馬玉英 （新疆石河子工程技術(shù)學(xué)校 832000）賀嚴峰 （新疆塔城地區(qū)塔城市畜牧獸醫(yī)站 830049）

薩福克肉羊精液冷凍保存技術(shù)淺析

馬玉英 （新疆石河子工程技術(shù)學(xué)校 832000）賀嚴峰 （新疆塔城地區(qū)塔城市畜牧獸醫(yī)站 830049）

為充分發(fā)揮和提高優(yōu)良薩?？朔N公羊的利用率，本試驗對進口薩?？巳庋蚓豪鋬霰４婕夹g(shù)進行研究，試驗設(shè)計4個薩?？搜蚶鋬鼍合♂屢号浞剑琾H值6.0～7.0，挑選14只健康成年種公羊，調(diào)教采精、制凍。結(jié)果顯示：稀釋液C的冷凍后精子活力顯著高于稀釋液A的凍后精子活力 （P＜0.05），極顯著高于稀釋液B和稀釋液D的凍后精子活力（P＜0.01）；凍精在40～42℃解凍時精子活力效果最好。故使用稀釋液C制作進口薩?？巳庋蚶鋬鼍翰⒃?2℃解凍效果較好，可在生產(chǎn)實踐中推廣使用。

薩?？搜?；精液；稀釋液；冷凍保存；試驗

世界畜牧業(yè)發(fā)展的主要特征是規(guī)?；同F(xiàn)代化，發(fā)展趨勢是綠色、安全。而我國肉羊業(yè)產(chǎn)業(yè)化水平低，農(nóng)戶養(yǎng)羊多分散飼養(yǎng)，經(jīng)濟效益差，新疆更是如此。種羊市場發(fā)展異常，種羊價格居高不下，嚴重影響肉羊良繁生產(chǎn)體系的形成，阻礙肉羊產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

精液冷凍保存是人工授精技術(shù)的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。它解決了精液長期保存問題，使精液不受時間、地域和種畜生命的限制，極大限度的發(fā)揮和提高優(yōu)良種公羊的利用率，加速品種育成和改良步伐。薩?？搜蚴菄H公認的肉羊優(yōu)良品種之一，生長速度快，產(chǎn)肉率高，與新疆本地的原始品種雜交，其飼料轉(zhuǎn)化率高，適應(yīng)性強，深受新疆人民喜愛。為充分發(fā)揮薩福克種公羊的遺傳特性，滿足新疆肉用種公羊供種能力不足的現(xiàn)狀，本試驗對進口薩?？搜蚓杭毠芊ɡ鋬霰４婕夹g(shù)進行研究，以期在生產(chǎn)實踐中達到應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 種公羊

試驗選擇天山生物公司膘情中等、體況良好、性欲旺盛的14只進口薩福克公羊。

1.1.2 藥品

葡萄糖，蔗糖，檸檬酸鈉，Tris，甘油，PS雙抗，卵黃，法國卡蘇公司生產(chǎn)的無卵黃精液稀釋原液。

1.1.3 儀器設(shè)備

OLYMPUS體視顯微鏡，卡蘇微型精液分裝機，水浴鍋，高壓鍋，震蕩儀，電子天平，冰箱等。

1.2 方法

1.2.1 稀釋液的配制

稀釋液 A由葡萄糖 （1.9g）、 蔗糖 （0.8g）、 Tris （0.8g）、檸檬酸鈉 （1.9g）、 卵黃 （10ml）、 甘油 （12ml）、 PS(20萬IU)組成，稀釋液B由葡萄糖 （3.4g）、檸檬酸鈉 （2.0g）、卵黃（10ml）、甘油 （12ml）、PS(20萬IU)組成，稀釋液C由葡萄糖（2.0g）、 蔗糖（1.4g）、 檸檬酸鈉（2.0g）、 卵黃（10ml）、甘油 （12ml）、PS(20萬IU)組成，由按稀釋液所示成分和劑量配制基礎(chǔ)液100ml，煮沸消毒后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 精液采集

