□ 王 妮 長春職業(yè)技術(shù)學院 食品分院 劉長姣 吉林工商學院 糧油食品深加工實驗室 李雪璨 長春職業(yè)技術(shù)學院 食品分院

微波萃取分光光度法測定紅景天總黃酮含量的不確定度評定

□ 王 妮 長春職業(yè)技術(shù)學院 食品分院 劉長姣 吉林工商學院 糧油食品深加工實驗室 李雪璨 長春職業(yè)技術(shù)學院 食品分院

評定微波萃取分光光度法測定紅景天總黃酮含量的不確定度，建立了數(shù)學模型，對模型中各影響因素的不確定度進行計算和評定。結(jié)果表明，樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)是合成不確定度的主要來源，其中標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)影響最大。按照JJF1059-2012對各不確定度分量合成和擴展，測得的擴展不確定度為0.70 g/100g（置信概率95%）。

紅景天；不確定度；分光光度法；總黃酮

紅景天是藥食同源中藥材，現(xiàn)代藥理學研究表明，紅景天具有抗衰老、抗缺氧、抗疲勞、提高免疫力等作用[1]。紅景天中黃酮類化合物具有防止心腦血管疾病、降血糖、增強免疫力等多種功效，已被列為保健食品的功能因子[2-3]。本文在前期建立的微波萃取-分光光度法提取和測定紅景天總黃酮成分的基礎上，根據(jù)JJF1059－2012[4]，對微波萃取-分光光度法測定紅景天總黃酮成分結(jié)果的不確定度進行了計算和評定，為評定測量結(jié)果質(zhì)量提供了科學依據(jù)，同時也為紅景天總黃酮成分在后續(xù)作為食品添加劑的開發(fā)利用提供科學的指導[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大花紅景天（亳州亳藥堂）、蘆丁標準品（貴州迪大生物）和亞硝酸鈉、硝酸鋁、無水乙醇、氫氧化鈉等均為分析純。MARS5微波儀（美國CEM）、TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析）。

1.2 方法

測定條件：蘆丁標準溶液配制0.2 mg/mL。

標準曲線的繪制：準確吸取蘆丁標 準溶液 0.0、0.50、1.00、2.00、3.00 mL和4.00 mL于10 mL容量瓶中，加入30%乙醇溶液至5.0 mL，0.4 mL 5%亞硝酸鈉溶液，振搖，靜置5～6 min后加入0.4 mL 10%硝酸鋁溶液，振搖，靜置5～6 min后加入4.0 mL 1.0 mol/L氫氧化鈉溶液，以蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。靜置15 min后，在510 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，回歸方程為y=11.214x-0.007 2，相關(guān)系數(shù)R=0.999 9。

樣品處理：紅景天樣品清洗干燥，粉碎過80目篩得紅景天粉。取8個萃取罐，6個為1.0 g紅景天干粉，2個為空白。微波萃取條件：固液比1︰10，溫度80 ℃，爬升時間7 min，乙醇55%，萃取功率200 W，4 min。萃取結(jié)束后，3 500 r/min，5 min。取上清液0.5 mL于10 mL容量瓶中，30%乙醇定容后取0.2 mL測定，其余步驟同標準曲線的繪制，在510 nm處測定吸光度。

2 數(shù)學模型建立

依據(jù)微波萃取分析分光光度法測定紅景天總黃酮含量的計算過程，樣品結(jié)果以g/100 g表示，建立數(shù)學模型如下：

式中：X為紅景天中總黃酮的含量，g/100 g；m為紅景天樣品的質(zhì)量，g；C為樣品液中的總黃酮濃度，mg/mL；F：為稀釋倍數(shù)。

3 不確定度分量的評定

3.1 樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)

3.1.1 標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)

標準樣品純度不確定度urel1(C)。蘆丁標準樣品的純度為樣品（≥98%），為B類評定。均勻分布，ɑ=1%包含因子k=3。其不確定度為：

標準使用溶液帶來的不確定度urel2(C)。標準物質(zhì)稱量不確定度urel2(m)：標準物質(zhì)稱量為5.0 mg，天平的允許差為±0.1 mg，為B類評定，設在區(qū)間內(nèi)均勻分布，k=3。其不確定度u2(m)=0.057 7 mg。

