測腹瀉的藏羊組織樣品34份，BVDV陽性率在0～66.67%之間，平均陽性率為44.12%；BDV陽性率在0～66.67%之間，平均陽性率為26.47%。其中BVDV/BDV混合感染樣品數(shù)為6份，混合感染率為17.65%。該結(jié)果表明青海省不同地區(qū)的腹瀉藏羊群存在BVDV、BDV的單獨(dú)感染以及混合感染，且感染情況在個別養(yǎng)殖場或散養(yǎng)戶較為嚴(yán)重，但并非所有出現(xiàn)腹瀉癥狀的場(戶)都能檢出BVDV或BDV，說明青海省部分地區(qū)引起藏羊腹瀉的致病原除BVDV和BDV外，還有其他致病原。

表3 健康藏羊血清樣品檢測結(jié)果Tab 3 Results of serum samples from healthy Tibetan Sheep

表4 腹瀉樣品檢測結(jié)果Tab 4 Results of diarrhea samples

3 討論與小結(jié)

近幾年來，隨著我國養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，羊流通量較大，各種疾病的發(fā)生率也逐漸增多，BVDV和BDV的感染情況較為嚴(yán)重，郭芙莉等[9]采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)對隨機(jī)采自新疆伊犁、塔城等地區(qū)的49份羊血清樣品進(jìn)行BVDV抗體檢測，BVDV抗體陽性血清樣品45份，陽性率達(dá)91.8%，BVDV在該地區(qū)羊群中較為流行，感染率比較高。李文良等[8]采用RT-PCR方法對江蘇部分地區(qū)16個養(yǎng)殖場的106份樣品進(jìn)行了BDV的檢測，16個場中檢出BDV陽性場10個，場陽性率為62.5%，106份樣品共檢出陽性樣品29份，陽性率為27.4%。本次應(yīng)用RT-PCR方法對青海省海北州的6個規(guī)模養(yǎng)殖場和8個散養(yǎng)大戶的161份健康藏羊血清樣品和34份腹瀉藏羊組織樣品進(jìn)行了BVDV和BDV的抗原核酸檢測，161份健康藏羊血清樣品中BVDV平均陽性率為26.71%，BDV平均陽性率為11.80%，34份腹瀉藏羊組織樣品中BVDV平均陽性率為44.12%，BDV平均陽性率為26.47%。以上流行病學(xué)調(diào)查資料共同顯示我國羊群中存在BVDV和BDV的感染，且感染情況在部分地區(qū)較為嚴(yán)重。同時本研究發(fā)現(xiàn)青海藏羊群中存在BVDV/BDV的混合感染，健康藏羊群和腹瀉藏羊群中BVDV/BDV的混合感染率分別為4.35%和17.65%，應(yīng)加強(qiáng)重視。目前國內(nèi)尚無安全有效的羊用BVDV和BDV商品化疫苗，及時診斷和淘汰帶毒病畜成為羊源BVDV和BDV的主要防治方法，故應(yīng)加強(qiáng)羊群中BVDV和BDV的流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)和剔除陽性感染羊，逐步實(shí)現(xiàn)羊群中BVDV和BDV的凈化，保障養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展。本研究為青海藏羊的綜合防控措施提供了指導(dǎo)依據(jù)，豐富了我國羊群中BVDV和BDV的流行病學(xué)資料。

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(編輯：侯向輝)

EpidemiologicalInvestigationofBovineViralDiarrheaVirusandSheepBoundaryVirusinTibetanSheepinHaibeiArea,QinghaiProvince

CHEN Yun-zheng1，BAO Guang-cai1，ZHANG Sheng-xiang2，HAN Mei1

(1.MenyuanCountyofQinghaiProvinceAgricultureandAnimalHusbandryScienceandTechnologyBureau，Menyuan，Qinghai810300，China； 2.MenyuanCountyofQinghaiProvinceTownofDongchuanAnimalHusbandryandVeterinaryStationofTimbuktu，Menyuan，Qinghai810300，China)

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.9.02

2017-03-10

A

1002-1280 (2017) 09-0007-05

S852.65

絨毛用羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-40-34)

陳云政，獸醫(yī)師，從事畜牧獸醫(yī)研究。E-mail：3132809011@qq.com