岳志敏 陳新梅 夏夢瑤 李艷蘋

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟南 250355)

雪菊，學(xué)名蛇目菊、兩色金雞菊，雙色金雞菊種植物，在新疆昆侖山一帶，民間稱之為“清三高花”，現(xiàn)代研究表明雪菊其有降血糖、降血壓、降血脂的功效[1]。長期以來昆侖雪菊被當(dāng)?shù)鼐用癞?dāng)花茶飲用，新疆維吾爾醫(yī)院也作為一種維藥材應(yīng)用[2]。目前，已從雪菊中分離鑒定出300多種天然成分[3]，其中含有黃酮類物質(zhì)含量高達12% ，遠超過其他各種菊花類。研究表明，黃酮類化合物可有效地清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細胞的退化、衰老及癌變[4]。本實驗通過考察不同濃度的雪菊提取液在對抗東莨菪堿和亞硝酸鈉所致記憶障礙的影響，為雪菊在益智保健等方面的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 儀器

XZC-5A 型小鼠跳臺儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站提供)。

1.2 試劑

雪菊(新疆潤元本草有限公司)；氯化鈉(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，分析純)；氫溴酸東莨菪堿注射液(遂成藥業(yè)股份有限公司)；亞硝酸鈉(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，分析純)。

1.3 動物

質(zhì)量18～22 g，SPF級雄性昆明種小鼠。由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)檢中心實驗動物室提供。動物合格證編SCXK(魯)20160007。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 雪菊的提取及不同劑量組給藥濃度的配制

稱取雪菊5.0 g，研碎成粗粉后，按料液比1∶10加入蒸餾水50 mL。90 ℃浸漬20 min，用16層紗布過濾，擠壓出全部濾液后，再向濾渣中加入50 mL蒸餾水重復(fù)以上操作。合并兩次濾液得原液。

該浸出液原液總黃酮含量為11.14mg/mL，為高劑量組的直接用藥；取部分原液用蒸餾水稀釋為原液濃度的1/2，為中劑量組給藥濃度，即總黃酮含量為5.57 mg/mL；取部分原液稀釋為原液濃度的1/4，為低劑量組給藥濃度，即總黃酮含量為2.78 mg/mL[5]。

小鼠每天給藥兩次，每次0.1 mL/10 g，高、中、低劑量組分別按如上濃度給藥，空白組給等體積生理鹽水(0.9%的NaCl水溶液)。

2.2 雪菊提取液對東莨菪堿致記憶獲得障礙模型小鼠的影響

雄性小鼠40只，在實驗室中適應(yīng)飼養(yǎng)7 d之后，按照體重隨機分成4組，每組10只。分別為空白組，雪菊提取液低、中、高劑量組。小鼠每日自由取食，不限攝食量及飲水量。每日注意觀察每組小鼠排泄情況及健康狀況。

在連續(xù)灌胃給藥21 d后，在末次給藥30 min后、跳臺訓(xùn)練30 min前，用東莨菪堿注射液以1.5 mg/kg的劑量腹腔注射，跳臺訓(xùn)練時間為3 min，24 h后進行跳臺行為學(xué)實驗。記錄小鼠5 min內(nèi)受到電擊的總次數(shù)，定義為跳臺錯誤次數(shù)。小鼠第一次跳下平臺的時間記為潛伏期。

結(jié)果表明，與空白組相比，低、中、高劑量組的跳臺錯誤次數(shù)均有不同程度的減少，表明不同濃度的雪菊水提物對小鼠記憶獲得障礙均有不同程度的改善作用，且中劑量組具有極為顯著的差異性，低劑量組和高劑量組的數(shù)據(jù)也均呈現(xiàn)不同程度的顯著性差異。

表1 雪菊提取液對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙模型的影響Table 1 Effects of coreopsis tinctoria water extract on memory impairment in mice induced by scopolamine

注：與空白組比較，***P<0.001，**P<0.01，*P<0.05

2.3 雪菊提取液對亞硝酸鈉致記憶鞏固障礙模型小鼠的影響

另取小鼠40只，分組及給藥同2.2項。

在連續(xù)灌胃給藥21 d后，末次給藥30 min后跳臺訓(xùn)練，在跳臺訓(xùn)練后，立即皮下注射亞硝酸鈉，劑量為100 mg/kg，跳臺訓(xùn)練時間為3 min。24 h后進行跳臺行為學(xué)實驗，跳臺實驗為5 min。

