不同的前處理方式下接觸性DNA成功檢測的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用兩例

吳 婷 辛彩蕊 陳瑤清 趙幼鳴

1.湖南警察學(xué)院，湖南 長沙 410138；2.西藏警官高等?？茖W(xué)校，西藏 拉薩 850003

不同的前處理方式下接觸性DNA成功檢測的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用兩例

吳 婷1辛彩蕊2陳瑤清1趙幼鳴1

1.湖南警察學(xué)院，湖南 長沙 410138；2.西藏警官高等專科學(xué)校，西藏 拉薩 850003

隨著犯罪嫌疑人的反偵查意識及能力加強(qiáng)，接觸性檢材在現(xiàn)場提取檢材中所占的比重越來越大，現(xiàn)場接觸性DNA在案件偵破中發(fā)揮的作用也日漸明顯。由于人在接觸物體后，會在物體表面留下相應(yīng)的微量接觸性DNA，對這類接觸性微量檢材的檢驗是目前法醫(yī)DNA檢驗的熱點和難點。本文將從前期處理及DNA的提取、擴(kuò)增、電泳以及結(jié)果分析等方面對兩例實際案例進(jìn)行報道分析，希望能夠為公安實戰(zhàn)工作中對接觸類檢材的提取以及成功檢測分型提供方法和思路。

接觸性DNA；DNA提??；PCR，STR分型

一、簡要案情

(一)案例一

2014年×月×日，×市××區(qū)，孫××被搶劫，現(xiàn)場提取到捆綁受害人孫××的黃色塑料膠帶(見圖1.1)，經(jīng)×市公安局DNA實驗室檢驗并將數(shù)據(jù)入庫，事隔3月后在數(shù)據(jù)庫中與前科人員周××比中。

(二)案例二

2014年×月×日，×市××區(qū)，一洗浴中心顧客財物被偷，現(xiàn)場留有疑似小偷的黑色男式外褲一條(見圖1.2)，經(jīng)×市公安局DNA實驗室檢驗并將數(shù)據(jù)入庫比對，比中前科人員宋某某。

二、檢驗過程及結(jié)果

(一)案例一

1.提取DNA：找出可能為捆綁物黃色膠帶始末端點的位置，標(biāo)記為a、b、c、d四點，結(jié)合案情分析，膠帶捆綁物的端點嫌疑人最有可能接觸并多次接觸，選此點進(jìn)行檢驗的成功率相對較大，注意避開剪取附有的受害人毛發(fā)的膠帶部分，分別直接剪取四個點位置大小為5×5mm的檢材，采用Chelex-100+免疫膠體金法提取DNA。

2.PCR擴(kuò)增：使用GeneAmp PCR System 9700型擴(kuò)增儀和PowerPlex21試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)液(6×模板)；引物混合物(2×Primer，2×Mix)，進(jìn)行30次循環(huán)。擴(kuò)增程序為：96℃，1min，循環(huán)0次；94℃，10s，59℃，1min，72℃，30s，30次循環(huán)；60℃，10min，4℃，forever。

3.擴(kuò)增產(chǎn)物檢驗：取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物2μl加入10μl甲酰胺與ILS500(Promega公司)混合反應(yīng)液中(甲酰胺：ILS500=4：1)，經(jīng)熱變性后，使用3130XL Genetic Analyzer(ABI公司)進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用Genemapper軟件進(jìn)行分析，得出等位基因分型。

4.結(jié)果分析：通過對檢出的等位基因型進(jìn)行分析、比對得出結(jié)論，其中b、c、d三點均檢出受害人的成分，a點檢測出的等位基因型3個月后在數(shù)據(jù)庫中比中前科人員周××。(a點檢測圖譜見圖2.1)

(二)案例二

1.提取DNA：將黑色外褲輕柔翻轉(zhuǎn)，分別采用吸附法和粘取法收集脫落細(xì)胞，結(jié)合案情分析，正值天氣炎熱的初夏，褲子直接接觸皮膚且腰部出汗多，故采用吸附法收集脫落細(xì)胞時重點吸取了褲腰部，雙側(cè)褲管，標(biāo)記為K1；采用脫落細(xì)胞粘取儀收集脫落細(xì)胞時，重點粘取的褲腰部，雙側(cè)褲兜入口處，標(biāo)記為K2；均采用EZI法提取純化DNA。

2.PCR擴(kuò)增：使用GeneAmp PCR System 9700型擴(kuò)增儀和PowerPlex21試劑盒，采用試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

3.擴(kuò)增產(chǎn)物檢驗：取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物2μl加入10μl甲酰胺與ILS500(Promega公司)混合反應(yīng)液中(甲酰胺：ILS500=4：1)，經(jīng)熱變性后，使用3130XL Genetic Analyzer(ABI公司)進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用Genemapper軟件進(jìn)行分析，得出等位基因分型。

圖1.1 黃色膠帶捆綁物

圖1.2 黑色男式外褲

4.結(jié)果分析：通過對檢出的等位基因型入庫進(jìn)行分析、比對，比中前科人員宋某某。(K1檢測圖譜見圖2.2)

三、討論

對上述兩例案件成功檢測進(jìn)行分析及經(jīng)驗總結(jié)。首先，表面積較大的檢材，分區(qū)檢驗尤為重要，而采用先粘取表層，再吸取的方式，可以降低了背景DNA的影響，從而獲得了單一DNA分型結(jié)果。其次，因為接觸類檢材存在潛在DNA轉(zhuǎn)移[1]的發(fā)生，并且此類轉(zhuǎn)移與物體表面質(zhì)地及樣本的濕度密切相關(guān)，檢材的表面質(zhì)地很大程度上影響實驗者提取方法的選擇，現(xiàn)勘人員應(yīng)該及時出現(xiàn)場并且能結(jié)合案情科學(xué)地提取、包裝并運(yùn)送檢材；再次，我們在處理接觸類檢材必須做到檢驗時突出重點部位、選擇合適的檢驗策略與方案；最后，根據(jù)接觸性檢材的檢測結(jié)果下鑒定結(jié)論時應(yīng)十分謹(jǐn)慎。

圖2.1 a點檢測圖譜

圖2.2 K1檢測圖譜

[1]Goray M，Mitchell RJ，van Oorschot RA.Investigation of secondary DNA transfer of skin cells under controlled test conditions[J].Leg Med(Tokyo)，2010 May，12(3)：117-20.

ForensicapplicationofsuccessfuldetectionofcontactDNAunderdifferentpretreatment
methodsintwocases

WU Ting，XING Cai-rui，et al

1.Hunan Police Academy, Hunan, Changsha 410138, China;2.Tibet Police College, Tibet, Lhasa 850003, China

Since suspects have increased counter-investigation awareness and capacity，the touch DNA has increasing proportion in samples collected in the crime scene，and is playing a gradually obvious role in solving crimes.At the crime scene，people often left some relevant touch DNA on the object surface they contacted，so it's the hot spot as well as difficult point of present DNA testing.In this paper，two cases were analyzed from the aspects of pretreatment，DNA extraction，amplification，electrophoresis and result analysis.It is hoped that it can provide methods and ideas for the extraction of contact materials and the successful detection and classification of public security work.

Touch DNA；DNA extraction；PCR；STR genotype

D919

A

2095-4379-(2017)32-0242-02

吳婷(1988-)，女，碩士，湖南警察學(xué)院，助教，主要從事法醫(yī)物證學(xué)研究。