譚宏超 李 榮 譚汝強

(1云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院昆明 650092；2云南珍竹農(nóng)業(yè)科技有限公司云南嵩明 661700)

龍頭竹組培快繁技術(shù)研究

譚宏超1李 榮1譚汝強2

(1云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院昆明 650092；2云南珍竹農(nóng)業(yè)科技有限公司云南嵩明 661700)

試驗研究了龍頭竹不同外植體類型、不同消毒藥劑及消毒時間對組培效果的影響，以及不同煉苗時間、不同育苗基質(zhì)、不同肥料種類及施肥方式對組培苗移栽成活率和發(fā)筍率的影響。結(jié)果表明:龍頭竹播種苗稈芽是最適合的組培外植體，外植體消毒以0.1%氯化汞、消毒7 min效果最好；組培苗移栽后煉苗9 d，育苗基質(zhì)宜采用20%蛭石和80%珍珠巖混合基質(zhì)，移栽15 d后葉面施用0.3%氮磷鉀復(fù)合肥組培苗生長狀況最好。

龍頭竹；組織培養(yǎng)；繁殖技術(shù)

龍頭竹也叫泰山竹 (Bambusa vulgaris Schrader ex Wendland)，是禾本科竹亞科簕竹屬植物[1]。竹株高8～15 m，直徑5～9 cm，節(jié)間長20～30 cm，稈基部數(shù)節(jié)節(jié)內(nèi)具短氣生根，并于籜環(huán)上下具灰白色絹毛。稈下部開始分枝，每節(jié)數(shù)枝至多枝簇生，主枝較粗長。龍頭竹產(chǎn)于云南南部，多生于低海拔地區(qū)河邊或疏林中，廣西、廣東、香港、福建有引栽。龍頭竹竿可用于建筑、造紙，也可作大棚支架用材，竹筍美味可口、營養(yǎng)豐富，竹叢優(yōu)美，常用于園林造景。龍頭竹適應(yīng)性較強，在世界120個國家和地區(qū)都有引種栽培。

竹子繁殖主要以埋鞭、埋稈、埋節(jié)等傳統(tǒng)的無性繁殖方法為主[2]，但這些方法存在繁殖系數(shù)低、勞動強度大、種苗運輸不便等問題，無法滿足生產(chǎn)所需。組織培養(yǎng)育苗具有繁殖系數(shù)大、快速、去病復(fù)壯等優(yōu)點，且技術(shù)簡單，成本低廉，能為工廠化育苗所接受[3]。本文試驗研究了不同外植體類型、不同消毒藥劑及不同消毒時間對龍頭竹組培效果的影響，同時研究了不同煉苗時間、不同育苗基質(zhì)、不同施肥種類及施用方法對組培苗移栽成活率和發(fā)筍率的影響，以期為龍頭竹的組培快繁提供技術(shù)支撐。

1 試驗地點

云南珍竹農(nóng)業(yè)科技發(fā)展有限公司，嵩明縣竹子組培中心，云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實驗室。

2 試驗材料與方法

2.1 試驗材料

1)外植體。龍頭竹種子、播種苗稈芽、扦插苗稈芽、扦插苗枝芽、成年竹稈芽、成竹枝芽。

2)培養(yǎng)基。采用MS基本培養(yǎng)基。成分為大量元素20 mg/L，微量元素5 mg/L，鐵鹽5 mg/L，有機物 2 mg/L，肌醇 0.5 g/L，蔗糖 30 g/L，瓊脂(5.0～6.0)g/L。在組織培養(yǎng)不同階段添加不同的生長調(diào)節(jié)物質(zhì):外植體叢芽誘導(dǎo)階段添加1.5%6－BA，叢芽增殖階段添加2.0%6－BA，生根培養(yǎng)階段則采用1.0%6－BA和0.3%NAA相配合[4]。

3)消毒藥劑。酒精、次氯酸鈉和氯化汞。

2.2 試驗設(shè)計與方法

2.2.1 外植體的準(zhǔn)備

種子選擇色亮、粒大飽滿、無病蟲害的新鮮種子。枝條選取剛停止生長、枝稍展葉3～7片，基部枝箕枯黃或者開始剝落的枝條；稈節(jié)選取稈中、上部、枝籜緊裹、腔徑小的竹節(jié)，側(cè)芽末萌發(fā)或剛萌發(fā)。

