基于蟲蛀對白芷有效成分的影響探討蟲蛀白芷的資源價值

鄭瀟瀟，王瀟霖，黃鳳，雷楠，蔣桂華

基于蟲蛀對白芷有效成分的影響探討蟲蛀白芷的資源價值

鄭瀟瀟，王瀟霖，黃鳳，雷楠，蔣桂華

目的：研究蟲蛀白芷是否還有資源利用價值。方法：用高效液相色譜法測定10批蟲蛀白芷中歐前胡素和異歐前胡素的含量，并且比較各批蟲蛀前后歐前胡素的含量變化。 結(jié)果：蟲蛀白芷中仍含有較多的歐前胡素和異歐前胡素，其中歐前胡素含量均高于2015版《中國藥典》白芷項下含量測定的標(biāo)準(zhǔn)，且蟲蛀前后歐前胡素變化不呈現(xiàn)有規(guī)律的下降趨勢，且與蟲蛀程度也無相關(guān)性。結(jié)論：蟲蛀白芷仍然具有價值，可以作為提取歐前胡素和異歐前胡素的原料藥。

蟲蛀；白芷；歐前胡素；異歐前胡素

白芷（Angelicae dahuricae Radix）為傘形科植物白芷Angelicae dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelicae dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。[1]是一味具有悠久的藥用歷史的臨床常用藥，具有解表散寒，祛風(fēng)止痛，宣通鼻竅，燥濕止帶，消腫排膿的功效，用于治療感冒頭痛，眉棱骨痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻淵，牙痛，帶下，瘡瘍腫痛[1]。

白芷的主要活性物質(zhì)為香豆素類物質(zhì)，是化合物歐前胡素、異歐前胡素的提取原料之一。歐前胡素和異歐前胡素具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗腫瘤、舒張血管活性的作用[2]以及活血化瘀[3]、抗內(nèi)毒素血癥[4]的作用。有研究[5]表明，歐前胡素是Mcl-1降解的一個誘導(dǎo)劑，可以有效抑制耐藥性肝癌細胞的增殖。因此，歐前胡素可以作為一種有效的小分子抗癌藥劑，在肝癌治療特別是耐藥性肝癌的治療中存在巨大應(yīng)用前景。另有研究表明，歐前胡素能抑制血管壁增厚、心肌肥大的作用，對高血壓、動脈粥樣硬化和肥厚型心肌病等有治療作用[6]。急性毒性和安全藥理學(xué)研究[7]結(jié)果表明歐前胡素安全范圍較大，毒性較容易控制，且對正常動物（小鼠、大鼠、犬）的降壓作用不明顯，具有較大的臨床應(yīng)用可能性。

由于白芷富含多糖和淀粉類成分，因此容易出現(xiàn)蟲蛀。四川產(chǎn)的白芷的采收季節(jié)是7月，采收堆放的白芷在高溫高濕的環(huán)境下極易出現(xiàn)生霉、蟲蛀等變質(zhì)現(xiàn)象。蟲蛀后的中藥材按照相關(guān)規(guī)定不能繼續(xù)作為中藥材使用。通過觀察不同程度蟲蛀白芷的外觀性狀，可以發(fā)現(xiàn)，白芷蟲蛀大多是從中心開始，是一個由內(nèi)向外的過程，因此，蟲蛀對木部的影響大于皮部，而白芷的根的超微結(jié)構(gòu)表明[8]，白芷的活性成分主要存在于分泌道中，分泌道主要分布在中柱鞘薄壁組織和次生韌皮部中，而在木部極少分布。因此，可以假說蟲蛀白芷中仍然存在香豆素類活性成分。本研究以歐前胡素和異歐前胡素為指標(biāo)成分，通過測定蟲蛀白芷中歐前胡素和異歐前胡素的含量，探討蟲蛀白芷是否還有資源利用價值。