表2 雪菊提取液對亞硝酸鈉致小鼠記憶獲得障礙模型的影響Table 2 Effects of coreopsis tinctoria water extract on memory impairment in mice induced by natrium nitrosum

注：與空白組比較，**P<0.01，*P<0.05

經(jīng)跳臺實驗數(shù)據(jù)檢測，發(fā)現(xiàn)與空白組相比，低、中、高劑量組的小鼠跳臺錯誤次數(shù)均有明顯的減少，呈現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)顯著差異，且中劑量組不僅極為顯著地減少了跳臺錯誤次數(shù)，潛伏期與空白組相比也有較為顯著的延長。

3 討 論

雪菊水提物對東莨菪堿所致記憶獲得障礙模型小鼠影響的數(shù)據(jù)表明，雪菊提取液對修復(fù)記憶獲得障礙具有明顯改善作用，原因可能是雪菊提取物總黃酮對于具有中樞和周圍神經(jīng)的抑制作用的較低濃度東莨菪堿造成抑制的大腦皮質(zhì)有顯著的拮抗作用，其改善作用可能與增強中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)，從而修復(fù)了東莨菪堿引起的健忘傾向，降低了小鼠細胞因攝入部分東莨菪堿而造成的細胞麻痹作用。

雪菊水提物對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙模型小鼠影響的數(shù)據(jù)表明，雪菊提取液對修復(fù)記憶鞏固障礙也有明顯改善作用，可能與雪菊水提取物能夠有效解除小鼠亞硝酸鈉中毒而引發(fā)的記憶鞏固障礙有關(guān)。

通過對不同濃度雪菊提取物總黃酮對東莨菪堿及亞硝酸鈉所致兩種記憶障礙影響作用的實驗研究，以及綜合本實驗組前期探索雪菊水提物對乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠的影響[6]，發(fā)現(xiàn)雪菊總黃酮水提液在整個記憶過程所致障礙中均呈現(xiàn)有效的改善作用，并且改善效果均呈現(xiàn)顯著性差異。其作用機制可能與雪菊水提物中的總黃酮能夠清除自由基[7]，抗氧化等作用有關(guān)。

小鼠跳臺實驗做為動物行為學(xué)的測試方法，存在一定個體差異，且實驗環(huán)境、動物飲食及晝夜節(jié)律對實驗結(jié)果也有一定的影響[8]，因此本課題組同時也考察了另外一種行為學(xué)測試工具——避暗儀，對雪菊水提液的作用進行考察，實驗結(jié)果與本研究所采用的跳臺儀的結(jié)果基本一致，這從另一個側(cè)面也證實了雪菊水提液對記憶障礙具有確切的作用。

[1] 方煊,李雅麗,陳新梅.雪菊黃酮對脂肪變肝細胞的降脂效果[J].溫州醫(yī)科大學(xué)報,2016,46(10):720～723.

[2] 張燕，李琳琳，木合布力·阿布力孜 等.新疆昆侖雪菊5種提取物對α-葡萄糖苷酶活性的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(7):166～169.

[3] 江虹，秦勇.雪菊活性成分提取及引種研究進展[J].天津農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，21(8)：46-50.

[4] 方瑞萍，唐輝，黃劍 等.雪菊的藥理作用及營養(yǎng)成分的分析方法研究進展[J].材料導(dǎo)報A:綜述篇,2014,28(10):143～146.

[5] 邢佰穎，陳新梅，秦樂 等.昆侖雪菊總黃酮對小鼠負重游泳的影響[J].化工時刊，2017，31(1)：9～11.

[6] 秦樂，陳新梅，邢佰穎 等.雪菊總黃酮對小鼠體重及記憶再現(xiàn)障礙的影響[J].化工時刊，2017，31(2)：10～12.

[7] 劉博奧，劉繼國，劉偉 等.天山雪菊不同溶劑提取物的抗氧化活性研究[J].中國釀造，2014,33(3)：71～75.

[8] 李運明，匡永勤，孫年怡 等.神經(jīng)科學(xué)研究中動物行為學(xué)實驗設(shè)計需要考慮的幾個問題[J].西南軍醫(yī)，2015,17(5)：595～597.