種子處理與消毒:小心剝?nèi)シN皮獲得具有完整胚的竹種子，將種子放入干凈的培養(yǎng)瓶中，每瓶100～120粒。用自來水清洗數(shù)遍后加水至培養(yǎng)瓶容積的2/3左右浸泡種子12 h，再清洗一次種子，轉(zhuǎn)至超凈工作臺進(jìn)行消毒。種子消毒是先用無菌水清洗2次，再用氯化汞或次氯酸納浸泡1～2 h，之后再用無菌水清洗3次。

枝條處理與消毒:將選取的新鮮竹稈或枝條剝?nèi)ト~片和葉鞘，剪下稈芽或枝芽，留4～5 cm，芽兩端各2 cm；放入干凈的培養(yǎng)瓶中，每瓶15～20個，自來水沖洗數(shù)遍后移入超凈工作臺。枝條消毒是將枝芽或稈芽先用無菌水清洗2次，然后用酒精清洗10 s，再用氯化汞或次氯酸納浸泡，之后再用無菌水清洗 3 次[5－6]。

2.2.2 接種與培養(yǎng)

在超凈工作臺內(nèi)，將種子接種到MS培養(yǎng)基中，每瓶4～5顆；枝芽或稈芽每瓶3個；接種完成后，在瓶外做好標(biāo)記，放到培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)。在接種后每天都進(jìn)行觀察和記錄。

種子幼苗的轉(zhuǎn)接:在幼苗長出第3片葉子時，就可以進(jìn)行轉(zhuǎn)接。在超凈工作臺內(nèi)，將幼苗打頂，去根，并轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基中，每瓶2～3棵。當(dāng)幼苗分化出多個叢芽時，去掉種子，將分化的苗分成2～3株，用同樣的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，10～15 d轉(zhuǎn)接1次。

枝芽或稈芽的轉(zhuǎn)接:在枝芽或節(jié)芽長到3～5 cm長時，剪去芽的頂端，去除頂端優(yōu)勢，并更換為叢芽增殖的培養(yǎng)基。培養(yǎng)20 d左右開始分化，記錄分化率，待叢芽長到2～3 cm，去掉枝條，轉(zhuǎn)接到相同的培養(yǎng)基，使其繼續(xù)分化。之后12～15 d轉(zhuǎn)接1次。

在分化出一定數(shù)量的苗后，將長得壯的苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基中添加6－BA 1.0 mg/L和萘乙酸0.3 mg/L。培養(yǎng)12 d左右，培養(yǎng)苗開始長根，記錄根的生長情況。

上述各培養(yǎng)階段試驗室的溫度均控制在25～30℃，每日輔助光照10 h，光照強度約1 600 Lx[4]。

2.2.3 不同外植體的組培效果

選擇龍頭竹6種外植體:龍頭竹種子、播種苗稈芽、扦插苗稈芽、扦插苗枝芽、成年竹稈芽、成竹枝芽，在相同條件下進(jìn)行組培試驗。記錄并統(tǒng)計不同外植體的發(fā)芽率、污染率、分化率、繼代成功率。

2.2.4 消毒藥劑及消毒時間對組培效果的影響

用播種苗稈芽作為外植體進(jìn)行消毒藥劑及消毒時間對組培效果的影響試驗。

選用酒精、次氯酸鈉、氯化汞3種消毒藥劑對外植體進(jìn)行消毒。每種消毒藥劑設(shè)置3種濃度水平:酒精體積分?jǐn)?shù)70%、75%和80%；次氯酸鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%、2.0%和2.5%；氯化汞質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.08%、0.10%和0.12%。

根據(jù)預(yù)備試驗，對消毒效果較好的次氯酸鈉和氯化汞再進(jìn)行消毒時間影響組培效果的試驗。設(shè)置3個消毒時間，次氯酸鈉的消毒時間為5 min、10 min、15 min，氯化汞的消毒時間為4 min、7 min、10 min。

分別記錄試驗結(jié)果，并統(tǒng)計外植體的發(fā)芽率、污染率和分化率。

2.2.5 煉苗時間對組培苗生長的影響

將生根的組培苗從培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到有遮蔭網(wǎng)的溫棚內(nèi)，遮蔭度為50%～70%[7]。敞開瓶口煉苗。以播種苗稈芽的組培苗為試驗材料在相同基質(zhì)中進(jìn)行煉苗時間對苗木生長影響的試驗。煉苗時間設(shè)置0、3、6、9、12、15 d 6種水平。煉苗后進(jìn)行移栽，移栽90 d后調(diào)查統(tǒng)計苗木的成活率、發(fā)筍率、苗高和每叢株數(shù)。

