檀新珠, 吳曉晴, 呂明其, 王冠淞, 李 健, 秦 韜, 黃一帆, 馬玉芳(.中西獸醫(yī)結(jié)合與動物保健福建省高等學(xué)校重點實驗室，福建 福州35000；.福建省獸醫(yī)中藥與動物保健重點實驗室(福建農(nóng)林大學(xué))，福建 福州 35000)

太子參莖葉多糖對小鼠免疫器官指數(shù)和血清免疫球蛋白、補體含量的影響

檀新珠1, 吳曉晴1, 呂明其1, 王冠淞1, 李 健2, 秦 韜2, 黃一帆2, 馬玉芳1
(1.中西獸醫(yī)結(jié)合與動物保健福建省高等學(xué)校重點實驗室，福建 福州350002；2.福建省獸醫(yī)中藥與動物保健重點實驗室(福建農(nóng)林大學(xué))，福建 福州 350002)

將60只小鼠隨機分為空白對照組，太子參莖葉多糖(RPSLP)低、中、高劑量組，每組15只.空白對照組小鼠灌服0.2 mL·d-1蒸餾水，低、中、高劑量組小鼠分別灌服50、100和200 mg·kg-1·d-1RPSLP，14 d后檢測各組小鼠的免疫器官指數(shù)和血清免疫球蛋白、補體含量,研究RPSLP對小鼠免疫功能的影響.結(jié)果表明：與空白對照組相比，高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)顯著提高(P<0.05)，胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.05)；低、中劑量組小鼠的IgA含量顯著提高(P<0.05)，低劑量組小鼠的IgM含量顯著提高(P<0.05)，高劑量組小鼠的IgM含量顯著降低(P<0.05)；中、高劑量組小鼠的C3含量顯著提高(P<0.05)；各劑量組小鼠的IgG和C4含量無顯著差異(P>0.05).由此可見，一定劑量的RPSLP可以促進小鼠免疫器官的發(fā)育，增強免疫力.

太子參莖葉多糖; 小鼠; 免疫器官指數(shù); 免疫球蛋白; 補體

Abstract: Sixty mice were randomized into 4 groups, normal control, low-, intermediate- and high-dose ofRadixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides (PRSLP) groups, consisting of 15 mice each. Mice from PRSLP groups were administered by gavage with RPSLP at doses of 50, 100 and 200 mg·kg-1·d-1for 14 d, which was replaced with 0.2 mL distilled water for the normal control. Then immune organ index was assayed and contents of immunoglobulin and complement in serum of mice were detected. The results showed that compared with the normal control group, the spleen index of high-dose group was significantly increased (P<0.05), and the thymus index was significantly decreased (P<0.05). IgA level in low- and intermediate-dose groups were significantly increased (P<0.05). IgM content in low-dose group was significantly increased (P<0.05), but it was significantly decreased in high-dose group (P<0.05). C3levels in intermediate- and high-dose groups increased significantly (P<0.05). Contents of IgG and C4were not significantly different among all groups (P>0.05). It is concluded that RPSLP promotes the development of immune organ and enhances immunity in mice at certain dose.

Keywords:Radixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides; mice; immune organ index; immunoglobulin; complement

