余麗 晏愛(ài)芬 陳瑤

摘 要：試驗(yàn)按L9（34）正交設(shè)計(jì)，以多糖含量作為多糖提取率指標(biāo)，對(duì)野生美味牛肝菌子實(shí)體多糖提取條件（料液比、提取溫度、提取時(shí)間、乙醇沉淀濃度）進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，4個(gè)因素對(duì)野生美味牛肝菌多糖提取率的影響表現(xiàn)為料液比>提取溫度大于乙醇沉淀濃度>提取時(shí)間，其中料液比和提取溫度的影響分別達(dá)到極顯著和顯著水平，確定野生美味牛肝菌多糖提取的最佳工藝為料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時(shí)間2 h、乙醇濃度95%。

關(guān)鍵詞：美味牛肝菌；野生；多糖；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：S643.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2018.12.005

Abstract： The experiment was conducted to optimize the extraction conditions of polysaccharide from Boletus edulis with the orthogonal design L9（34）， 4 conditions were set including material to solvent ratio， extraction temperature， extraction time， and ethanol concentration， the polysaccharide content was used as the index of polysaccharide extraction efficiency. The results showed that the effects of 4 conditions on the polysaccharide extraction efficiency of B. edulis were as follows： material to solvent ratio>extraction temperature>ethanol concentration>extraction time， in which the effects of material to solvent ratio and extraction temperature were significant. The optimum extraction process which screened by the orthogonal experiment was as follows： material to solvent ratio （1∶25）， extraction temperature （90 ℃）， extraction time （2 h）， and ethanol concentration （95%）.

Key words： Boletus edulis； wild； polysaccharides； orthogonal test

美味牛肝菌（Boletus edulis Ball. ex Fr）在1821年由法國(guó)科學(xué)家皮埃爾發(fā)現(xiàn)，并由瑞典科學(xué)家Elias Magnus Fries命名[1]，因其肉厚而細(xì)軟、味道鮮美，富含蛋白質(zhì)、多糖、纖維素、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等物質(zhì)，倍受消費(fèi)者喜愛(ài)，同時(shí)是我國(guó)重要的出口野生食用菌[2-4]。據(jù)報(bào)道，美味牛肝菌多糖成分在免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和腫瘤等疾病的臨床治療上具有免疫調(diào)節(jié)活性作用，因而被稱為“生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑”[5-8]。這些活性多糖理化性質(zhì)、提取工藝已成為多糖研究的前沿領(lǐng)域，取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，但有關(guān)美味牛肝菌多糖提取條件優(yōu)化的研究報(bào)道較少。

本研究對(duì)野生美味牛肝菌多糖含量提取條件進(jìn)行優(yōu)化，旨在為多糖高效提取和利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材 料

野生美味牛肝菌為市售，并經(jīng)保山學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室鑒定，子實(shí)體洗凈、曬干、粉碎后備用；人工美味牛肝菌組織由保山學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，將菌絲培養(yǎng)分化形成的組織曬干、粉碎后備用。

1.2 方 法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 干燥的野生美味牛肝菌子實(shí)體粉末采用熱水提取—乙醇沉淀的方法進(jìn)行多糖提取，以料液比、提取溫度、提取時(shí)間、乙醇沉淀濃度為試驗(yàn)因素[5-8]，按L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以野生美味牛肝菌子實(shí)體的多糖含量為指標(biāo)進(jìn)行多糖提取最佳條件篩選，所用因素和水平見(jiàn)表1。

1.2.2 多糖含量的測(cè)定 利用苯酚—硫酸法，分別制備濃度為0， 0.04， 0.08， 0.12， 0.16， 0.20 mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“標(biāo)準(zhǔn)溶液1.6 mL+蒸餾水2.4 mL+苯酚2 mL+濃硫酸10 mL”配比混勻后，用分光光度計(jì)在490 nm處測(cè)定吸光值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；以正交試驗(yàn)各處理提取出的多糖提取液1.6 mL替代葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，其他成分不變，測(cè)定490 nm吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖含量，作為衡量野生美味牛肝菌多糖提取率的指標(biāo)。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

通過(guò)SPSS19.0軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正交統(tǒng)計(jì)分析[9-12]。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，線性回歸方程為y = 3.357 1x-0.022，R2= 0.995 5，符合試驗(yàn)要求，可通過(guò)線性回歸方程轉(zhuǎn)換得到1 g美味牛肝菌中的多糖含量。多糖含量m=CV，其中C為提取液中多糖質(zhì)量濃度，V為提取液的總體積，則多糖含量計(jì)算公式為：m=（y+0.022）/3.357 1×V。

2.2 4種因素對(duì)野生美味牛肝菌多糖提取率的影響

根據(jù)表2中T值和表3中的F值可知，4個(gè)因素對(duì)野生美味牛肝菌多糖提取率的影響順序表現(xiàn)為：料液比（A）>提取溫度（B）>乙醇濃度（D）>提取時(shí)間（C），其中因素A和B對(duì)多糖提取率的影響分別達(dá)到極顯著（P<0.01）和顯著水平（P<0.05）；根據(jù)表1中的極差R可知，因素A、B、C、D分別以A2、B3、C1、D3水平多糖提取率最高，說(shuō)明正交試驗(yàn)篩選4個(gè)因素的最佳組合為A2B3C1D3，即料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時(shí)間2 h、乙醇濃度95%；由表3中A+B+C+D處理的F值可知，4個(gè)因素對(duì)野生美味牛肝菌多糖提取率的總體效益顯著（P<0.05），其中以A3B3C1D2，即料液比1∶30、提取溫度90 ℃、提取時(shí)間2 h，乙醇濃度90%時(shí)，提取率最高，這與正交試驗(yàn)篩選的最佳組合A2B3C1D3不一致，故其最佳提取工藝有待于進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)中，4個(gè)因素對(duì)野生美味牛肝菌多糖提取率的影響由高至低依次為料液比（A）、提取溫度（B）、乙醇濃度（D）、提取時(shí)間（C），其中料液比和提取溫度的影響達(dá)顯著水平；根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果篩選4個(gè)因素的優(yōu)水平為A2B3C1D3，即料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時(shí)間2 h、乙醇濃度95%，其中料液濃縮時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)破壞多糖結(jié)構(gòu)，致使多糖損失率增加，故其優(yōu)水平為1∶25，而提取溫度和乙醇濃度分別以高溫和高乙醇濃度效果較好，可加快分子動(dòng)力，利于細(xì)胞膜解離多糖滲出。但因優(yōu)水平與正交試驗(yàn)9個(gè)處理中效果最佳的組合A3B3C1D2即料液比1∶30、提取溫度90 ℃、提取時(shí)間2 h、乙醇濃度90%不一致，故野生美味牛肝菌多糖提取效果的驗(yàn)證試驗(yàn)有待于進(jìn)一步開(kāi)展。

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