2.2.6 育苗基質(zhì)對組培苗生長的影響

以扦插苗稈芽的組培苗為試驗材料，分別移植在珍珠巖、蛭石、20%蛭石＋80%珍珠巖、無菌土、當(dāng)?shù)睾谕梁?0%鋸末＋70%紅土等6種基質(zhì)中培育，移栽90 d后調(diào)查統(tǒng)計苗木的成活率、發(fā)筍率、苗高和每叢株數(shù)。

2.2.7 肥料種類和施肥方法對組培苗生長的影響

以在20%蛭石＋80%珍珠巖基質(zhì)中生長的播種苗稈芽的組培苗為試驗材料進(jìn)行肥料種類和施肥方法對組培苗生長影響的試驗。選用4種肥料類型:0.1%尿素、0.1%硝酸銨、0.3%氮磷鉀復(fù)合肥和0.2%磷酸氫二鉀；每種肥料采用2種施肥方式:葉面施肥和地面施肥。

在組培苗移栽15 d后進(jìn)行施肥，移栽120 d后調(diào)查統(tǒng)計苗木的成活率、發(fā)筍率、苗高和每叢株數(shù)。

3 結(jié)果分析

3.1 不同外植體對組培效果的影響

試驗結(jié)果見表1。由表1可見，6種外植體的發(fā)芽率差別不大，均表現(xiàn)出較高的發(fā)芽率；種子和播種苗稈芽的污染率較低；播種苗稈芽和扦插苗枝芽分化率較高；種子、播種苗稈芽、扦插苗稈芽、扦插苗枝芽繼代成功率均較高。綜合各項指標(biāo)，播種苗稈芽最適合作為龍頭竹組培繁殖的外植體，其次是種子和扦插苗枝芽。但由于種子可能會發(fā)生變異，一般不采用；成年竹稈芽和枝芽分化率非常低，不適合用于龍頭竹組培快繁。

表1 不同外植體的組培結(jié)果/%

3.2 不同消毒藥劑及消毒時間對組培效果的影響

不同消毒藥劑及濃度的試驗結(jié)果見表2。從試驗結(jié)果可以看出，用0.10%氯化汞對外植體消毒的試驗效果最好，其發(fā)芽率、污染率、分化率均較高；用2.0%次氯酸鈉對外植體消毒的效果也較好，分化率最高；而用各濃度水平的酒精消毒的外植體，在接種后6～8 d多數(shù)芽出現(xiàn)褐化、死亡現(xiàn)象。因此，酒精不適合用于龍頭竹播種苗稈芽的消毒。

表2 不同消毒藥劑及濃度的組培結(jié)果 /%

從消毒劑消毒時間的試驗結(jié)果看 (表3)，0.1%氯化汞對外植體消毒7 min的試驗效果最好，2.0%次氯酸鈉消毒10 min的試驗效果也較好。統(tǒng)計分析顯示，消毒藥劑和消毒時間對組培苗的分化率的影響不大。

表3 不同消毒藥劑及時間的組培結(jié)果 /%

3.3 不同煉苗時間對組培苗生長的影響

從統(tǒng)計結(jié)果 (表4)可以看出，煉苗6～9 d時移栽的苗木生長效果較好；煉苗時間過短或過長，組培苗的成活率和發(fā)筍率較低，每叢株數(shù)少，竹苗較矮。因此，移栽前宜先煉苗9 d，苗木生長效果較好。

表4 不同煉苗時間組培苗生長情況

3.4 不同育苗基質(zhì)對組培苗生長的影響

試驗統(tǒng)計結(jié)果見表5。可以看出，在6種育苗基質(zhì)中，20%蛭石和80%珍珠巖混合基質(zhì)的組培苗生長最好，成活率高達(dá)95.1%，發(fā)筍率90.6%，每叢13株。因此，龍頭竹組培快繁育苗宜選擇蛭石和珍珠巖的混合基質(zhì)，配比為2∶8。