多糖是天然的大分子活性物質(zhì)，廣泛存在于高等植物、動物和微生物細胞膜上，截止至今，從天然產(chǎn)物中提取出來的多糖已有上百種，多糖的抗腫瘤活性自20世紀30年代被發(fā)現(xiàn)后，植物多糖，尤其是中藥多糖成了科研工作者的研究熱點[1].研究發(fā)現(xiàn),中藥多糖有增強免疫力[2-3]、抗腫瘤[4]、抗氧化應(yīng)激[5]和抗疲勞[6]等多種藥理活性.太子參[Pseudostellariaheterophylla(Miq.) Pax ex Pax et Hoffm]為臨床常用的補益中藥，具有益氣健脾和生津潤肺之功效，其最主要的活性成分是高分子多糖[7].大量研究表明,太子參多糖有降糖[8]、抗氧化應(yīng)激[9]和增強免疫[10]等功能，太子參莖葉的化學(xué)成分與太子參類似，其多糖含量可達5%～10%[7]，但其在生產(chǎn)中卻被廢棄.本實驗室前期研究表明，太子參莖葉多糖(Radixpseudostellariaestem and leaf polysaccharides, RPSLP)可以顯著提高斷奶仔豬血清的免疫球蛋白和補體含量，增加回腸分泌型免疫球蛋白A的含量[11-12]，而關(guān)于RPSLP的其他研究鮮見報道.本試驗選取小鼠為動物模型，灌胃RPSLP后，通過檢測小鼠的免疫器官指數(shù)和血清免疫球蛋白、補體含量的變化，探討RPSLP對小鼠免疫功能的影響，也為RPSLP的臨床推廣應(yīng)用提供參考依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 60只6～8周齡的雄性昆明小鼠，體重(20±2) g，購自福建醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，許可證號：SYXK(閩)2014-0003.

1.1.2 試驗藥物 RPSLP由福建省柘榮縣太子參生產(chǎn)商惠贈.莖葉經(jīng)粉碎后，用蒸餾水浸提，醇沉冷凍干燥后得粗多糖，其最優(yōu)提取率為3.60%，比林志娟等[13]提取的太子參多糖得率高.粗多糖經(jīng)Sevage法去除蛋白純化后，多糖含量達70%.

1.1.3 儀器與試劑 儀器有AL104電子天平(梅特勒—托利多儀器上海有限公司)、Mlli-Q超純水系統(tǒng)(濟南賽暢科學(xué)儀器有限公司)、SK-1快速混勻器(金壇市科析儀器有限公司)、HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)和RT-9900半自動生化分析儀(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司).

免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)試劑盒和補體(C3、C4)試劑盒由浙江伊利康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn).

1.2 試驗動物的分組與處理

小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分為空白對照組，RPSLP低、中、高劑量組，每組15只.各組小鼠均自由采食、飲水.

空白對照組小鼠灌胃0.2 mL·d-1蒸餾水；低、中、高劑量組分別灌胃50、100、200 mg·kg-1·d-1RPSLP，連續(xù)14 d.

1.3 指標測定

1.3.1 體重的測定 試驗開始前與結(jié)束后對小鼠進行空腹稱重，并計算試驗期間的增重.增重(g)=末重(g)-初重(g).

1.3.2 免疫器官指數(shù)的測定 小鼠末次給藥后24 h稱重，采用頸椎脫臼法處死小鼠，取其胸腺和脾臟，分別稱重，計算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù).脾臟(胸腺)指數(shù)=脾臟(胸腺)重量(mg)/小鼠體重(g).

1.3.3 血清免疫球蛋白和補體含量的測定 小鼠末次給藥后24 h摘眼球采血，全血于3000 r·min-1離心10 min，收集血清，分裝于Eppendorf管中，用于免疫球蛋白和補體的檢測.血清免疫球蛋白和補體的含量采用免疫比渾濁法檢測，用RT-9900半自動生化分析儀測定，具體操作步驟見試劑盒說明書.

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準差 ”表示，用SPSS軟件進行單因素方差分析，LSD法進行多重比較.

2 結(jié)果與分析

2.1 RPSLP對小鼠體重的影響

RPSLP對小鼠體重的影響見表1.由表1可知：試驗開始時，各組小鼠間的初重差異不顯著(P>0.05)；試驗結(jié)束時，與空白對照組相比，各劑量組小鼠的體重均有提高，但差異不顯著(P>0.05)，各劑量組間的差異也不顯著(P>0.05)；試驗結(jié)束前后，與空白對照組相比，各劑量組小鼠的增重均有提高，但只有中劑量組的增重顯著提高(P<0.05).

2.2 RPSLP對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

RPSLP對小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響見表2.由表2可知：與空白對照組相比，高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)顯著提高(P<0.05)，低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)有提高，但差異不顯著(P>0.05)；各劑量組間相比，高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)顯著高于低、中劑量組(P<0.05)，而胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.05).

