□ 王 穎 肖 萌 程曉云 李建梅 普榮香 云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院

在食品致病菌檢驗的過程中，通過分析食品行業(yè)運(yùn)行狀況，人們發(fā)現(xiàn)要保證食品安全，提高檢測方法的安全性，應(yīng)該建立食品微生物快速檢測方法。在這種背景下，全新的檢測技術(shù)逐步出現(xiàn)，例如PCR、DNA雜交、基因芯片以及基因探針等技術(shù)。其中，基因芯片作為一種全新的微生物檢測技術(shù)形式，通過相關(guān)技術(shù)的運(yùn)用，可以實現(xiàn)檢測方法的集成性、微型化特點，基因芯片應(yīng)用于微生物檢測有較高的價值性。

1 基因芯片檢測的基本原理及優(yōu)勢

1.1 基因芯片檢測的基本原理

基因芯片檢測的主要原理是通過不同基因寡核苷酸點樣在芯片的表面，微生物樣品的DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后制備熒光標(biāo)記探針，與芯片上的寡核苷酸點雜交，通過檢測雜交信號的強(qiáng)度、分析信號分布狀態(tài)，進(jìn)行目標(biāo)微生物檢測。在這種檢測技術(shù)使用的過程中，可以通過對育種環(huán)境以及媒介微生物的集合，進(jìn)行微生物群體基因的表達(dá)。這種檢測技術(shù)與傳統(tǒng)微生物檢測方法相比，快速簡便，有高效敏感性高的特點，而且在一些自動化的檢測環(huán)境下，可以有效避免由于操作人員操作錯誤出現(xiàn)的誤差，充分滿足了食品致病菌檢測技術(shù)的基本需求[1]。

1.2 基因芯片檢測的優(yōu)勢

基因芯片檢測技術(shù)優(yōu)勢明顯，第一，基因芯片可以實現(xiàn)對多種致病菌同時進(jìn)行檢測，通過一次實驗可以得到全部的檢測結(jié)果；第二，在操作技術(shù)運(yùn)用的過程中，可以在較短的時間內(nèi)檢測出結(jié)果，快速高效，提升該檢測方法的應(yīng)用價值；第三，特異性相對較強(qiáng)，檢測方法相對敏感，而且，在基因檢測方法確定的過程中，可以逐漸增強(qiáng)基因檢測的價值，并展現(xiàn)出基因檢測的安全性，滿足食品安全監(jiān)測的最終價值，提升食品檢測工作的整體質(zhì)量。所以，通過基因芯片檢測方法的使用，可以充分滿足食品致病菌檢測的優(yōu)勢性，展現(xiàn)檢測工作的整體價值，為檢測行業(yè)的發(fā)展提供保障[2]。

2 基因芯片檢測技術(shù)存在的問題

通過對基因芯片技術(shù)的研究分析，可以發(fā)現(xiàn)其檢測形式具有快速靈敏的特點，而且，可以平衡檢測大量的樣本。但是，在現(xiàn)階段食品致病菌檢測的過程中，存在著一定限制性因素，具體問題如下：第一，在現(xiàn)階段基因芯片檢測中，通常采用熒光標(biāo)記技術(shù)，這種設(shè)計方案，不僅需要昂貴的芯片制作系統(tǒng)，也需要昂貴的激光共聚焦掃描儀，導(dǎo)致成本支出相對較高，為這種檢測技術(shù)的使用帶來影響；第二，基因芯片操作技術(shù)相對復(fù)雜、費(fèi)時，而且，對于操作人員的專業(yè)素養(yǎng)要求較高，這些特點也制約芯片技術(shù)的使用；第三，由于樣品目標(biāo)微生物的放大反應(yīng)，容易出現(xiàn)樣品污染，從而影響檢測質(zhì)量，一些研究人員在檢測的過程中，會結(jié)合半導(dǎo)體技術(shù)以及納米技術(shù)來提高檢測方案的靈敏度；第四，生物芯片微細(xì)制備技術(shù)限制技術(shù)的創(chuàng)新，導(dǎo)致技術(shù)不完善[3]。

3 基因芯片檢測技術(shù)及程序分析

3.1 基因芯片檢測技術(shù)