容量瓶體積不確定度urel2(V)：①標準使用液于25 mL容量瓶定容，滿足規(guī)定，25 mL容量瓶（A級）的容量允差為±0.03 mL，屬均勻分布，則其不確定度為u2(V)=0.017 32 mL；②溫度引起體積變動的不確定度u2(T)：實驗室內(nèi)溫度變動±4 ℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃，按95%置信概率區(qū)間，產(chǎn)生的體積變化量=體積×膨脹系數(shù)×ΔT=0.021 mL，u2(T)=（25×2.1×10-4×4）/1.96=0.010 7 mL。

3.1.2 標準使用溶液移取帶來的不確定度urelt(C)

吸量管校正不確定度urelt(V)。標準使用液移取用5 mL吸量管一支，5 mL吸量管（A級）的容量允差為±0.025 mL，屬均勻分布。urelt(V)=0.014 4 mL。

溫度引起體積變動的不確定度urelt(T)。實驗室內(nèi)溫度變動±4 ℃，水的膨脹系數(shù)為2.1×10-4/℃。按95%置信概率區(qū)間時，產(chǎn)生的體積變化量=0.004 2 mL，urelt(T)=0.002 14。

則標準使用液移取帶來的不確定度：urelt(C)=[(V)+u(T)]1/2/V=0.002 91。

3.1.3 分光光度計測定總黃酮的不確定度urelins(C)

采用B類方法評定，分光光度計測定紅景天總黃酮的精密度為1.34%，屬均勻分布，包含因子k=3，其相對不確定度為：

3.2 樣品稱量質(zhì)量的測定不確定度urelsam(m)

樣品稱量質(zhì)量為1.0 g，允許差為±0.1 mg，為B類評定，設在區(qū)間內(nèi)均勻分布，k=。稱量不確定度：

3.3 樣品液稀釋過程帶來的不確定度urelsam(V)

樣品液定容容量瓶不確定度。樣品液定容于10 mL容量瓶，10 mL容量瓶（A級）的容量允差為±0.020 mL，屬均勻分布。usamv(V1)=0.020/3=0.011 54 mL。

由上述可得樣品液移取帶來的不確定度：

3.4 測量用樣液體積的不確定度urelsamt(V)

3.5 樣品測定重復性帶來的不確定度urel()

重復測定三次，樣品中總酚平均含 量 為 X=17.25 g/100 g，s=0.230 9，結(jié)果平均值帶來的不確定度為：

4 結(jié)果報告

根據(jù)數(shù)學模型中各影響因子是乘除關(guān)系，則合成不確定度為：

評定其擴展不確定度，取置信概率95%，取包含因子k=2，則：

U=U(X)×2=0.70 g/100 g

報告結(jié)果：分光光度法測定黑米總酚含量為（17.25±0.70） g/100 g。

5 結(jié)論

采用微波萃取-分光光度法測定紅景天總黃酮含量，通過對模型中各因素進行不確定度分析，并根據(jù)JJ1059進行計算和合成。結(jié)果表明：當紅景天總黃酮含量在17.25 g/100 g時，測量結(jié)果的擴展不確定度為0.70 g/100 g，結(jié)果表明樣品液中總黃酮濃度的不確定度Urelsam(C)是合成不確定度的主要來源，且標準樣品配置帶來的不確定度urelstd(C)影響最大[6-8]。在標準樣品稱量過程中，引入的標準物質(zhì)稱量不確定度urel2(m)為0.011 54。因此，引入的不確定度最大。而標準曲線方程擬合效果較好，R值為0.999，引入的不確定度相對較小。所以，在實驗過程中盡量提高標準樣品的稱量準確性，提高標準曲線的相關(guān)性，都可以更好的控制實驗結(jié)果的質(zhì)量。參考文獻

[1]張彧,高云,付榮,等.中藥紅景天提取物抗氧化活性的研究[J].食品科學,2004(10):315-318.

[2]張莉,趙淑月,鄭愷,等.紅景天植物的抗自由基作用研究[J].長春中醫(yī)學院學報,2002(3):44.

[3]魏良柱,李筱玲.黃酮類化合物藥理活性研究進展[J].陜西農(nóng)業(yè)科學,2014(12):52-56.

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[5]中國實驗室國家認可委員會.實驗室認可與管理基礎知識[M].北京:中國計量出版社,2003.

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[7]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.JJG 196-2006 常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].北京:中國計量出版社,2006.

[8]孟繁磊,牛紅紅,蔡紅梅,等.分光光度法測定水中亞硝酸鹽含量的不確定度評定[J].食品研究與開發(fā),2016(9):174-177.