26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑高效液相色譜分析

徐 妍，劉細(xì)平，潘 靜，東 琴，高敬雨，劉潤峰

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26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑高效液相色譜分析

徐 妍1，劉細(xì)平2，潘 靜1，東 琴1，高敬雨1，劉潤峰1

(1.北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 102206；2.江西威敵生物科技有限公司，江西南昌 331700)

建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中有效成分的分析方法。采用ZORBAX SB C18反相柱和紫外可變波長檢測(cè)器，以乙腈-水為流動(dòng)相(磷酸調(diào)制弱酸性液體)同時(shí)測(cè)定試樣中嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的含量。嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.16和0.21，變異系數(shù)分別為2.52%和1.03%，平均回收率分別為99.34%和99.51%。該方法操作簡便，分離效果好，精密度與準(zhǔn)確度高，可同時(shí)快速測(cè)定嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺含量。

嘧菌環(huán)胺；啶酰菌胺；高效液相色譜法；分析

嘧菌環(huán)胺(cyprodinil)化學(xué)名稱為-(4-甲基-6-環(huán)丙基嘧啶-2-基)苯胺，是瑞士諾華(現(xiàn)先正達(dá)公司)開發(fā)的嘧啶胺類殺菌劑。其作用機(jī)理是抑制真菌水解酶分泌和蛋氨酸的生物合成，同三唑類、咪唑類、嗎啉類、二羧酸亞胺類、苯基吡咯類等無交互抗性。嘧菌環(huán)胺具有保護(hù)、治療、葉片穿透及根部內(nèi)吸活性。啶酰菌胺(boscalid)化學(xué)名稱2-氯--(4′-氯聯(lián)苯-2-基)煙酰胺，是BASF公司開發(fā)的新型煙酰胺類殺菌劑，其作用機(jī)理是線粒體呼吸鏈中琥珀酸輔酶Ｑ還原酶抑制劑，與其他殺菌劑無交互抗性。藥效試驗(yàn)證明：將二者混合制成的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑，保護(hù)性能好，持效期長，尤其是對(duì)葡萄、韭菜、辣椒、草莓、花卉等多種作物的灰霉病具有優(yōu)異的防效，同時(shí)對(duì)油菜、萵苣、馬鈴薯、辣椒、番茄、花生等作物的菌核病、早疫病、白粉病、炭疽病、葉霉病等均有很好的預(yù)防和治療效果，應(yīng)用前景廣泛[1-5]。但有關(guān)嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑的高效液相色譜分析方法，目前尚未見公開報(bào)道。

該試驗(yàn)使用ZORBAX SB C18柱和紫外可變波長檢測(cè)器，以乙腈-水(磷酸調(diào)制弱酸性液體)溶液為流動(dòng)相，用外標(biāo)法對(duì)有效成分進(jìn)行分析和定量。該方法同時(shí)適用于嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)原藥及制劑的分析，具有簡便、快速、準(zhǔn)確、分離效果好的特點(diǎn)，適用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀，具有紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；島津UV-1800紫外可見分光光度計(jì)；乙腈為色譜純；水為新蒸二次蒸餾水；嘧菌環(huán)胺標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%)、啶酰菌胺標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院；26%嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑試樣。

1.2 色譜條件

Agilent ZORBAX SB C18不銹鋼柱：150 mm′4.6 mm(i.d.)；檢測(cè)波長210 nm；流動(dòng)相：乙腈-水(0.05%磷酸水溶液，體積比55︰45)；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量5 μL；柱溫25 ℃。嘧菌環(huán)胺的保留時(shí)間約為4.5 min，啶酰菌胺的保留時(shí)間約為7.1 min。典型液相色譜分離圖見圖1、2。

圖1 嘧菌環(huán)胺、啶酰菌胺標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑液相色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1標(biāo)樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取嘧菌環(huán)胺標(biāo)樣約0.006 g和啶酰菌胺標(biāo)樣約0.020 g(精確至0.0002 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容，搖勻后備用。

1.3.2試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取試樣約0.1 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解、定容，用0.22 μm有機(jī)濾膜過濾后備用。

