楊仕杰

（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司,黑龍江 哈爾濱 150025）

對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體含量檢測(cè)方法的研究

楊仕杰

（哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)股份有限公司,黑龍江 哈爾濱 150025）

目的：研究用HPLC法（高效液相色譜法）對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體含量進(jìn)行檢測(cè)的效果。方法：使用HPLC法對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體含量進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)采用α-酸糖蛋白柱，將0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液-異丙醇（90：10）作為流動(dòng)相，檢測(cè)時(shí)的波長(zhǎng)為210nm，柱溫為30℃。結(jié)果：甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的進(jìn)樣量在2.118ng～21.18ng范圍內(nèi)，其進(jìn)樣濃度與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，其平均回收率為99.28%，RSD為0.69%（n=9）。結(jié)論：用HPLC法對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體的含量進(jìn)行檢測(cè)具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。

甲磺酸羅哌卡因；光學(xué)異構(gòu)體；含量；HPLC；檢測(cè)

甲磺酸羅哌卡因?qū)儆邗０奉惥植柯樽硭?。此藥具有升高神?jīng)動(dòng)作電位的閾值和延緩神經(jīng)沖動(dòng)傳導(dǎo)的作用，因此常用于外科手術(shù)麻醉[1]。在本次研究中，筆者根據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)發(fā)布的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[2]，使用HPLC法對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體的含量進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下：

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀；色譜柱：α-酸糖蛋白柱（4.6mm×300mm×5μm）；注射用甲磺酸羅哌卡因（批號(hào)為：160101、160102、160103，由我公司實(shí)驗(yàn)室自制）；甲磺酸羅哌卡因?qū)φ掌?含量為99.5%，購(gòu)自中檢所）；甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品（購(gòu)自中檢所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

本次檢測(cè)的條件為國(guó)家藥典委員發(fā)布的注射用甲磺 酸羅哌卡因標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿中規(guī)定的色譜條件。具體條件為色譜柱：α-酸糖蛋白柱；將0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液-異丙醇（90：10）作為流動(dòng)相；檢測(cè)的波長(zhǎng)：210nm；柱溫：30℃；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：30μl。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取適量的甲磺酸羅哌卡因樣品，加入流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中約含甲磺酸羅哌卡因0.1mg的溶液，將其作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照溶液的制備

精密量取供試品溶液1ml，將其置于200ml的量瓶中，用流動(dòng)相將其稀釋至刻度，搖勻，將其作為對(duì)照品溶液。

2.4 混合對(duì)照品溶液的制備

取甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品與甲磺酸羅哌卡因?qū)φ掌犯鬟m量，用流動(dòng)相將其溶解并稀釋制成每1ml中含0.05mg的混合對(duì)照品溶液。

2.5 進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密量取混合對(duì)照品溶液20μl，將其注入色譜儀，記錄其色譜圖。結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體峰與甲磺酸羅哌卡因峰的分離度大于2.0，符合檢測(cè)的要求。

2.6 進(jìn)行專屬性實(shí)驗(yàn)

按照處方量精密稱取實(shí)驗(yàn)品中的輔料，按照供試品溶液的稀釋方法將其配制成輔料空白溶液。精密量取輔料空白溶液20μl，將其注入色譜儀，并記錄其色譜圖。結(jié)果顯示，輔料空白溶液在甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的出峰處無(wú)干擾。

2.7 進(jìn)行溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取適量的供試品溶液，分別于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h和8h對(duì)其進(jìn)行進(jìn)樣處理，以驗(yàn)證其穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因峰面積的RSD在8h內(nèi)為0.9%，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體峰面積的RSD在8h內(nèi)為1.9%。這說(shuō)明，甲磺酸羅哌卡因及其光學(xué)異構(gòu)體溶液在8h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.8 進(jìn)行甲磺酸羅哌卡因及其光學(xué)異構(gòu)體的線性試驗(yàn)

精密稱取甲磺酸羅哌卡因及其光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品適量，分別配制成每1ml含甲磺酸羅哌卡因及其光學(xué)異構(gòu)體濃度為0.1μg、0.3μg、0.5μg、0.8μg、1.0μg的混合對(duì)照溶液。將所有混合對(duì)照溶液均進(jìn)樣為20μl，記錄其譜圖，然后以每個(gè)混合對(duì)照溶液的峰面積為縱坐標(biāo)，其進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸試驗(yàn)。結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的進(jìn)樣量在2.118ng～21.18ng的范圍內(nèi)，其進(jìn)樣濃度與色譜峰面積的線性關(guān)系良好。