表1 RPSLP對小鼠體重的影響1)Table 1 Effect of RPSLR on the weight of mice

1)與空白對照組比較，同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

表2 RPSLP對小鼠免疫器官指數(shù)的影響1)Table 2 Effect of RPSLP on the spleen index and thymus index of mice

1)與空白對照組比較，同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.3 RPSLP對小鼠免疫球蛋白和補體含量的影響

RPSLP對小鼠免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量的影響見表3.由表3可知：與空白對照組相比，低、中劑量組小鼠的IgA含量顯著提高(P<0.05)，中劑量組小鼠的IgG含量有提高，但差異不顯著(P>0.05)，低劑量組小鼠的IgM含量顯著提高(P<0.05)，高劑量組小鼠的IgM含量顯著降低(P<0.05)；各劑量組間相比，低劑量組小鼠的IgA和IgM含量均最高，且提高顯著(P<0.05)，高劑量組小鼠的IgA和IgM含量最低，差異顯著(P<0.05).

表3 RPSLP對小鼠免疫球蛋白含量的影響1)Table 3 Effect of RPSLP on the content of immunoglobulin in mice

1)與空白對照組比較，同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

RPSLP對小鼠補體C3和C4含量的影響見表4.由表4可知：與空白對照組相比，中、高劑量組小鼠的C3含量顯著提高(P<0.05)，低、高劑量組小鼠的C4含量有提高，但差異不顯著(P>0.05)；各劑量組間相比，中、高劑量組小鼠的C3含量顯著高于低劑量組(P<0.05)，而C4含量的差異不顯著(P>0.05).

表4 RPSLP對小鼠補體含量的影響1)Table 4 Effect of RPSLP on the content of complement in mice

1)與空白對照組比較，同列數(shù)據(jù)后附不同字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同字母者表示差異不顯著(P>0.05).

3 討論

中藥多糖能有效刺激胃腸道，促進消化腺酶的分泌及日糧營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收利用，增加機體體重，有利于機體的健康生長.關(guān)于多糖對機體體重影響的研究很多，但研究結(jié)果各不相同.鐘建春等[14]給小鼠灌胃人工冬蟲夏草多糖的結(jié)果表明，與對照組相比，低、中、高劑量多糖提取物對小鼠終期的增質(zhì)量有降低趨勢，但差異不顯著(P>0.05)；而許丹妮[15]研究表明，不同劑量金線蓮多糖均能促進健康小鼠體重的增長.本試驗給小鼠灌胃不同劑量RPSLP的結(jié)果表明，試驗結(jié)束前后，與空白對照組相比，中劑量組小鼠的增重顯著提高(P<0.05)，這一結(jié)果與本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)的“RPSLP可以提高斷奶仔豬的日增重”[12]相似.但本試驗小鼠的增重與RPSLP的劑量并不呈劑量依賴性，高劑量組的增重反而低于中劑量組.原因可能是高劑量RPSLP結(jié)合了大量的水，導(dǎo)致小鼠消化道的食糜黏度增加，降低了日糧營養(yǎng)物質(zhì)與酶的相互作用，使營養(yǎng)成分的吸收率下降，導(dǎo)致小鼠的增重不明顯.表明一定劑量的RPSLP可以促進小鼠機體的生長.

免疫器官是免疫應(yīng)答的主要場所，免疫器官指數(shù)反映了免疫器官的發(fā)育和免疫功能.本試驗結(jié)果顯示，與空白對照組相比，高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)顯著提高(P<0.05)，這一結(jié)果與蔡晶等[16]的研究結(jié)果一致，表明RPSLP具有與太子參多糖相似的功效.研究表明，多糖能增加健康小鼠免疫器官的重量并提高巨噬細胞的吞噬指數(shù)[17].本試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，低劑量組小鼠的胸腺指數(shù)有提高，但差異不顯著(P>0.05).Cho et al[18]研究也表明，飼喂正常小鼠馬格利多糖(韓國傳統(tǒng)米酒)，與對照組相比，多糖組小鼠胸腺指數(shù)的提高不顯著(P>0.05).