1 材料

1.1 藥材

白芷：實驗所用藥材均于2008年7月18日采自四川遂寧中脊村白芷GAP生產(chǎn)基地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定為傘形科植物杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.Et Hook.f.var.formosana(Boiss)Sham et Yuan.的根。經(jīng)過在常溫養(yǎng)護室貯藏7年后，選取10批蟲蛀白芷藥材藥品，10批樣品的蟲蛀程度及外觀描述，見表1。

表1 10批蟲蛀白芷樣品的蟲蛀程度和性狀

1.2 試藥

甲苯（分析純）甲醇（色譜純）、純凈水、歐前胡素對照品（中國生物制品藥品檢驗所，批號：110826-200511）、異歐前胡素對照品（中國生物制品藥品檢驗所，批號：111827-201008）。

1.3 儀器

鼓風(fēng)干燥箱（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）、微型植物試樣粉碎機FZ102型（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）、萬分之一電子分析天平（SOP,賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）、十萬分之一電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）、KQ-50B型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司） 、Agilent 1200型HPLC儀（G1322A 泵、G1329B自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315C光電二極管陣列檢測器及色譜工作站）等。

2 方法與結(jié)果

參考本課題組前期建立的HPLC方法[9]測定歐前胡素和異歐前胡素的含量。由于含量測定方法為課題組前期建立，所以本次實驗未做方法學(xué)考察。

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實驗

色譜柱WondaSil,C18(250mm×4.6mm,5μm),美國）、體積流量為1mL﹒min-1、進樣量為10 μL；流動相為甲醇：水（70：30）；檢測波長254nm。在選定的色譜條件下，歐前胡素和異歐前胡素對照品的色譜圖，見圖1。

圖1 混合對照品HPLC色譜圖

圖2 蟲蛀白芷供試品色譜圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取歐前胡素和異歐前胡素適量，以甲醇為溶劑，制備成含歐前胡素(11.0 μg﹒mL-1)、異歐前胡素（13.24 μg﹒mL-1）的對照品混合溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取蟲蛀白芷粉末（過三號篩）約0.4g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超聲處理（功率300W,頻率50kHz）1小時，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 含量測定

精密吸取供試品溶液各10μL進樣，按上述色譜條件測定樣品中歐前胡素和異歐前胡素的含量。供試品色譜圖見圖2，測定結(jié)果見表2。

表2 蟲蛀白芷供試品中歐前胡素和異歐前胡素含量測定結(jié)果(%)

3 白芷蟲蛀前后歐前胡素含量比較

由于課題組前期在測定相同批次未出現(xiàn)蟲蛀現(xiàn)象的白芷樣品中歐前胡素的含量時，所采用的方法為《中國藥典》中白芷項下的含量測定方法[10]，所以，為了能夠與其對比，重新用相同的方法對蟲蛀后的相同批次的白芷樣品中歐前胡素含量進行測定，結(jié)果見表3，蟲蛀前后各批白芷歐前胡素含量變化，見圖3。

表3 白芷蟲蛀前后供試品中歐前胡素的含量測定結(jié)果(%)

圖3 白芷蟲蛀前后歐前胡素含量對比

4 結(jié)論與討論

通過以上研究發(fā)現(xiàn)：蟲蛀白芷中的仍存在活性成分歐前胡素和異歐前胡素。本研究中的10批蟲蛀后的白芷中歐前胡素含量均符合2015版《中國藥典》白芷項下含量測定要求（歐前胡素不得少于0.08%），且遠高于規(guī)定值。蟲蛀白芷的歐前胡素和異歐前胡素的含量或是蟲蛀前后歐前胡素的變化量都與其蟲蛀的程度無明顯的相關(guān)性。

因此可以推測蟲蛀對白芷中歐前胡素和異歐前胡素的影響不明顯，10批樣品中歐前胡素與異歐前胡素的含量差異主要受前期不同的加工過程影響（如是否熏硫）和不同貯藏條件（低溫、對抗貯藏等）的影響。蟲蛀前后白芷中歐前胡素的含量變化不呈現(xiàn)出有規(guī)律的大幅下降趨勢與白芷的活性成分存在的部位并不是蟲蛀發(fā)生的主要部位有關(guān)。

從本研究的結(jié)果可以看出，蟲蛀白芷雖然不能再作為中藥材使用，但仍然有作為藥用資源的價值，建議從資源的合理利用減少浪費角度出發(fā)，可從蟲蛀白芷中提取歐前胡素和異歐前胡素或者其他更多的活性成分。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典.2015年版.一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 楊小花,胡曉.歐前胡素與異歐前胡素的藥理學(xué)研究進展[J].南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2012,52(3)：95-100.