表5 不同育苗基質(zhì)中組培苗生長情況

3.5 不同肥料種類和施肥方法對組培苗生長的影響

統(tǒng)計結(jié)果見表6。從施肥方式上看，各種肥料類型苗木生長效果均表現(xiàn)為葉面施肥好于地面施肥。從肥料類型看，施用氮磷鉀復(fù)合肥，竹苗生長效果最好。因此，龍頭竹組培苗生長階段宜采用葉面施0.3%氮磷鉀復(fù)合肥。

表6 不同肥料種類和施肥方法的組培苗生長情況

4 小結(jié)

1)龍頭竹播種苗稈芽最適合作為組培繁殖的外植體，其次是扦插苗枝芽和種子。種子相對播種苗稈芽污染率較高，但是種子誘導(dǎo)出叢芽的周期比較短，所以種子和播種苗稈芽均是較好的外植體。

2)外植體消毒以0.1%氯化汞消毒7 min效果最好，能保證較高發(fā)芽率的同時污染最少，并且分化率也非常高。2.0%次氯酸鈉消毒10 min的組培效果也較好，有較高的發(fā)芽率、分化率，并且污染較少。

3)在生根組培苗移栽之前，經(jīng)過9 d左右的時間煉苗，組培苗更容易成活，生長快，苗較健壯。

4)組培苗移栽到20%蛭石和80%珍珠巖混合基質(zhì)中，生長狀況良好。蛭石具有疏松土壤、透氣性好、吸水力強、溫度變化小等特點，有利于作物的生長，還可減少肥料的投入；珍珠巖可以增加營養(yǎng)基質(zhì)的透氣性和吸水性，可作為育苗土的必備成分。

5)組培苗移栽后施用0.3%氮磷鉀復(fù)合肥，組培苗的生長情況更好，可以促進(jìn)苗發(fā)筍和生長，在葉面噴灑肥效更好。

[1] 易同培，史軍義，馬麗莎，等.中國竹類圖志[M].北京:科學(xué)出版社，2008.

[2] 李蓉，曾炳山，何高峰，等.竹子組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展及趨勢[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(11):4405－4407.

[3] 曹雄麗，文韻，陶現(xiàn)靈，等.32種經(jīng)濟竹種的組培及苗木培育技術(shù)的研究[J].林業(yè)調(diào)查規(guī)劃，2012，37(5):128－135.

[4] 單妍.香糯竹組培技術(shù)研究[J].林業(yè)調(diào)查規(guī)劃，2017，42(2):71－75.

[5] 張林林.竹子離體快繁的研究[D].廣州:中國科學(xué)院華南植物園，2008.

[6] 張光楚，王裕霞，譚源杰，等.叢生竹的組培快繁技術(shù)[J].竹子研究匯刊，2004，23(1):13－20.

[7] 郭獻(xiàn)煌.竹子的組培繁殖技術(shù)[J].林業(yè)實用技術(shù)，2006(8):27－28.

Study on Tissue Culture and Rapid Propagation Technology of Bambusa vulgaris Schrader ex Wendland

Tan Hongchao1Li Rong1Tan Ruqiang2
(1.School of Life Sciences， Yunnan Normal University， Kunming 650092， China；2.Yunnan Rare Bamboo Agricultural Science and Technology Development Co.，Ltd.， Songming 661700， Yunnan， China)

The effects of different explant types，different disinfectants and disinfection time on tissue culture of Bambusa vulgaris Schrader ex Wendland were studied experimentally.The effect of different cultivation time，different seedling substrates，different types of fertilizers and fertilization modes on the survival rate and new shoot rate of the transplanted bamboo tissue culture seedlings were also carried out in this study.The result indicated that the bud on the culm of B.vulgaris seedlings was the most suitable explant for tissue culture，and the best disinfection effect was 7 min with 0.1%mercuric chloride.After transplanting，the tissue culture seedlings were in the best growth through being hardened for 9 days in the mixed substrate of 20%vermiculite and 80%pearlite，and being fertilized with 0.3%NPK compound on leaves after transplanting for 15 days.

KeywordsBambusa vulgaris Schrader ex Wendland， tissue culture， propagation technology

10.13640/j.cnki.wbr.2017.06.005

美國環(huán)球生態(tài)集團項目 (編號:2015026)；云南珍竹農(nóng)業(yè)科技有限公司項目 (編號:2015019)。

譚宏超 (1963－)，男，教授，長期從事竹類研究及開發(fā)工作。E－mail:ynbamboo＠126.com。

譚汝強 (1986－)，男，實驗師，從事植物研究及開發(fā)工作。E－mail:kmbamboo＠126.com。