2.9 進(jìn)行檢測(cè)限試驗(yàn)

對(duì)2.8中濃度最低的對(duì)照品溶液進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋，在信噪比為10：1時(shí)計(jì)算其檢測(cè)限。結(jié)果顯示，在將2.8中濃度最低的對(duì)照品溶液注入液相色譜儀后，其色譜峰的信噪比約為10：1，因此可以得出，甲磺酸羅哌卡因的檢測(cè)限為2.164ng，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的檢測(cè)限為2.118ng。

2.10 進(jìn)行回收率試驗(yàn)

取批號(hào)為160101的甲磺酸羅哌卡因樣品9份，將它們分成3組。按照供試品溶液稀釋的方法對(duì)其進(jìn)行配制。在每1ml溶液中分別加入甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體對(duì)照品0.15μg、0.25μg、0.35μg，并按照規(guī)定的方法將其分別配制對(duì)照溶液，然后量取以上溶液各20μl進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，供試品溶液的平均回收率為99.28%，RSD為0.69%。這說(shuō)明此檢測(cè)方法的回收率較好。

2.11 進(jìn)行精密度試驗(yàn)

取適量批號(hào)為160101的甲磺酸羅哌卡因樣品，按照規(guī)定的配制方法將其配制成混合對(duì)照品溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液。然后在不同的日期，由不同的人員用不同的儀器在規(guī)定的檢測(cè)條件下對(duì)對(duì)照品溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的RSD為1.26%。這說(shuō)明此檢測(cè)方法的精密度良好。

2.12 進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)

取適量取批號(hào)為160101的甲磺酸羅哌卡因樣品，按照規(guī)定的配制方法將其配制成混合對(duì)照品溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液各6份，再按照規(guī)定的檢測(cè)條對(duì)其進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的RSD為1.02%。這說(shuō)明此檢測(cè)方法的重復(fù)性良好。

2.13 進(jìn)行耐用性試驗(yàn)

取適量批號(hào)為160101的甲磺酸羅哌卡因樣品，按照規(guī)定的配制方法將其配制混合對(duì)照品溶液、對(duì)照溶液和供試品溶液，并將其流速分別調(diào)整為1.0ml/分、0.8ml/分、1.2ml/分，將其流動(dòng)相的pH值調(diào)整為6.8，7.1，7.4，將其柱溫調(diào)整為25℃、30℃、35℃。分別精密量取以上各溶液20μl進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果顯示，上述溶液在檢測(cè)條件發(fā)生輕微改變后，其光學(xué)異構(gòu)體的峰分離度仍符合要求，對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯影響。這說(shuō)明此檢測(cè)方法的耐用性較好[3]。

2.14 進(jìn)行光學(xué)異構(gòu)體檢查

取適量批號(hào)為160101、160102和160103的甲磺酸羅哌卡因樣品，按照規(guī)定的配制方法將其配制供試品溶液，并將其流速調(diào)整為1.2ml/分。在35℃的條件下按照標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)@三組供試品溶液進(jìn)行光學(xué)異構(gòu)體檢查。檢查的結(jié)果為，160101號(hào)樣品光學(xué)異構(gòu)體的含量為0.23%，160102號(hào)樣品光學(xué)異構(gòu)體的含量為0.26%，160103樣品光學(xué)異構(gòu)體的含量為0.28%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 光學(xué)異構(gòu)體的檢查結(jié)果（%）

3 討論

本次研究的結(jié)果顯示，甲磺酸羅哌卡因光學(xué)異構(gòu)體的進(jìn)樣量在2.118ng～21.18ng范圍內(nèi)，其進(jìn)樣濃度與色譜峰面積的線性關(guān)系良好，其平均回收率為99.28%，RSD為0.69%（n=9）。這說(shuō)明，用HPLC法對(duì)注射用甲磺酸羅哌卡因中光學(xué)異構(gòu)體的含量進(jìn)行檢測(cè)具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。此方法值得推廣使用。

[1] 武玉潔,程瑤,陳芳芳,等.一種鹽酸羅哌卡因注射液及其制備方法[P].N104208020A.2014.

[2] 曹冬冬.HPLC法測(cè)定甲磺酸羅哌卡因R對(duì)映體的含量.福建分析測(cè)試[J]，2011,20（2）：40～41.

[3] 注射用甲磺酸羅哌卡因標(biāo)準(zhǔn)（征求意見(jiàn)稿）[R].國(guó)家藥典委員會(huì).2015.

TQ460.7

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2095-7629-（2017）7-0118-03