[3] 張慧,海廣范,栗志勇.等.白芷中活血化瘀有效組分的譜效關(guān)系[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2014,20(15)：139-143.

[4] 張慧,海廣范,栗志勇.等.白芷中抗內(nèi)毒素血癥有效組分的譜效關(guān)系[J].中成藥,2014,36(12)：2491-2497.

[5] 李華.歐前胡素抑制人耐藥性肝癌細胞增殖及其分子機制研究[D].浙江：浙江大學(xué).2014.

[6] Zhang Y,Cao YJ,Duan HJ,et al.Imperatorin prevents cardiac hypertrophy and the transition to heart failure via NO-dependent mechanisms in mice[J].Fitoterapia,2012,83(1)：60.

[7] 朱海,孫旖,夏振娜,等.歐前胡素急性毒性和安全藥理學(xué)研究[J].藥學(xué)實踐雜志,2013,31(6)：428-431.

[8] 陳瑩,胡正海,胡本祥,等.杭白芷根的分泌道超微結(jié)構(gòu)與其揮發(fā)油分泌的關(guān)系[J].西北植物學(xué)報,2015,35(4)：0716-0722.

[9] 賈敏如,王夢月,金曲嫫,等.HPLC測定13種白芷中歐前胡素和異歐前胡素素的含量[J].華西藥學(xué)志,2003,18(5)：361-362.

[10] 楊曦.白芷產(chǎn)地加工及貯藏技術(shù)研究[D].四川：成都中醫(yī)藥大學(xué),2010：40.

Research on the resources value of Angelicae dahuricae Radix damaged by worms based on its effective component/

ZHENG Xiao-xiao, WANG Xiao-lin, HUANG Feng, LEI Nan, JIANG Gui-hua//((School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan )

Objective: To research the value of Angelicae dahuricae Radix damaged by worms. Method: The contents of imperatorin and isoiperatorin in 10 batches Angelicae dahuricae Radix damaged by worms were detected by HPLC. The data were compared between sample before and after damage. Result: Angelicae dahuricae Radix damaged by worms still contained imperatorin and isoiperatorin. And the content of imperatorin met the requirements of Angelicae dahuricae Radix in Chinese Pharmacopoeia. The change of imperatorin content during the worm damage process didn’t show a regular downtrend and had no relationship with the worm damage. Conclusion: Angelicae dahuricae Radix damaged by worms still has the value to be used as the raw material to extract imperatorin and isoiperatorin.

Damages of worms; Angelicae dahuricae Radix; imperatorin; isoiperatorin

R 282

A

1674-926X(2017)04-003-03

國家自然科學(xué)基金（國家基礎(chǔ)科學(xué)人才培養(yǎng)基金）：中藥飲片調(diào)劑包裝貯藏養(yǎng)護技術(shù)研究（J1310034-07）；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)計劃課題：基于太赫茲時域光譜的4種川產(chǎn)道地藥材鑒別研究（重點）（2016JY0076）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

鄭瀟瀟（1990-），女（漢族），湖北荊州人，在讀碩士研究生，主要從事中藥品種與質(zhì)量的研究Tel：15184384637 Email：1204189289@qq.com

蔣桂華（1970-），女（漢族），四川成都人，現(xiàn)任成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院教授，博士學(xué)位，主要從事中藥品種與質(zhì)量的研究工作Email：11469413@qq.com

2016-12-26

（責(zé)任編輯：胡慧玲）