在現(xiàn)階段進(jìn)行芯片檢測中，主要是將核酸探針固定在物體表面，通過顯微打印技術(shù)的運(yùn)用，實現(xiàn)與標(biāo)記樣品的雜交處理，并通過檢測雜交信號，實現(xiàn)對樣品的有效確定。在使用這種檢測方法的過程中，對于一些極低量的信號也可以得到檢測通常狀況下，基因芯片技術(shù)檢測，可以提高檢測質(zhì)量，整個檢測過程中應(yīng)該進(jìn)行樣品準(zhǔn)備、芯片制作、樣品與探針雜交、信號檢測實現(xiàn)基因芯片的有效運(yùn)用[4]。而且，在基因芯片檢測的過程中，具體優(yōu)勢體現(xiàn)在以下幾個方面。第一，在食品致病菌檢測的過程中，通過基因芯片檢測，可以進(jìn)行大批量項目的檢測，通過一次實驗便可檢測出全部的結(jié)果。第二，在使用基因芯片檢測技術(shù)的過程中，可以縮短食品致病菌的檢測時間，并提升檢測的整體效果，在食品致病菌檢測中，最短檢測時間可以縮短到4小時，保證檢測方案的有效性。第三，檢測方法的高度特異性?；驒z測技術(shù)，具有較高的靈敏度。一種基因芯片可以識別18種治病病毒、原核生物和真核生物，逐漸縮短基因芯片檢測的時間，并提高食品致病菌檢測的效率[5]。

3.2 食品致病菌中基因芯片檢測程序分析

3.2.1 PCR擴(kuò)增物及基因芯片探針技術(shù)

在食品致病菌檢測中，16sRNA在不同的細(xì)菌中的結(jié)構(gòu)、功能保守性相對較強(qiáng)[6]。在16sRNA基因整合中，應(yīng)該對恒定區(qū)進(jìn)行序列的整合，充分保障恒定去及可變區(qū)交錯排列，保障引物致病菌基因片段的擴(kuò)增價值，并展現(xiàn)檢測探針制作的科學(xué)性。

3.2.2 芯片制備

在芯片表面介質(zhì)分析中，需要對氨基化、硅烷化以及二硫鍵袖子進(jìn)行處理，實現(xiàn)基因芯片檢測的價值。同時，通過基因芯片點的利用，將引物以及探針DNA分子進(jìn)行點樣儀修飾，并制作成芯片。其基本方法體現(xiàn)在以下幾個方面：第一，芯片合成，例如，在化學(xué)噴射法運(yùn)用的過程中，應(yīng)該認(rèn)識到化學(xué)噴射法以及接觸點法的特點，結(jié)合技術(shù)優(yōu)勢提高芯片制備的有效性。第二，原位合成芯片。在利用高壓電噴射合成法的過程中，應(yīng)該實現(xiàn)光引導(dǎo)原位合成技術(shù)，展現(xiàn)載體構(gòu)建的整體價值。

3.2.3 食品致病菌樣品處理

在待測致病菌樣品培養(yǎng)中，需要在培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行裂解，并提出致病菌中的模板DNA，然后采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR擴(kuò)增，通過擴(kuò)增出產(chǎn)物的Fenix，進(jìn)行熒光標(biāo)記，熒光標(biāo)記產(chǎn)物可以直接運(yùn)用在雜交實驗之中。

3.2.4 雜交技術(shù)

在擴(kuò)增標(biāo)記技術(shù)使用中，應(yīng)該進(jìn)行待測致病菌DNA標(biāo)品的基因處理，通過芯片特異性DNA雜交技術(shù)的運(yùn)用，進(jìn)行雜交處理。在檢測分析致病菌時，通過雜交技術(shù)可以保障檢測結(jié)果的有效性。

3.2.5 檢測結(jié)果的分析

使用芯片掃描儀可以保證檢測方案的有效性，提高食品致病菌檢測結(jié)果的價值，實現(xiàn)監(jiān)測的合理性。

4 結(jié)語

在現(xiàn)階段食品致病菌檢測方案分析中，為了充分保障檢測結(jié)果的有效性，應(yīng)該針對食品食品致病菌檢測中存在的問題，進(jìn)行檢測方案的完善，以提高食品致病菌檢測的整體效率，滿足現(xiàn)代食品行業(yè)運(yùn)行及發(fā)展的綜合需求。通常狀況下，在食品致病菌檢測研究中，采用PCR、基因芯片檢測技術(shù)以及基因探針檢測技術(shù)等，可以逐漸提高檢測工作的整體效率，并縮短檢測時間，為現(xiàn)代食品致病菌檢測方案的優(yōu)化提供支持。

[1]唐廷廷,韓國全,王利娜,等.分子生物學(xué)技術(shù)在食源性致病菌檢測中的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,2016(9):3497-3502.

[2]任莉莉,從彥麗.用于食源性疾病病原菌診斷的基因芯片研究及評價[J].食品科學(xué),2011(4):208-211.

[3]馮松凱,李苗云,徐超,等.毛皮中6種致病菌基因芯片檢測方法的建立和應(yīng)用[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2013(5):379-383.

[4]張海波,李楊,李景輝.分子生物學(xué)技術(shù)在食品致病菌檢測中的應(yīng)用[J].中國保健營養(yǎng)旬刊,2013(9).

[5]郭啟新,張蕾,張柏棋,等.液相基因芯片法同時檢測3種食源性病原菌[J]. 食品科學(xué),2013(16):191-195.

[6]鐘軍華,高水桃.基于DNA水平的食品致病菌檢測方法應(yīng)用研究[J].教育界:高等教育研究,2013(33):81-81.