1.3.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值，直至相鄰2針嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)按下式計(jì)算：

式中：A為標(biāo)樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積平均值，A為試樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)峰面積平均值，m為標(biāo)樣溶液中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量(g)，m為試樣的質(zhì)量(g)，為標(biāo)樣中嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長的選擇

對(duì)嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺標(biāo)樣溶液分別進(jìn)行紫外掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。當(dāng)選用210 nm作為檢測(cè)波長時(shí)，嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺均有較強(qiáng)吸收峰，同時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動(dòng)相無吸收。因此，為兼顧兩者均有較好的吸收，將檢測(cè)波長選為210 nm。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的特點(diǎn)，分別試用不同比例的甲醇、水，乙腈、水作為流動(dòng)相對(duì)試樣進(jìn)行分離檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動(dòng)相較理想。當(dāng)流速控制在1.0 mL/min時(shí)，有效成分能很好地分離，峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間短。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動(dòng)相，體積比為55︰45。

2.2 線性相關(guān)性測(cè)定

配制一系列不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的嘧菌環(huán)胺(啶酰菌胺)標(biāo)樣溶液，按上述色譜操作條件，測(cè)定相應(yīng)的響應(yīng)值，并以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。嘧菌環(huán)胺線性方程為=24.476 5+18.171 4，=0.999 3；啶酰菌胺線性方程為=32.017 7－33.013 2，=0.999 5。

2.3 方法精密度測(cè)定

對(duì)同一26%嘧菌環(huán)胺?啶酰菌胺懸浮劑平行測(cè)定5次，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。測(cè)得嘧菌環(huán)胺和啶酰菌胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.16和0.21，變異系數(shù)分別為2.52%和1.03%(表1)。由此可知該法精密度較高，可行。

表1 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑精密度測(cè)定

2.4 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

采用標(biāo)準(zhǔn)品添加法，在已知含量的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中加入一定量的嘧菌環(huán)胺、啶酰菌胺的標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜操作條件分析，計(jì)算回收率。測(cè)得嘧菌環(huán)胺添加回收率為98.60%~ 100.66%，平均回收率為99.34%；啶酰菌胺添加回收率為98.38%~101.05%，平均回收率為99.51%(表2)。由此可知該法準(zhǔn)確度較高，可準(zhǔn)確定量。

表2 26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑回收率測(cè)定

3 結(jié) 論

綜上所述，試驗(yàn)建立的26%嘧菌環(huán)胺·啶酰菌胺懸浮劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的高效液相色譜分析方法，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，分離效果好，并且操作簡便，快速，適用于產(chǎn)品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。

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Analysis of Cyprodinil·Boscalid 26% SC by HPLC

XU Yan1, LIU Xiping2, PAN Jing1, DONG Qin1, GAO Jingyu1, LIU Runfeng1

(1.Beijing Mindleader Agroscience Co., Ltd, Beijing 102206, China;2. Jiangxi Vegcides Biotechnology Co., Ltd，Jiangxi Nanchang 331700, China)

The HPLCmethod for the determination of active ingredient content in cyprodinil? boscalid 26% SC was established. The simultaneous determination of cyprodinil and boscalid in the samples was conducted with ZORBAX SB C18column and UV-absobance detector, while the mixture solution of acetonitrile-water was used as the mobile phase acidified by phosphoric acid. The results showed that the standard deviations for cyprodinil and boscalid were 0.16 and 0.21, variation coefficient were 2.52% and 1.03%, and average recovery were 99.34% and 99.51%, respectively. The method has the advantages of simple, convenient, good separating effect, high precision and accuracy, which can be used for the simultaneous determination of cyprodinil and boscalid.

cyprodinil; boscalid; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.02.11

TQ450.7

A

1009-6485(2017)02-0049-03

徐妍(1975—)，女，遼寧昌圖人，高級(jí)工程師，博士，主要從事農(nóng)藥劑型加工及使用技術(shù)研究。Tel：010-56071484，E-mail：xuayn@mdldagro.com。

2016-12-21。