免疫球蛋白是由漿細胞分泌的一類蛋白質(zhì)，是非特異性免疫的固有免疫分子，主要參與體液免疫.研究表明，多糖能夠促進血清免疫球蛋白的生成，提高機體免疫力[19-20].張成孜[21]研究表明，滁菊多糖能顯著提高老齡小鼠血清IgG和IgM的水平，增強免疫功能，對小鼠起保健作用.華巖等[22]對負重力竭游泳的小鼠進行研究，發(fā)現(xiàn)牡蠣多糖能夠極顯著提高血清IgG、IgA和IgM的含量.本試驗結(jié)果也顯示：與空白對照組相比，低、中劑量組小鼠的IgA含量顯著提高(P<0.05)；中劑量組小鼠的IgG含量有提高，但差異不顯著(P>0.05)；低劑量組小鼠的IgM含量顯著提高(P<0.05).表明一定劑量的RPSLP可以顯著提高小鼠血清免疫球蛋白的水平，提高體液免疫功能.

補體也是非特異性免疫的固有免疫分子，其中的C3和C4是補體系統(tǒng)中的兩種主要成分，經(jīng)活化后發(fā)揮作用.許丹妮等[23]研究金線蓮多糖的免疫調(diào)節(jié)活性，發(fā)現(xiàn)不同劑量多糖組健康小鼠血清的C3和C4水平有不同程度的提高.本試驗結(jié)果表明，與空白對照組相比，中、高劑量組小鼠的C3含量顯著提高(P<0.05)，這一結(jié)果與“大蒜素和枸杞多糖可以提高草魚血清C3水平”的結(jié)果[24]相一致.林希[25]研究表明，紫菜粗多糖不能顯著提高斜帶石斑魚血清的C4含量.本試驗結(jié)果也表明，低、高劑量組小鼠的C4含量有提高，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05).可見，一定劑量的RPSLP可以激活部分補體分子，機體非特異性免疫功能是否有提高尚待進一步研究.

本試驗結(jié)果表明，一定劑量的RPSLP對小鼠有促生長作用，能夠顯著提高小鼠的免疫器官指數(shù)，促進血清免疫球蛋白和補體的分泌，但小鼠各指標的變化與RPSLP的劑量并不呈劑量依賴性.傳統(tǒng)中獸醫(yī)學(xué)研究認為，中草藥具有雙向調(diào)節(jié)作用.錢華[26]研究表明，飼喂昆明小鼠不同劑量的香菇多糖，與對照組相比，高劑量多糖可破壞脾臟巨噬細胞，使細胞膜模糊不清，有出血現(xiàn)象，而低、中劑量組則無明顯變化.本試驗結(jié)果還表明，高劑量組小鼠的胸腺指數(shù)和IgM含量均顯著低于空白對照組(P<0.05)，與錢華[26]的研究結(jié)果相似，但對于RPSLP產(chǎn)生負作用的具體原因及是否有抑制作用，還需進一步研究確定.

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(責任編輯:施曉棠)

EffectofRadixpseudostellariaestemandleafpolysaccharidesonimmuneorganindexandimmunoglobulin,complementinserumofmice

TAN Xinzhu1, WU Xiaoqing1, Lü Mingqi1, WANG Guansong1, LI Jian2, QIN Tao2, HUANG Yifan2, MA Yufang1
(1.University Key Laboratory for Integrated Chinese Traditional and Western Veterinary Medicine and Animal Healthcare in Fujian Province, Fuzhou, Fujian 350002, China；2.Fujian Key Laboratory of Traditional Chinese Veterinary Medicine and Animal Health (Fujian Agriculture and Forestry University), Fuzhou, Fujian 350002, China)

S852.2

A

1671-5470(2017)05-0590-05

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2017.05.018

2017-03-21

2017-05-16

福建農(nóng)林大學(xué)科研發(fā)展基金資助項目(KF2015092).

檀新珠(1990-)，女，碩士研究生.研究方向：中西醫(yī)獸醫(yī)結(jié)合.Email:18905026614@163.com.通訊作者馬玉芳(1970-)，女，教授，碩士生導(dǎo)師.研究方向：臨床獸醫(yī)學(xué).Email:myfau850@sohu.com.