HCPT/PEG—PLA納米膠束中HCPT含量測定的方法學(xué)建立

馬萍+金武龍

【中圖分類號】R739.8 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）10-00-01

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；AL204電子天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KH5200E型超聲波清洗器：昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司。

1.2 藥品與試劑

10-HCPT標(biāo)準(zhǔn)品（HPLC≥98%）四川省維克奇生物科技有限公司 批號：130314；單甲氧基聚乙二醇外消旋聚乳酸共聚物mPEG5000-PDLLA30000 濟(jì)南岱罡生物工程有限公司 ；HCPT/PEG-PLA納米膠束（本實(shí)驗(yàn)室自制）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吸收波長的選擇

準(zhǔn)確量取10mg HCPT標(biāo)準(zhǔn)品置于200ml容量瓶中，用甲醇定容，得到儲備液的濃度為0.05mg/ml。量取一定體積的儲備液，甲醇稀釋定容，配制成濃度為1ug/ml的HCPT標(biāo)準(zhǔn)品溶液。以甲醇為空白，用紫外分光光度計(jì)于200-400nm波長范圍內(nèi)掃描標(biāo)準(zhǔn)溶液的波譜，結(jié)果（見圖1-1）。稱取一定量的mPEG-PLA共聚物載體，將其溶于甲醇，制備共聚物甲醇溶液，在200-400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行波普掃描，結(jié)果（見圖1-2）。稱取一定量的HCPT/PEG-PLA納米膠束凍干粉，甲醇溶解后進(jìn)行波譜掃描，結(jié)果（見圖1-3）。由掃描圖譜可知HCPT標(biāo)準(zhǔn)溶液在384nm處有吸收，此處無雜質(zhì)峰干擾，故選用384nm作為檢測波長。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

準(zhǔn)確量取10mg HCPT標(biāo)準(zhǔn)品，放入200ml棕色容量瓶中，用甲醇定容，混勻。準(zhǔn)確量取混勻的HCPT標(biāo)準(zhǔn)液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分別置于10ml棕色容量瓶中，甲醇定容，備用。

2.3 HCPT標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取配好的一系列不同濃度的溶液用紫外分光光度計(jì)在波長384nm處測定紫外吸收，以甲醇為空白，測得各溶液的吸光度（見表1-1），計(jì)算回歸方程：y=0.1127x-0.015 （R=0.9995） 并繪制吸光度與HCPT濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，（見圖1-4）。

2.4 精密度考察

分別取上述制備的低、中、高（2、4、7ug/ml）三種濃度的HCPT溶液，用紫外分光光度計(jì)測定吸光度。日內(nèi)精密度的測定方法為：1天內(nèi)不同時間點(diǎn)測定5次。日間精密度的測定方法為：每天測定1次，連續(xù)測定5天，根據(jù)測定結(jié)果計(jì)算日內(nèi)及日間精密度，結(jié)果（見表1-2）。

結(jié)果表明，低、中、高三種濃度的HCPT標(biāo)準(zhǔn)溶液日內(nèi)精密度和日間精密度的RSD均小于5%，符合方法學(xué)要求。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取空白膠束15份，每5份為一個劑量組，分為三組，每組加入不同濃度HCPT標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使三組膠束的終濃度分別為2 ug/m1（低濃度）、4 ug/m1（中濃度）、7ug/m1（高濃度），超速離心后，取上清液測定HCPT含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果（見表1-3）。

2.6 測定膠束的包封率

藥物的包封率（entrapmenteffieieney， EE）是評價膠束質(zhì)量的重要指標(biāo)，它是指膠束中載入的藥物質(zhì)量與加入制備體系中藥物質(zhì)量的比。一般情況下包封率越高制劑質(zhì)量相對越好。取一定量的HCPT膠束凍干粉，加入甲醇使膠束破壞，藥物釋放，用紫外分光光度計(jì)測吸光度，結(jié)合HCPT含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線，按下列公式計(jì)算包封率：HCPT/PEG-PLA納米膠束包封率計(jì)算公式：包封率（EE%）=（膠束中HCPT的質(zhì)量/HCPT投藥量）×100%。

3 討論

HCPT/PEG-PLA納米膠束中HCPT含量測定方法常采用紫外分光光度計(jì)或高效液相色譜（HPLC）法。由于HCPT在紫外區(qū)有吸收，本部分建立了紫外分光光度法測定HCPT含量的方法，為制備劑型和優(yōu)化處方提供了科學(xué)而實(shí)用的分析方法和評價手段。較HPLC方法的復(fù)雜、費(fèi)時，UV能夠簡單、方便、快速的測定HCPT的含量。故在篩選處方工藝，評價制劑質(zhì)量時，可采用UV法粗略卻快速地檢測HCPT/PEG-PLA納米膠束中主藥的含量，可節(jié)省時間，減少浪費(fèi)。

4 結(jié)論

本文建立了紫外分光光度計(jì)測定HCPT含量的方法與標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)紫外掃描確定藥物吸收波長為384nm，且載體在此波長處無吸收，不干擾測定。

藥物濃度在2.0-7.0ug/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：y=0.1127x-0.015 （R=0.9995），日內(nèi)、日間精密度均小于5%，平均回收率為99.4%，方法簡便、可行。endprint