用假陰道按常規(guī)方法進行采精，一般連續(xù)采精4d休息1d。精液采出后，立即于37℃下進行常規(guī)品質(zhì)檢查，要求原精液無異味，色澤為乳白色，精子形態(tài)正常，原精液活力要求不低于0.7，密度為 “密”級的精液供試。

1.2.3 精液的稀釋和平衡

鮮精與基礎(chǔ)液按1：1～1：2比例等溫第一次稀釋，然后用8～10層紗布包裹儲精瓶，降到室溫后置于4℃冰箱中平衡1h。將經(jīng)過第一次稀釋和平衡的精液在冰箱內(nèi)按1：1比例加入含冷凍保護劑的等溫稀釋Ⅱ液后，用精液分裝機分裝到0.25ml細管內(nèi)并封口，再放入4℃的冰箱中繼續(xù)平衡2～4h。

1.2.4 精液的冷凍與保存

將精液細管置于自制冷凍漂浮器上 (距離液氮表面2～2.5cm)熏蒸10min后，投入液氮中冷凍保存。

1.2.5 精液解凍

從液氮罐中取出精液細管，迅速浸入37～48℃水浴中，輕輕搖動直至融化。

1.2.6 精子活率測定

將解凍精液制片后置于配有37℃恒溫臺顯微鏡下，放大400倍檢查精子。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同稀釋液對精子冷凍保護的效果

由表1可以看出，C稀釋液在二次稀釋中加入蔗糖，解凍后效果最好，精子活力極顯著高于B稀釋液和D稀釋液（P＜0.01），顯著高于A稀釋液 （P＜0.05）。

2.2 不同解凍溫度對精子活力的影響

由表2可以看出，在40～42℃解凍的精子活力效果最好，實踐中通常用42℃解凍。

3 小結(jié)與討論

3.1 不同營養(yǎng)劑對精液冷凍的影響

糖類是精液稀釋液的重要組成部分，它可直接被精子分解產(chǎn)生能量提供給精子，同時也是一種重要的保護劑。糖對稀釋液滲透壓和精子膜都有一定影響，防止冰晶形成等保護冷凍對精子造成的傷害。目前國內(nèi)外均有報道，糖類 (葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、棉籽糖)能通過對質(zhì)膜的穩(wěn)定，發(fā)揮其對精子的保護作用。幾種糖類穩(wěn)定細胞膜蛋白質(zhì)-脂質(zhì)復(fù)合物的性能大小順序為棉子糖＞蔗糖＞乳糖＞果糖＞葡萄糖，而且兩種糖配合使用的效果比單一使用較好。因此，C稀釋液組的精子活力極顯著高于B稀釋液組合D稀釋液組。

3.2 解凍溫度對精子活力的影響

精液解凍過程很重要，解凍速率和溫度會影響精子。在-196℃的凍精解凍過程需經(jīng)過精子的-l5～-60℃危險溫區(qū)。經(jīng)過長期試驗，40～45℃解凍的溫度效果優(yōu)于其他解凍溫度。對比中我們主要采用的42℃來解凍，活力相比要高。

3.3 稀釋液比例對精子冷凍的影響

進口肉羊冷凍稀釋液倍數(shù)一般在5倍以下。這可能與羊子宮頸通道狹窄、彎曲多皺，不能做到深部輸精，和肉羊精子頂體經(jīng)過冷凍、解凍后損壞程度嚴重有關(guān)。所以肉羊精液在冷凍前稀釋比例多為1：2或1：3，經(jīng)過多次試驗，1：2效果較好。

表1 4種不同配方稀釋液精子解凍后活力

表2 不同解凍溫度后的精子活力

項目資助：國家科技支撐計劃課題《新疆荒漠干旱綠洲草原區(qū) “生產(chǎn)生態(tài)生活”保障技術(shù)集成與示范》課題編號 （2012BAD13B03）。